专业论文读书报告淡水褶纹冠蚌溶菌酶的基因识别和重组蛋白课件.ppt

专业论文读书报告报告人：程玲慧Gene identification and recombinant protein of a lysozyme from freshwater mussel Cristaria plicata淡水褶淡水褶纹纹冠蚌溶菌冠蚌溶菌酶酶的基因的基因识别识别和和重重组组蛋白蛋白摘要摘要溶菌酶是双壳类动物中固有的免疫反应中抗细菌感染的重要蛋白质，并作为消化酵素提供营养。CpLYZ1 cDNA 序列的全长是 763bp。CpLYZ1可以被检测到在所有被审查的组织中，但肝胰腺中有最高表达水平。在嗜水气单胞菌侵染后，血细胞、肝胰脏和鳃中 CpLYZ1 的表达水平显著增加。血细胞CpLYZ1 表达水平在被感染后的6h24h又急剧下降,在 48 h大大增加。而在肝胰腺和鳃中达到最高水平分别需24h、48h。CpLYZ1最适pH值和温度分别为 5.5 和 50。对大肠埃希氏大肠杆菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、链球菌 sp和表皮葡萄球菌，重组 CpLYZ1具有溶菌活力。关键词：淡水褶淡水褶纹冠蚌冠蚌 溶菌溶菌酶 基因克基因克隆隆 基因基因 重重组蛋白蛋白一、引言溶菌酶是很多种生物无处不在的酶。这种酶可以切断细菌细胞壁的两个氨基糖、N-乙酰胞壁酸与 N-乙酰氨基葡萄糖之间形成的糖苷键从而导致细胞溶解溶菌酶的主要生物作用是主体防御，这种酶可以作为抗菌和免疫调节剂。同时，溶菌酶被视为一些动物的重要消化酶，特别是对于过滤器式喂养的有机体。在这项研究中主要要了解正常双壳类肝胰脏、鳃、血细胞等组织中cplyz1 mRNA转录调控的表达模式。二、材料与方法实验动物和细菌的挑战 RNA提取和cDNA合成扩增阳离子和内部CpLYZ1 cDNA片段的克隆快速扩增cDNA末端（RACE）的阳离子序列分析嗜水气单胞菌入侵之后CpLYZ1 mRNA的组织分布和时间表达重组表达载体的构建重组CpLYZ1的表达，纯化阳离子和复性溶菌酶活性测定重组CpLYZ1的抗菌谱同源性比较，系统发育分析的域结构CpLYZ mRNA 在不同组织中的分布重组蛋白的表达，纯化和复性温度和pH对重组cplyz1相关活性的影响讨论溶菌酶是具有杀菌效果和免疫功能的效应分子。它有三个类型、c 型、g 型和 i 型。i-型溶菌酶基因表达模式对组织的变化无动于衷可，能表示它们在其进化过程中有不同的生物逻辑函数Glu35 和 Asp52是必不可少的两个酸性残留物的来保持c 类型溶菌酶活性。在研究中，重组 CpLYZ1 显示广泛的对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抗菌活性。结果表明 CpLYZ1 拥有酶促和非酶抗菌活性。特别是病原体引起的水生动物疾病的水生动物有抗菌活性。我们推测非酶抗菌活性的 CpLYZ1 引起单螺旋肽，及其机制需要进一步清验证阳离子。