2023年大学药理学实验附超详细解析超详细解析答案.pdf

实验题目：小鼠腹腔注射筒箭毒碱 ED50的测定 Determination of Cl-Tubocurarines Median Effective Dose ED50 【实验目的】了解 ED50的测定方法、原理、计算过程与意义。【相关理论】1关于量反应，质反应：量反应是指个体上反应的强度并以数量的分级来表示；例如：血压、尿量等。质反应是指群体中所观察到的某一效应的出现；如：生死、有效或无效。以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无，阳性率。2关于 ED50，LD50，以及治疗指数:能使群体中有半数个体出现某一效应的剂量，称为半数效应量，假设此效应为有效，则为半数有效量 ED50，ED50是质反应的参数。假设此效应为死亡时，则为半数致死量 LD50。治疗指数=LD50/ED50=TI，该值越大越好，说明药物越安全.可用机率单位正规法或点斜法求出 LD1，ED99；LD5，ED95。3肌松药分为去极化型和非去极化型两种。去极化型肌松药的代表为琥珀酰胆碱，其肌松作用不能被抗胆碱酯酶药新斯的明拮抗，反而会加重。非去极化型肌松药的代表为筒箭毒碱，其肌松作用能被新斯的明解救。4测定 ED50，LD50的意义 可计算治疗指数 TILD50/ED50，为临床安全用药提供指导。【实验动物】小鼠昆明种 KM，雌雄各半。【实验器材】铁丝网，铁架台，天平，注射器等。【实验方法】应用点斜法测定 ED50。应用该方法测定 ED50时，实验设计必须符合以下 5 点要求：1动物以 58 组为宜；2每组动物数须一致；3各组给药剂量应呈现等比数列；4各组给药剂量的公比 r=1.11.6；5最大剂量Dmax组的阳性反应率须80%，最小剂量 Dmin组的阳性反应率须20%【实验方法】1预实验：目的是为了找出符合上述点斜法要求 5的 Dmax 和 Dmin。阳性反应判定标准：20min 内小鼠落下 3 次 注意排除因互相拥挤而落下所造成的假阳性。2确定组数n后，根据 Dmax和 Dmin，计算各组应给予的剂量，Dmax=rnD min。注意公比 r 应在上述要求的范围内，即=1.1 1.6。分别计算出各组应注射的剂量，见下表：Group No.1 2 3 4 5 6 Dose Dmin rDmin 2Dmin r3Dmin r4Dmin Dmax=r5Dmin Group No.1 2 3 4 5 6.如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆Dose Dmin rDmin r2Dmin r3Dmin r4Dmin Dmax=r5Dmin 3正式实验：a 筛选小鼠：将小鼠放在铁丝网上，观察 10 分钟，不掉下来为合格，可以参与实验。此步的目的在于排除假阳性；b 称重、标记；c 给药观察：腹腔注射 ip 筒箭毒碱。每组分别给予相应的剂量。d 计算阳性率：阳性反应标准：给药后 20 分钟内自铁丝网上掉下来 3 次者为阳性。【计算】小鼠 ip 筒箭毒碱的 ED50是多少？其 95%可信区间是多少？1 lg ED50=Xm-i P-0.5 其中，Xm=lg Dmax，i=lg r，P：阳性率之和 因此，ED50=lg-1 Xm-i P-0.5 2 ED50 的 95%可信区间=lg-1 lg ED501.96Sx50，其中，Sx50 为 ED50的标准误：Sx50=i(P-P2)1/2/(n-1)，n 为各组动物数。【作图】对阳性率-对数剂量作图。【思考题】质反应的量效曲线与量反应的量效曲线有何不同？答案：如以药物的效应为纵坐标，药物的剂量或浓度为横坐标作图，则得到直方双曲线；如将药物浓度或剂量改用对数值作图，则呈典型的 S 形曲线，这就是通常所说的量效曲线(图-1)。定量阐明药物的剂量(浓度)与效应之间的关系，有助于了解药物作用的性质，为临床用药提供参考。药理效应是连续增减的量变，可用具体数量或最大反应的百分数表示的，称为量反应，如血压、心率、血糖浓度等，其研究对象为单一的生物单位。如果药理效应表现为反应性质的变化，而不是随着药物剂量或浓度的增减呈连续性量的变化，则称为质反应，其反应只能用全或无、阳性或阴性表示，如存活与死亡、惊厥与不惊厥等，其研究对象为一个如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆群体。如果用累加阳性率与对数剂量(或浓度)作图，也呈典型的对称 S 形量效曲线(图-2)。附：1、记录表格例如 1每组用 No.Weight of body(g)Volume of injection Time:injection Time:end of observation Times of falling+/-如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆(ml)down 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 No.Weight of body(g)Volume of injection(ml)Time:injection Time:end of observation Times of falling down+/-2、记录表格例如 2合计：Groups N Dose(mg/kg)Volume of injection(ml/10g体重)No.of reaction P%1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 注：N：每组动物数；P%：阳性反应率。实验题目：苯巴比妥钠和放线菌素 D对小鼠肝脏细胞色素 P450含量的影响 如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆Influence of Phenobarbital Sodium and Actimycin D on the Hepatic Cytochrome P-450 Content in Mice 【相关理论】P-450属于血红素蛋白，其复原型与CO结合后，在波长 450nm处出现吸收峰。因此，可以应用示差光谱法测定其含量。肝匀浆样品中通以CO后，加复原剂连二亚硫酸钠Na2S2O4，然后在 450nm和 490nm处测定吸光度，其差值代入公式，即可计算出细胞色素P450的含量。【实验目的】肝匀浆中细胞色素 P-450含量的简易测定；肝药酶的诱导剂、抑制剂的作用。【实验动物】小鼠昆明种【实验药品】生理盐水 NS；苯巴比妥钠 0.75%；放线菌素 D A.D.0.002%；蔗糖溶液 0.25M；Tris-HCl 缓冲液。【实验器材】玻璃匀浆器，漏斗，试管10 ml 数只，滤纸，移液管10ml数只，冰盒，扭力天平，分光光度计，制冰机等。【实验方法】1 动物分 3 组：生理盐水组，苯巴比妥钠组，以及放线菌素D组。2 苯巴比妥钠和放线菌素 D i.p.两天，诱导或抑制肝药酶。3 断头放血：于第三天实验当日将小鼠断头放血须放净，因血红素会影响实验结果；如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆4 制备肝匀浆：将 0.25M 的蔗糖溶液和 0.05M Tris-HCl缓冲液置于冰块中预冷；剪下肝脏不得少于 400mg；勿破坏胆囊；以滤纸吸去血迹；扭力天平称重垫锡纸；每次加样或加减法码时必须关上关平；将肝组织置于匀浆器中，加入预冷后的 0.25M 蔗糖，0.5ml/100mg 肝组织；冰浴下研磨，直至组织变为淡粉色匀浆；取此匀浆液 1ml，加入预冷后的 0.05M Tris-HCl 缓冲液 9ml，充分混匀；218 室冰浴下充以 CO，12 气泡/秒，通气 2 分钟。5 通气完毕的溶液，倾入 2 个比色杯中，一个作为参照杯，另一个作为样品杯。向样品杯中加入连二亚硫酸钠 5mg，充分混匀。参照杯调零后，在 450nm和 490nm处测定样品杯的吸光度。【结果处理】1、根据所测得的 OD值计算 P-450 的含量*。将结果填入下表，并计算均数。2、计算 P-450 升高百分率：Pheno-N.S./N.S.；或 P-450 降低百分率：N.S.-A.D./N.S.【分析讨论】1、P-450 在药物转化中的作用原理；答案：细胞色素(P-450cytochrome P-450,CYP450或 P-450)酶系由一群基因超家族(superfamily)编码的酶蛋白所组成。细胞色素 P-450 参与有毒物质以及类固醇和脂肪酸的羟基化。羟基化涉及四个基本反应被氧化的物质同细胞色素P-450 结合细胞色素 P-450 中的铁原子被 NADPH 复原氧同细胞色素 P-450 结合底物结合一个氧原子被氧化,另一个氧原子用于形成水。细胞中，细胞色素P450 主要分布在内质网和线粒体内膜上，作为一种末端加氧酶，参与了生物体内的甾醇类激素合成等过程。近年来，对细胞色素 P450 的结构、功能特别是对其在药物代谢中的作用的研究有了较大的进展。2、不同的实验组 P-450含量不同的原因；如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆答案：苯巴比妥属于酶的诱导剂，肝药酶诱导剂是指有些药物长期使用后能加速肝药酶的合成并增强其活性，这类药物就称为肝药酶诱导剂。药酶活性增加是机体对药物产生耐受性的主要原因，因药酶活性增加，促使药物代谢加快，而使机体对药物的反应性减弱。如连续服用苯巴比妥后，不仅使机体对苯巴比妥产生耐受性，又可使同时服用的其他药物药效减低，常需增加剂量才能维持疗效。3、诱导剂增加 P-450含量、抑制剂减少 P-450含量的意义；答案：肝药酶诱导剂是指有些药物长期使用后能加速肝药酶的合成并增强其活性，这类药物就称为肝药酶诱导剂。药酶活性增加是机体对药物产生耐受性的主要原因，因药酶活性增加，促使药物代谢加快，而使机体对药物的反应性减弱。如连续服用苯巴比妥后，不仅使机体对苯巴比妥产生耐受性，又可使同时服用的其他药物药效减低，常需增加剂量才能维持疗效。使肝药酶活性减弱的药物称肝药酶抑制剂。药酶活性降低促使药物代谢减慢，而使机体对药物发生中毒的可能性。4、肝药酶的临床意义、耐受与交叉耐受、及联合用药应注意的问题。答案：某些化学物质能提高肝微粒体药物代谢酶的活性，从而提高代谢的速率，此现象称酶的诱导。具有肝药酶诱导作用的化学物质称酶的诱导剂。酶的诱导剂能促进自身代谢，连续用药可因自身诱导而使药效降低。药酶活性增加是机体对药物产生耐受性的主要原因，因药酶活性增加，促使药物代谢加快，而使机体对药物的反应性减弱。常见的诱导剂有苯巴比妥和其他巴比妥类药物、苯妥英钠、卡马西平、利福平、水合氯醛等。酶的诱导作用可产生两种临床后果。使治疗效果减弱：由于药酶诱导后代谢加快、加强，导致血浆药物浓度降低，从而使治疗效果减弱。例如苯巴比妥是典型的酶诱导剂，它能加速华法林的代谢，使其抗凝效果降低。使治疗效果增强：甚至产生毒性反应，这主要是指那些在体内活化或产生毒性代谢物的药物。例如乙醇是肝 CYP2E1的酶诱导剂，长期饮酒可增加对乙酰氨基酚的肝毒性。交叉耐受cross tolerance 作为个人使用某物质的结果，而对从未接触过的另一物质产生了耐受性。这两种物质通常具有类似的药理学效应。联合用药时注意了解所服药物是肝药酶抑制剂还是诱导剂，如果所服药物是抑制剂，那么另外的药物要适当减量，如果所服药物是诱导剂，另外所服药物应加量。【注意事项】1、操作要快为了保护酶的活性；2、冰浴为了保护酶的活性；3、血要放尽P-450 为血红素蛋白；血红素影响 P-450；4、胆红素会影响 P-450 的测定；5、通 CO的速度不能过快或过慢；如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆6、肝组织研磨到由血红色变成粉白色为止；7、分光光度计上比色时，先测 A.D；再测 N.S；最后测 Pheno。【分析讨论】1、不同的实验组 P-450含量不同的原因；2、肝药酶诱导剂增加 P-450含量、抑制剂减少 P-450含量的意义；附：*按下式计算 P-450含量：P-450nmol/g 肝脏=A450-A490/E L*50000 上式中，A=ECL 其中：E：P-450从 490nm到 450nm波长的示差光谱消光系数，本实验中E=104/cm mmolL；L：比色杯厚度光路长度1cm。C：溶液浓度 A：吸光度 【思考题】1、P-450在药物代谢转化中的作用是什么？2、肝药酶诱导剂与抑制剂的临床意义是什么？3、药物的耐受与交叉耐受与肝药酶有何关系？4、联合用药应注意哪些问题？实验题目：磺胺药的药代动力学参数测算 Determination of the Pharmacokinetic Parameters for Sulfonamides 【实验目的】如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆了解磺胺类药物在动物体内随时间变化的代谢规律，并掌握药代动力学参数的计算方法。【相关理论】磺胺类药物能与某些试剂发生反应生成有色物质，通过比色可以对其血浓度进行定量检测。酸性环境下，磺胺类药物的苯环上的氨基-NH2 离子化生成铵类-NH3+化合物，与亚硝酸钠发生重氮化反应，生成重氮盐-N=N+-。对这种化合物在 525nm波长下测定其吸光度OD，其 OD值与磺胺类药物的浓度呈正比。【实验动物】家兔，3kg 左右。【药品】7.5%三氯醋酸，0.5%亚硝酸钠，0.5%麝香草酚，0.1%磺胺嘧啶，肝素等。【实验器材】兔台，手术器械一套，动脉插管，动脉夹，离心管 10 只，试管 10 只，小烧杯 10ml10 只，移液管0.2ml，1ml，5ml，10ml等，离心机，振荡器，分光光度计等。【实验方法】1 家兔麻醉后，别离颈动脉。耳缘静脉注射肝素抗凝后，颈动脉插管，备取动脉血用。2 取血：取空白血样。然后对家兔耳缘静脉注射磺胺嘧啶 SD，0.3g/kg，分别于注射后 0、3、5 15、30、45、60、90min 时取动脉血。3 测定血药浓度：严格按照下表中的顺序加药：如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆 注意事项：A 加取血样的吸量管为同一只，因此应先取空白血样，分别加到对照管和标准管中后，再从注射后 90min 时的血样开始取起，然后是注射后 60、45、30、15、5、3、0min 的血样。B 每只试管内，先加三氯醋酸，再向此三氯醋酸内加入血样，加完血样后立即振荡，否则会很快发生凝固，影响结果的准确性。C 显色剂的顺序一定不能错，应在加完亚硝酸钠后再加入麝香草酚。D SD 的血药浓度单位为 mg/ml。【计算】根据标准管的药物浓度及其光密度值，可计算出样品管内的药物浓度。公式如下：OD样品/OD标准=C 样品/C 标准 【曲线拟合】如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆将所测得的血药浓度值与时间通过电脑进行曲线拟合，得到药时曲线，表达公式如下：Ct=Ae-at+Be-bt 其中，Ct：时间 t 后的血药浓度 A：分布开始时的血药浓度；a：分布速率常数；B：消除开始时的血药浓度；b：消除速率常数。【作图】在半对数坐标纸上以时间t 为横坐标，实测的光密度值换算而得的血药浓度的对数为纵坐标，绘出时量曲线图。【分析讨论】根据所得到的药时曲线讨论 SD的药代动力学特点。【思考题】1、一级代谢动力学与零级代谢动力学各有什么特点/答：一级消除动力学first-order elimination kinetics是体内药物在单位时间内消除的药物百分率不变，也就是单位时间内消除的药物量与血浆药物浓度成正比，血浆药物浓度高，单位时间内消除的药物多；血浆药物浓度低时，单位时间内消除的药物也相应降低。一一级动力学消除药物有如下特点：体内药物按瞬时血药浓度或体内药量以恒定的百分比消除，但单位时间内实际消除的药量随时间递减。药物消除半衰期恒定，t1/2=0.693/ke，与剂量或药物浓度无关。绝大多数药物都按一级动力学消除，这些药物在体内经过 45 个 t1/2 后，体内药物可基本消除干净。每隔一个 t1/2 药物半衰期给药一次，则体内药量或血药浓度可逐渐累积，经过 45 个 t1/2 后，消除速度与给药速度相等，到达稳态。零级消除动力学 是药物在体内以恒定的速率消除，即不管血浆药物浓度高低，单位时间内消除的药物量不变。零级动力学药物消除过程特点：单位时间里按恒如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆定的量衰减，又称恒量消除。血浆药时曲线浓度取算术刻度时是一条直线。血浆消除半衰期不是一常数。反复给药，理论上无稳态浓度，易蓄积中毒。2、什么是房室模型？根据本实验的结果，判断磺胺嘧啶在家兔体内的房室模型属于哪一类。答案：药动学通常用房室模拟人体，只要体内某些部位接受或消除药物的速率相似，即可归入一个房室。房室模型仅是进行药动学分析的一种抽象概念，并不一定代表某一特定解剖部位。把机体划分为一个或多个独立单元，可对药物在体内吸收、分布、消除的特性作出模式图，以建立数学模型，揭示其动态变化规律。假设机体给药后，药物立即在全身各部位到达动态平衡，这时把整个机体视为一个房室，称为一室模型或单室模型one-compartment model。假设药物进入机体后，瞬时就可在血液供给丰富的组织如血液、肝、肾等分布到达动态平衡，然后再在血液供给较少或血流较慢的组织如脂肪、皮肤、骨骼等分布到达动态平衡，此时可把这些组织分别称为中央室和周边室，即二室模型two-compartment model。注：多数情况下二室模型能够准确地反映药物的体内过程特征，但一房室模型虽然准确性稍差，却比较简单，便于理解、推广、应用，且有些药物用单室模型处理已能满足要求，所以其重要性并不亚于二室模型。实验题目：传出神经系统药物对血压和血液动力学的影响 Effect of Drugs Affecting the Autonomic Nervous System on Blood Pressure and Hemodynamics 【实验目的】观察传出神经系统药物对血压及血液动力学的影响和这些药物之间的相互作用。掌握麻醉动物急性血压的记录方法及动物的心导管技术。【相关理论】1、传出神经系统药物通过作用于心脏和血管平滑肌上相应的受体产生心血管效应，使血压，心率和心肌收缩性发生相应变化。血流动力学方法是研究药物对心如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆血管功能的影响时较常用的一种手段。本实验通过观察动物血压和血液动力学的变化，分析肾上腺素受体激动剂与拮抗剂以及胆碱受体激动剂与拮抗剂之间的相互作用。2、左室内压LVP：当前、后负荷增高时，正常心脏的心肌收缩力增强，LVP即增高。LVP可插入心导管，由压力感受器测得。心导管插入方法有逆行插入法临床多用：逆血流方向，由一侧颈总动脉插入；还有室壁直接插管危险大，操作复杂，目前少用。3、血压BP：包括收缩压 SAP，舒张压 DAP。4、左室压力变化速率dp/dt：是评价心肌收缩性能的常用指标；一定程度上反映室壁张力的变化速率；留神率、前后负荷不变时，dP/dt 增加表示心肌收缩性能增强。【实验动物】家兔。【实验药品】3%戊巴比妥钠，0.5%肝素,0.002%肾上腺素，0.003%去甲肾上腺素，0.001%异丙基肾上腺素，0.5%酚妥拉明，0.1%普萘洛尔，生理盐水N.S.。【实验器材】兔台，手术器械，气管插管，动脉插管，动脉夹，静脉插管，压力换能器，Powerlab仪器，心导管，注射器，丝线，纱布等。【实验方法】1 称重，麻醉：3%戊巴比妥钠可稍加热溶解，30mg/kg1ml/kg，耳缘静脉注射。注射不宜过快，否则易致呼吸肌麻痹。将动物背位固定于手术台上。2 手术：1 剪去两侧腹股沟处的毛，在股动脉搏动明显处，沿股动静脉走向纵行剪开皮肤约 34cm，别离右侧股 A，下穿线备用观测BP用；并别离左侧股静脉，下穿线备用静脉给药用。如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆2 剪去颈部的毛，正中切开颈部皮肤，别离右侧颈总 A，下穿线备用尽量别离出较长的一段，逆行插管后观测 LVP用；3 打开 Powerlab，换能器内预充注肝素注意排尽气泡；熟悉三通管的方向。4 肝素化：股静脉插管，0.5%肝素静注 1ml/kg。5 动脉插管：1 股 A插管，观测并记录 BP；2 颈总动脉逆行插管，观测并记录 LVP，LVP/dt。当导管插入一定长度后可在插管之前，于体外估测一下导管大概的进入长度，小心操作，有一种突破感和落空感，同时血压波形变成室内压波形舒张压降为 0mmHg 或更低，收缩压更高，整个脉压差增高，波型幅值明显高于动脉血压波形的幅值。参见下面的示意图。注意：插得稍浅时易于被血流冲出心脏，则波形又回复为动脉血压波形；插得过深时堵在心室壁上则记录不到波形，甚至刺破心脏。因此在操作时应结合体外估测长度、手感以及血压波形的变化进行判断。6 观测并记录一段正常图形；7 给药并进行观察、记录：1 肾上腺素Adr 去甲肾上腺素 NA 异丙基肾上腺素 Iso 酚妥拉明，5 分钟后 再次给予去甲肾上腺素 肾上腺素 异丙肾上腺素。如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆2 肾上腺素 去甲肾上腺素 异丙肾上腺素 普萘洛尔0.5ml/kg ，5 分钟后 异丙肾上腺素 肾上腺素 去甲肾上腺素。说明：除普萘洛尔外，均为 0.2ml/kg；每次给药后可注 N.S.，将死腔内的药液注入静脉；每次给药后，待 BP稳定后再给下一个。【分析讨论】各药对 BP、LVP和 dP/dt 的作用，酚妥拉明和普萘洛尔对其它药物作用的影响。【思考题】酚妥拉明和普萘洛尔的作用机制是什么 答案：酚妥拉明，用于血管痉挛性疾病，如肢端动脉痉挛症即雷诺病、手足发绀症等、感染中毒性休克以及嗜铬细胞瘤的诊断试验等。用于室性早搏亦有效。普萘洛尔，用于治疗多种原因所致的心律失常，如房性及室性早搏 效果较好、窦性及室上性心动过速、心房颤抖等，但室性心动过速宜慎用。锑剂中毒引起的心律失常，当其他药物无效时，可试用本品。此外，也可用于心绞痛、高血压、嗜铬细胞瘤手术前准备等。为1、2 受体拮抗药，具有血管舒张作用。实验题目：未知降压药作用机制的分析 Analysis of Hypotensive Mechanism of Unknown Antihypertensive Drugs 【实验目的】通过不同的给药途径或方式观察药物对动物血压及瞬膜收缩的影响，同时分析药物的降压部位及机制。【相关理论】如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆猫的瞬膜由颈上交感神经节后纤维支配，瞬膜平滑肌上有 a 肾上腺素受体，刺激颈上交感神经节前或节后纤维和给予 a 受体激动剂，均可使瞬膜收缩。给神经节阻断剂后，刺激交感神经节前纤维引起的瞬膜收缩将被阻断，但刺激交感节后纤维以及给 a 受体激动剂，仍可引起瞬膜收缩。神经节阻断剂影响直接刺激迷走神经引起的血压下降及夹闭颈总动脉的升压效应，但不影响乙酰胆碱及肾上腺素引起的血压改变，a 受体阻断剂则只翻转肾上腺素升压作用。某些具有特定作用部位如只作用在中枢或外周的降压药，可通过不同的给药途径引起的血压变化，判明其作用部位。【实验动物】猫。【实验药品】3%戊巴比妥钠，两种未知的降压药 A药和 B药，肾上腺素，乙酰胆碱，生理盐水，0.2%肝素。【实验器材】手术台，手术器械，器官插管，动脉插管，动脉夹，静脉插管，压力换能器，Powerlab仪器；心导管，注射器，丝线，纱布等。【实验方法】注意：猫的血供丰富，肌肉色鲜红，操作应小心谨慎，不要盲目剪切。1麻醉：戊巴比妥钠30mg/kg，麻醉动物。2气管插管：目的是防止气道分泌物过多导致窒息。颈正中切口，倒T型切开气管，插入气管插管；丝线固定。3别离颈部血管和神经：颈动脉、交感神、迷走神经包裹在同一血管神经鞘内。1 别离双侧颈动脉，分别穿线备用；2 别离一侧右侧交感神经细、迷走神经粗，分别穿线备用。注意神经不可钳夹，尽量防止用力拉扯。1 在结扎线的近中枢端剪断迷走神经。如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆2 沿交感神经向上，向深部别离，直到找到星状神经节在下颌角处，位置较深，临近颅底，呈星状膨大，有多个分支，再尽量向上向深处别离出节后神经。别离节前纤维，结扎，于结扎线的近中枢端剪断节后神经。4别离股静脉、插管：插管内预先充以 0.2%肝素，完成股静脉插管后对动物进行肝素化 2mg/kg 体重。丝线结扎固定插管。5仔细别离左侧颈总动脉、插管以描记血压：1 描记血压的压力换能器及相连的管道内预先充满肝素，排尽气泡。注意熟悉三通的方向；2 动脉夹夹闭近心端；3 在动脉壁上剪开一小口尽量在远心端剪，插入预先已充满肝素的插管；多插入一些；4 放开动脉夹，观察血液在管道内的搏动。注意：压力换能器高度应与猫心在同一水平面上。如有必要，可给予预压 150mmH2O。6右侧瞬膜穿线内眦处，以边缘部收缩幅度最大，且最厚，连接张力换能器。注意方向应与瞬膜收缩方向保持一致。【实验观察】1记录稳定后的正常曲线：血压、瞬膜收缩。2观察：1 动脉夹夹闭右侧颈总动脉，为时15 秒，观察瞬膜收缩的变化；血压的变化。2 将交感节前纤维搭在刺激电极上，刺激交感节前纤维星状神经节以前的交感神经，此神经从脊髓胸腰段发出后向上走行，为时10 秒：观察瞬膜收缩的变化；血压的变化。刺激参数为16Hz方波，波宽 4ms，幅值 120%阈电压。以下同。3 刺激交感节后纤维的远心端拉起结扎线，为时 10 秒：观察瞬膜收缩的变化；血压的变化。4 刺激迷走神经节前纤维，为时 10 秒，观察瞬膜收缩的变化；血压的变化。5 股静脉 iv 肾上腺素 0.1ml/kg：观察瞬膜收缩的变化；血压的变化。注意给完药后换以充满肝素的注射器时，轻推一点以将管道内的残药全部注入血液。下同。6 股静脉 iv乙酰胆碱 0.1ml/kg：观察瞬膜收缩的变化；血压的变化。3股静脉给药：两种未知的降压药 A药和 B药。给药剂量，A药为 0.2ml/kg，B药为 0.1ml/kg。4.未知降压药静注完成后，在血压下降 30mmHg 后，重复上述观察内容：如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆即夹闭颈总动脉；刺激交感节前纤维；刺激交感节后纤维；刺激迷走节前纤维；iv 肾上腺素；iv 乙酰胆碱。【分析讨论】分析两药的降压作用可能机制作用部位。【思考题】降压药物可能的作用机制有哪些？答案：(1)利尿降压药,通过肾脏排钠排水,减少血容量并降低外周阻力,到达降压效果.常用的有双氢克尿噻,氯噻嗪,氯噻酮,速尿,利尿酸,氨苯喋啶,安体舒通,阿米洛利等.(2)受体阻滞剂,使受体阻滞,提高血管平滑肌对血管介质的敏感性,抑制肾素的分泌,到达降压的目的.常用的药物有心得安,氨酰心安(阿替洛尔),美多心安(倍他乐克,美托洛尔),噻马心安(噻马洛尔)等.(3)血管紧张素转换酶抑制剂,通过抑制血管紧张素酶的作用,减少血管紧张素的产生,从而降低体循环阻力,到达降压的目的.常用药物有：疏甲丙晡酸(卡托普利,开搏通),苯丁酯脯酸(依那普利),培哚普和(雅施达),苯那普利拉(洛汀新)等.(4)钙拮抗剂,抑制钙离子通过心肌与血管平滑肌细胞膜,使平滑肌松弛,周围阻力降低,具有降压,抗心绞痛作用.常用的药物有：硝苯吡啶(心痛定),尼群地平,尼莫地平,异搏定,氨氯地平(洛活喜)等.(5)血管扩张剂,具有对抗周围血管阻力,而到达降压作用.常用的药物有肼苯哒嗪,长压啶等.实验题目：新斯的明对琥珀酰胆碱和筒箭毒碱肌松作用的影响 Influence of Neostigmine on the Muscular Relaxation Caused by Tubocurarine or Succinylcholine 如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆【相关理论】去极化型肌松药琥珀酰胆碱和非去极化型肌松药筒箭毒碱的肌松作用机制不同，前者的肌松作用抗胆碱酯酶药 新斯的明不能解救，而后者的肌松作用可被新斯的明所拮抗。【目的】观察新斯的明对除极化琥珀酰胆碱和非除极化筒箭毒碱两种肌松药肌松作用的影响，学习麻醉大鼠腓神经-胫前肌标本的制备方法及其在肌松药研究中的应用。【实验动物】大白鼠，150200g【实验药品】0.005%氯化筒箭毒碱、0.03%氯化琥珀酰胆碱、0.01%溴化新斯的明、20%乌拉坦、2%盐酸普鲁卡因、生理盐水。【实验器材】手术器械一套、Powerlab 一套主机、刺激器、张力换能器、棉线、橡皮泥、大头钉、铁架台等。【实验方法】1 安装并设定 Powerlab 记录肌张力的 Chart 设置文件；设定刺激器参数刺激强度 2V左右，刺激间隔 990ms，波宽 4ms；2 大鼠称重，麻醉；20%乌拉坦 i.p.腹腔注射，1.21.5g/kg体重，约0.60.75ml/100g体重，即 0.7ml/100g 体重。数分钟后翻正反射消失，即可进行实验；3 别离坐骨神经：在髋关节后，坐骨结节内侧凹陷处切开皮肤，钝性别离肌肉，暴露出一段坐骨神经粗大白色神经，用浸有普鲁卡因的棉线，围绕坐骨神经打一个结，在坐骨神经干上做传导阻滞麻醉，排除上行干扰。*注意：棉线要尽可能细，并拧干。如生死有效或无效以阳性反应的出现频率或百分数来表示全或无阳性率关于以及治疗指数能使群体中有半数个体出现致死量治疗指数该值越大越好说明药物越安全可用机率单位正规法或点斜法出肌松药分为去极化型和非去极化型两种的代表为筒箭毒碱其肌松作用能被新斯的明解救测定的意义可计算治疗指数为临床安全用药提供指导实验动物小鼠昆4 别离腓神经：在膝关节外侧，剪开皮肤，钝性别离肌肉组织，别离腓神经 位置较浅，很细，在横向与斜向纤维之间，向外下方走行。深层为胫神经，不可误认，神经穿线备用以备在此安装刺激电极，进行实验刺激。5 别离胫前肌：两前肢背位固定在手术台上仰卧，从后肢踝关节正前方向上剪开小腿皮肤，剪断踝关节前部横韧带，别离胫前肌肌腱，沿胫骨别离胫前肌注意不要损伤血管，在踝部的胫前肌肌腱处扎线，于结扎线远端切断肌腱。6 连接仪器：手术操作完成后，将胫前肌与 Powerlab 的拉力换能器相连接，腓神经处安放刺激电极。最适前负荷定为10g。稳定一段时间后，于给药前记录一段正常的肌肉收缩曲线。7 给药 1：腹腔注射 tubocurarine 0.2mg/kg体重0.005%tub，0.4ml/100g体重，待收缩振幅被抑制了 20%时以正常振幅为 M，可由电脑显示屏上实时观察收缩振幅相对于 M点的变化情况。也可以拉开左侧窗口，进行比照观察，立即由舌静脉匀速注射 neostigmine 0.1mg/kg体重0.01%Neo，0.1ml/100g体重。注意在给药时加注 Comment 8 给药 2：肌肉收缩恢复后，ip.Succinylcholine 1.22.4mg/kg体重0.03%Suc，0.40.8ml/kg体重，待收缩振幅被抑制了 20%时，立即由舌静脉匀速注射 neo 0