实验八.中性粒细胞吞噬功能检测.ppt

实验七思考题：为何常用密度为实验七思考题：为何常用密度为1.077土土0.002的分层液分离人单个核细胞？的分层液分离人单个核细胞？答：这和人外周血中各类成分密度有关。答：这和人外周血中各类成分密度有关。血小板：血小板：1.030-1.035，淋巴细胞：，淋巴细胞：1.075-1.090，粒细胞，粒细胞:1.092，红细胞：，红细胞：1.093，因此将血液叠加在因此将血液叠加在1.077土土0.002的分层液上面，的分层液上面，经离心会单个核细胞会处于血浆和分离液中间，经离心会单个核细胞会处于血浆和分离液中间，从而达到分离目的。从而达到分离目的。实验八实验八 中性粒细胞吞噬功能检测中性粒细胞吞噬功能检测 临床微生物及免疫学检验教研室临床微生物及免疫学检验教研室一、实验目的一、实验目的1.1.掌握中性粒细胞吞噬功能试验的原理。掌握中性粒细胞吞噬功能试验的原理。2.2.熟悉中性粒细胞吞噬功能试验的操作方法。熟悉中性粒细胞吞噬功能试验的操作方法。二、实验原理二、实验原理 中性粒细胞具有吞噬细菌和异物颗粒的能力。中性粒细胞具有吞噬细菌和异物颗粒的能力。在体外将中性粒细胞与细菌或异物颗粒共同孵育后，在体外将中性粒细胞与细菌或异物颗粒共同孵育后，即可被中性粒细胞吞噬、摄入，显微镜观察可见中即可被中性粒细胞吞噬、摄入，显微镜观察可见中性粒细胞内有细菌或异物颗粒。性粒细胞内有细菌或异物颗粒。二、实验原理二、实验原理l计算吞噬有细菌或异物颗粒的中性粒细胞数占计算吞噬有细菌或异物颗粒的中性粒细胞数占中性粒细胞总数的百分率和每个中性粒细胞平中性粒细胞总数的百分率和每个中性粒细胞平均吞噬细菌或异物颗粒数，可反应中性粒细胞均吞噬细菌或异物颗粒数，可反应中性粒细胞的吞噬功能。的吞噬功能。三、实验器材三、实验器材1.1.标本：人抗凝血标本：人抗凝血2.2.被吞噬物被吞噬物 ：金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌3.3.培养基：肉汤培养基培养基：肉汤培养基4.4.试剂：瑞吉氏染液、无菌生理盐水试剂：瑞吉氏染液、无菌生理盐水5.5.器材：枸橼酸钠抗凝管、试管、载玻片、器材：枸橼酸钠抗凝管、试管、载玻片、恒温箱、显微镜等。恒温箱、显微镜等。1.1.制备被吞噬物：制备被吞噬物：金葡菌接种于肉汤培养金葡菌接种于肉汤培养基中培养基中培养12h12h后，置后，置44备用。备用。2.2.准备被检测标本：准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血枸橼酸钠抗凝血1ml1ml。四、实验步骤四、实验步骤实验步骤实验步骤3.3.混合培养：混合培养：在在1ml1ml抗凝血中加入金葡菌悬抗凝血中加入金葡菌悬液液3-53-5滴，混匀，置滴，混匀，置37 37 水浴箱中，孵育水浴箱中，孵育30min30min，期间每，期间每10min10min摇匀摇匀1 1次。次。4.4.制备细胞推片，瑞制备细胞推片，瑞-吉染色：吉染色：5.5.油镜观察：油镜观察：计数计数200200个中性粒细胞，记录个中性粒细胞，记录吞噬细菌的细胞数和每个中性粒细胞吞入吞噬细菌的细胞数和每个中性粒细胞吞入的细菌数。的细菌数。五、结果判断五、结果判断l中性粒细胞核深染且分叶，胞浆淡红色，细菌呈紫色中性粒细胞核深染且分叶，胞浆淡红色，细菌呈紫色-l吞噬百分率（吞噬百分率（%）=100100l吞噬指数吞噬指数=l参考区间：吞噬率参考区间：吞噬率（9191 +5.85.8）%；吞噬指数大于；吞噬指数大于1 1计数的中性粒细胞吞噬细菌总数计数的中性粒细胞吞噬细菌总数计数的中性粒细胞总数计数的中性粒细胞总数吞噬细菌的中性粒细胞数吞噬细菌的中性粒细胞数计数的中性粒细胞总数计数的中性粒细胞总数-六、注意事项六、注意事项1.1.抗凝剂的选择：抗凝剂的选择：肝素抗凝时白细胞着色不佳，肝素抗凝时白细胞着色不佳，经瑞经瑞-吉染色后易出现深蓝色背景；吉染色后易出现深蓝色背景；EDTAEDTA影响影响 白细胞的吞噬功能；构椽酸钠抗凝最合适。白细胞的吞噬功能；构椽酸钠抗凝最合适。2.2.细菌的浓度和孵育温度：细菌的浓度和孵育温度：3.3.血涂片的质量：血涂片的质量：七、应用与评价七、应用与评价l本试验可用于检测有吞噬功能障碍的病症，如结合本试验可用于检测有吞噬功能障碍的病症，如结合NBTNBT（硝基蓝四氮唑还原试验），在一定程度上可反（硝基蓝四氮唑还原试验），在一定程度上可反映机体的免疫功能状态，也可用于有免疫调节活性映机体的免疫功能状态，也可用于有免疫调节活性药物的筛选。药物的筛选。l此法操作简便，不需特殊设备，省时，费用低廉。此法操作简便，不需特殊设备，省时，费用低廉。但光学显微镜分辨率低，有时难以计数吞入的细菌但光学显微镜分辨率低，有时难以计数吞入的细菌颗粒。颗粒。八、思考题八、思考题绘制中性粒细胞吞噬细菌的镜下形态。绘制中性粒细胞吞噬细菌的镜下形态。