(25)--7-1.细菌感染的实验室诊断.ppt

第七章第七章 细菌感染的检测方法与细菌感染的检测方法与防治原则防治原则第一节第一节 细菌感染的实验室诊断细菌感染的实验室诊断实验室检查的目的实验室检查的目的确定病原确定病原指导用药指导用药观察疗效观察疗效疾病预防疾病预防病原菌的实验室诊断程序病原菌的实验室诊断程序收集临床标本收集临床标本形态学检查形态学检查分离培养及鉴定分离培养及鉴定动物试验动物试验生化反应生化反应药敏试验药敏试验血清学鉴定血清学鉴定形态学鉴定形态学鉴定自动化检测自动化检测成分检测成分检测免疫学检测免疫学检测分子生物学分子生物学检测检测 质谱质谱/芯片芯片检测检测 血清学诊断血清学诊断n一、临床标本的采集与运送原则一、临床标本的采集与运送原则n二、细菌的形态学检查二、细菌的形态学检查n三三、细菌的分离培养与鉴定、细菌的分离培养与鉴定n四、细菌成分检测细菌成分检测n五、细菌感染的血清学诊断五、细菌感染的血清学诊断内容内容一、临床标本采集送检及原则临床标本采集送检及原则n1.1.早期采集：早期采集：使用抗菌药物之前使用抗菌药物之前n2.2.无菌采集：无菌采集：避免杂菌污染避免杂菌污染n3.3.采采集集适适当当标标本本：不不同同疾疾病病及及疾疾病病不不同时期同时期n4.4.采集双份血清采集双份血清：急性期和恢复期：急性期和恢复期n5.5.及时送检，正确运送及时送检，正确运送n6.6.准确作好标识准确作好标识二、形态学检查二、形态学检查 1.1.不染色标本检查不染色标本检查 a.a.细菌动力细菌动力 b.b.暗视野显微镜检查暗视野显微镜检查 c.c.电子显微镜电子显微镜 2.2.涂片染色与镜检涂片染色与镜检:形态、大小、染色性、排列方式形态、大小、染色性、排列方式革兰染色：最常用革兰染色：最常用抗酸染色抗酸染色镀银染色镀银染色墨汁涂片负染色等墨汁涂片负染色等少数形态、染色性少数形态、染色性有特征的病原菌有特征的病原菌初步的诊断初步的诊断三、细菌的分离培养与鉴定三、细菌的分离培养与鉴定临床标本临床标本适宜培养基及培养条件适宜培养基及培养条件细菌划线培养细菌划线培养挑取单菌落，纯培养挑取单菌落，纯培养鉴定鉴定1.1.细菌的分离培养：细菌的分离培养：原则上所有耸肩标本均原则上所有耸肩标本均应作分离培养，已获得纯培养后进一步鉴定。应作分离培养，已获得纯培养后进一步鉴定。不同细菌的酶不同不同细菌的酶不同因而对糖、氨基酸因而对糖、氨基酸等分解的产物各异，等分解的产物各异，通过对这些产物的通过对这些产物的检测来鉴定细菌。检测来鉴定细菌。2.2.生化试验生化试验三、细菌的分离培养与鉴定三、细菌的分离培养与鉴定3.3.血清学鉴定血清学鉴定利用已知的特异性抗体检查利用已知的特异性抗体检查未知的纯培养细未知的纯培养细菌菌，对分离的细菌进行种、属、型的鉴定。，对分离的细菌进行种、属、型的鉴定。三、细菌的分离培养与鉴定三、细菌的分离培养与鉴定4.4.动物试验动物试验对于测定细菌的毒力和致病性有重要意义。对于测定细菌的毒力和致病性有重要意义。5.5.抗菌药物敏感性试验抗菌药物敏感性试验测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法，对指导临床选择用药，或杀菌作用的方法，对指导临床选择用药，及时控制感染有重要意义。及时控制感染有重要意义。n纸片扩散法纸片扩散法 n液体稀释法液体稀释法 nE E测定法测定法(E test)(E test)n自动化药敏测定法自动化药敏测定法 三、细菌的分离培养与鉴定三、细菌的分离培养与鉴定1.1.免疫学检测免疫学检测nSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 n免疫荧光技术 nELISAn固相放射免疫技术 n蛋白印记分析 四、细菌成分的检测四、细菌成分的检测2.分子生物学检测 特异基因序列的比较和鉴定四、细菌成分的检测四、细菌成分的检测聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCRPCR）核酸杂交技术核酸杂交技术高通量测序技术高通量测序技术四、细菌成分的检测四、细菌成分的检测3.质谱分析 细菌的蛋白质谱4.生物芯片 特异基因序列的比较和鉴定原理：原理：人体受致病菌感染后，其免疫系统人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。价（滴度）的升高。因此，用因此，用已知的细菌已知的细菌或其特异性抗原检测或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为血一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断清学诊断(serological diagnosis)serological diagnosis)。五、细菌感染的血清学诊断五、细菌感染的血清学诊断适用于：细菌抗原性较强，病程较长的感适用于：细菌抗原性较强，病程较长的感染性疾病；也用于调查人群对某病原菌的染性疾病；也用于调查人群对某病原菌的免疫应答水平以及检测疫苗接种后的预防免疫应答水平以及检测疫苗接种后的预防效果。效果。注意事项：血清学诊断试验最好取患者急注意事项：血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，因为在传染性期和恢复期双份血清标本，因为在传染病流行区，健康人群由于某些病原菌的隐病流行区，健康人群由于某些病原菌的隐性感染或近期曾接受预防接种，其抗体水性感染或近期曾接受预防接种，其抗体水平普遍较高，单份血清往往不能区分现症平普遍较高，单份血清往往不能区分现症感染或既往感染。感染或既往感染。五、细菌感染的血清学诊断五、细菌感染的血清学诊断当恢复期或一周后血清抗体效价比早期升当恢复期或一周后血清抗体效价比早期升高大于等于高大于等于4 4倍时，则可确认为现症感染。倍时，则可确认为现症感染。常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISAELISA。五、细菌感染的血清学诊断五、细菌感染的血清学诊断