(19)--第三讲含量测定.doc

1. 大家好，第三讲中我们来重点讨论主要化学成分的含量测定问题。2. 首先，请大家回顾一下中药分析主要的研究内容，对，包括定性鉴别、有毒、有害成分、水分、灰分等的检查，还有含量测定。本讲内容主要介绍含量测定。3. 那为什么要进行含量测定呢？含量测定主要针对什么化学成分呢？这是我们首先需要思考的问题，也是我们进行中药分析应有的思维模式。对于第一个问题，为什么要进行含量测定，我们在第一讲中就有学习过，含量测定作为中药分析的一个重要任务，它可以为中药的质量控制提供参考依据。一般常规情况，必须要对中药或中药制剂中含有的主要有效成分做含量测定，只有这样，才能保证中药的药效，其次，对于毒性成分也应进行含量测定，以保证临床用药安全。因此从有效和安全两个角度考虑，我们就很容易理解为什么要对主要药效成分和有毒有害成分进行含量测定了。4. 含量测定的方法有很多，包括化学分析法、光谱分析法和色谱分析法，此讲内容我们主要学习色谱分析法中的HPLC。5. 说到HPLC法，还得从俄国植物生理学家茨威特分离叶绿素的实验说起，他将洗净捣碎的树叶用石油醚提取，再倒入一根装有CaCO3颗粒的玻璃柱中，接着用石油醚自上而下淋洗，随着淋洗时间的延长，我们发现树叶提取物由最开始的一种绿色分成了四种不同的颜色，色谱法由此而来，可见，它是一种能对混合物进行分离的方法。随着现代科学的进步，如果柱子的底端连接上适当的检测器，就可以将从柱子中逐个流出的化学成分转变成电信号。这些电信号在坐标纸上排列成色谱图。色谱图的横坐标为时间，用来定性分析，即不同的化学成分流出柱子的时间不同；色谱图的纵坐标为峰高或峰面积，用来定量分析，即化学成分的含量高低与峰高峰面积成正比。这就是色谱法的基本原理。6. HPLC是在色谱法的基础上发展起来的一种先进的仪器分析方法，仪器包括储存流动相的储液瓶，输送流动相的高压泵，带入样品的进样器，分离组分色谱柱，分析化学成分的检测器，生成色谱图的记录仪，六个部分。7. 接下来，我们以山银花中有效成分的含量测定为例进行深入探讨。首先，我们需要查找相关资料，看看山银花中含有的主要药效成分有哪些？目前研究比较多的为3个化学成分，分别为绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙。因此，我们需要建立合适的HPLC法对这三种成分进行含量测定。方法中第一个需要考虑的问题是色谱条件，即选择何种色谱柱与流动相系统进行分离？检测器的条件如何确定？这些条件我们必须根据这3种化学成分的结构和化学性质来确定，也可以参考药典的色谱条件。其次，我们需要这3种化学成分的对照品，根据对照品的出峰时间来判断供试品中是否含有该成分，根据对照品的浓度及色谱峰的峰高峰面积来计算供试品中该成分的量，这就是我们前面提到的色谱图中横坐标和纵坐标的作用。第三，我们的供试品山银花，它是药材，不可能直接进入仪器分析，必须通过合适的方法对山银花中的有效成分进行提取之后才能上机检测。8. 现在我们来看看HPLC的实验结果。图1为绿原酸的含量测定，上图是绿原酸的对照品，我们在此可以看到一个色谱峰，它就代表绿原酸；下图为山银花供试品，我们发现图中有几个色谱峰，其中有个色谱峰的位置与上图一致，即出峰时间相同，说明该峰为绿原酸，并根据对照品中绿原酸的浓度计算出该供试品中绿原酸的含量，结果见表1. 从中我们发现不同采收期的山银花中绿原酸含量不同，野生的比栽培的绿原酸含量要高些。 同理，图2和表2呈现的是对山银花中另外两种化学成分的含量测定结果，根据标准品对照，我们知道2号峰为灰毡毛忍冬皂苷乙、3号峰川续断皂苷乙。含量测定实验表明：供检测的山银花中均含有此3种化学成分，且含量符合药典标准，即含绿原酸的含量大于2.0%，灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙（C53H86O22）的总量大于5.0%。9. 药典中对湖南本草中药含量测定的要求如下，我们了解一下。古汉养生精口服液需要至少对1种化学成分进行含量测定，妇科千金片为2种，刚才我们将的山银花为3种化学成分。玉竹为一类有效成分，即玉竹多糖。而百合与茯苓暂无含量测定要求，因此，提高中药的整体质量，我们任重道远！10. 谢谢大家！