2023年生物组织中还原性糖蛋白质的鉴定超详细导学案.pdf

学习必备 欢迎下载 生物组织中还原性糖、蛋白质的鉴定【课前自主预习】一实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中还原性糖和蛋白质，阐明实验原理颜色反应，识记和区分用于还原性糖、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握 NaOH 溶液和 CuSO4 溶液的使用方法。二实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。1生物组织中普遍存在的还原性糖类较多，有单糖、麦芽糖和乳糖。由于分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖、淀粉等分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中还原性糖，而不能鉴定非还原性糖。还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O 沉淀。如：葡萄糖+2Cu2+4OH 加热 葡萄糖酸+Cu 2O（砖红色）+H 2O 即 Cu 2+被还原成 Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色棕色砖红色沉淀 2蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性 NaOH 溶液中能与双缩脲试剂中的 Cu2+作用，产生紫色反应。）三实验材料 1做还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。2做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。四、实验试剂 1斐林试剂（包括甲液：质量浓度为 0.1g/mL NaOH 溶液和乙液：质量浓度为 0.05g/mL CuSO4溶液）2双缩脲试剂（包括 A 液：质量浓度为 0.1g/mL NaOH 溶液和 B 液：质量浓度为 0.01g/mL CuSO4溶液）五、方法步骤：（一）还原性糖的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 1.制备组织样液。（去皮、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。2.取 1 支试管，向试管内注入 2mL 组织样液。3.向试管内注入 1mL 新制的斐林试剂，振荡。应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的 Cu(OH)2在 70 900C 下分解成黑色CuO 和水；甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无 Cu OH 生成。4.试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2 分钟，观察到溶液颜色：最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；学习必备 欢迎下载 浅蓝色 棕色 砖红色（沉淀）者。（三）、蛋白质的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 制备组织样液。（浸泡、去皮研磨、过滤。）黄豆浸泡 1 至 2 天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。鉴定。加样液约 2ml 于试管中，加入双缩脲试剂 A，摇匀；再加入双缩脲试剂B 液 34 滴，摇匀，溶液变紫色。A 液和 B 液也要分开配制，储存。鉴定时先加 A液后加 B 液。CuSO4溶液不能多加。先加 NaOH 溶液，为 Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B 液混装或同时加入，会导致Cu2+变成 Cu(OH)2沉淀，而失效。否则 CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。可用蛋清代替豆浆。蛋清要先稀释。如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。【课堂自主探究】思考 1完成下列表格：还原性糖 淀粉 蛋白质 试剂 现象 思考 2试以葡萄糖为例写出相应方程式：思考 3蛋白质检测的反应机制是什么？思考 4做还原性糖鉴定实验应选择什么样的实验材料？为什么？思考 5为什么苹果或梨组织液必须临时制备？思考 6做蛋白质的鉴定实验应选择什么样的实验材料？思考 7斐林试剂与双缩脲试剂相同吗？区别是什么？思考 8实验中应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂，为什么？思考 9实验中能否将斐林试剂的甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测？为什么？思考 10还原糖溶液检测过程中出现的颜色变化过程是怎样的？思考 11蛋白质检测时为什么要先加双缩脲试剂A 液后加 B 液，而不能同时加入？思考 12检测时向试管内加双缩脲试剂 B 液 4 滴，为什么 CuSO4溶液不能多加？中还原性糖和蛋白质阐还明实验理颜色反应阐识记区分用糖于某些化学试剂能使能和生物组生和织的有关机合产特定所特斐林林和只鉴关机合不非?能?织?阐?和?糖生物?某?