(20)--第五章细胞化学染色(1).ppt

用检验拨开血液学的迷雾第五章 骨髓造血细胞的秘密目录血管在血栓形成中的作用1红细胞与单核细胞发育的秘密2粒细胞发育的秘密1淋巴细胞与浆细胞发育的秘密3巨核细胞与非造血细胞发育的秘密4骨髓涂片检验技术5目录血管在血栓形成中的作用1细胞化学染色66细胞化学染色u细胞化学染色是以细胞形态学为基础，运用化学、生物化学等技术对细胞内的各种化学物质(包括蛋白质、糖类、酶类、核酸、脂类、无机盐等)作定性、定位、半定量分析的方法。u细胞化学染色在临床上主要用于:辅助判断白血病的细胞类型:不同系列细胞所含的化学物质成分、含量及分布各有不同，且随着细胞的发育成熟，化学物质的成分、含量等会发生相应的变化，因此其细胞化学染色结果也不同。u据此可推断细胞所属系列，如髓过氧化物酶染色、酯酶染色等。临床上许多白血病细胞的诊断和分型诊断需要结合细胞化学染色。u血液病及其他非血液病的诊断和鉴别诊断:在不同的病理情况下，血细胞内化学物质成分及含量会发生变化，可用于疾病的轴助诊断及鉴别诊断，如中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色等。因此，细胞化学染色是诊断血液系统疾病不可缺少的手段之一。u细胞化学染色的方法有许多种，其结果显示也不尽相同，即使检测同一种物质，亦可因采用方法的不同及方法学本身的缺陷，导致其结果出现一定偏差。因此，临床应用时应注意选择结果稳定、方法简便、阳性结果明显的细胞化学染色，同时注意质量控制。u细胞化学染色的基本要求是在原位显示出细胞的成分和结构，故在染色时应尽量保持细胞原来的结构、化学成分和酶活性，反应产物应该是有色沉淀物，具有一定的稳定性。细胞化学染色过程一般包括:固定、显示及复染。u髓过氧化物酶染色u血细胞所含的过氧化物酶主要为髓过氧化物酶(MPO)。MPO是人类中性粒细胞含量最多的一种蛋白质。MPO的染色方法有多种，如复方联苯胺法、二氨基联苯胺法、四甲基联苯胺等。u以往常用复方联苯胺法，但由于其试剂具有致癌性，目前临床该方法应用逐渐减少。1985年，国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐三种方法:二氨基联苯胺法(DAB)、过氧化物酶氨基-甲基卡巴唑染色法和二盐酸联苯胺法。二氨基联苯胺法是其中常用方法。u实验原理u二氨基联苯胺法的原理为:血细胞内的MPO能催化DAB使其脱氢后形成金黄色不溶性沉淀，定位于MPO酶所在的活性部位。而DAB所脱的氢，使H2O2还原成H2O。u【正常血细胞的染色反应】u1.粒细胞系统 分化差的原始粒细胞染色呈阴性，分化好的原始粒细胞至中性成熟粒细胞各阶段均阳性，随着细胞成熟，阳性反应的程度逐渐增强，衰老的粒细胞阳性程度减弱甚至阴性。嗜碱性粒细胞呈阴性，嗜酸性粒细胞阳性反应最强。u2.单核细胞系统 大多数单核细胞呈阴性或弱阳性，颗粒较少，细小，一般呈弥散性分布。u3.其他细胞 淋巴细胞系统、红细胞系统、巨核细胞系统及浆细胞、组织细胞均呈阴性反应，吞噬细胞有时呈阳性反应。u【临床意义】MPO染色是临床上辅助判断急性白血病类型首选的、最重要的细胞化学染色，其临床意义主要包括:u1.急性白血病类型的鉴别 急性白血病时，白血病细胞MPO反应强弱的一般顺序为：M3M2bM2aM6(粒细胞)M4M1M5ALL。u(1)急性淋巴细胞白血病:原始淋巴细胞、幼稚淋巴细胞均呈阴性。但实际上可能会有少许的原始粒细胞残留在急性淋巴细胞白血病患者的骨髓中，而出现少量“原始淋巴细胞”呈阳性的现象，故FAB分型规定急性淋巴细胞白血病患者MPO的阳性率3。u(2)急性粒细胞白血病:原始粒细胞阳性或阴性，常阳性，一般为(+)(+)，阳性颗粒局灶性分布，颗粒一般较多、较粗大。但阴性反应不能排除本病。u(3)急性早幼粒细胞白血病:早幼粒细胞呈强阳性，为(+)(+)，颗粒一般多而粗大。u(4)急性粒-单核细胞白血病:原始及幼稚单核细胞呈阴性或弱阳性，原始粒细胞呈阳性或阴性。u(5)急性单核细胞白血病:原始及幼稚单核细胞多数呈阴性或弱阳性。u(6)急性红白血病:有核红细胞呈阴性，原始粒细胞呈阳性或阴性，原始单核细胞呈阴性或弱阳性。u(7)其他:退化的中性粒细胞、骨髓增生异常综合征、放射病及某些白血病可见中性成熟粒细胞MPO活性下降。u2.其他疾病成熟中性粒细胞的髓过氧化物酶活性变化u(1)活性增高:再生障碍性贫血、细菌感染、淋巴细胞白血病等。u(2)活性降低:骨髓增生异常综合征、放射病、退化的中性粒细胞及某些白血病(如急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病及慢性髓细胞白血病)等。u3.其他 MPO染色可用于协助区分传染性“单个核细胞”增多症中不典型淋巴细胞与单核细胞及具有 Pelger-huet畸形的粒细胞，前者MPO(-)，后者MPO染色分别呈()和(+)。u【应用评价】MPO染色是急性白血病形态学分型中最重要的、首选的常规细胞化学染色，该方法简单且敏感，具有实用价位。u1.镜下观察 MPO染色的关键是如何辨认白血病细胞。由于MPO染色后细胞结构不如wright染色下的清晰，且阳性细胞中已有阳性颗粒的覆盖，在一定程度上干扰了白血病细胞的辨认，故MPO阳性率高低与实际真值之间会有一定的误差(片中细胞种类越多误差就越大)。u2.假阳性与假阴性 因存在杂质沉淀，而出现假阳性，此时其他细胞和背景上也往往会有阳性颗粒;试剂失效，可导致假阴性;四甲基联苯胺法，若试剂pH低于5.0可导致假阳性结果。通常在观察MPO结果前，应首先观察成熟粒细胞是否呈强阳性反应，以判断染色是否成功。u3.其他染色法 各类细胞化学染色测定MPO的敏感性明显低于流式细胞术对MPO的测定，故MPO染色阴性不能排除白血病细胞中此酶的存在，抗髓过氧化物酶抗体的免疫学检测较细胞化学染色更敏感，故MPO染色阴性，必要时可用流式细胞术进行确认。u回顾本节内容：细胞化学染色髓过氧化物酶染色。课程结束 谢谢观看