果蝇伴性遗传实验.ppt
果蝇的伴性遗传主讲人：鲁钰小组成员：周颖、鲁钰、余一鸣IntroductionMaterials and MethodsDiscussion Experience ContentsIntroduction 一个好的实验动物材料必须具备：生活史短、繁殖力强、容易饲养及许多遗传标记因子等条件。果蝇即是因上述的优点在二十世纪以来的遗传学上扮演了重要的角色。以果蝇作为实验的材料最早可追溯至1901年Castle成功的将果蝇培养在实验室中作为研究的材料；而将果蝇作遗传研究的先趋则是在1909年Morgan的研究。以研究成果而言，本二十世纪初即有相关的研究报告，今日，由于近百年来研究成果的累积，我们对果蝇的遗传背景了解的相当清楚，而且果蝇幼虫的唾液腺细胞又有多丝染色体。所以只要提到遗传，果蝇是当然的主角。实验材料：黑腹果蝇野生型：红眼（+），长翅（+），直刚毛（+）黑腹果蝇突变体：三隐性突变体药品：乙酸、乙醚、丙酸、石炭酸品红、果蝇培养基器材：显微镜、解剖镜、载玻片、盖玻片、麻醉瓶、培养箱、接种针、试管等Materials Methods配好培养基，备好药品及各种器材后，收集野生型红眼果蝇和三隐性白眼果蝇处女蝇10只左右。取红眼雌蝇（处女蝇）10只左右放入内有培养基的试管中，再取10只白眼雄蝇也放入其中，此为亲本正交组；再取10只左右白眼雌蝇（处女蝇）放入另一支试管中，同样，红眼雄蝇10只加入该试管，放入温箱中25左右培养。78天，等出现F1代幼虫后，把亲本处理掉。再过46天，F1代成蝇出现，观察F1代成蝇眼色并记录数据。Methods将F1代雌雄果蝇互交，分别放入事先配制好培养基的两支新的试管中，仍然置于25培养箱中培养。同前述操作，待78天后，F2代幼虫出现，处理掉试管内的F1代成虫。F2代从幼虫发育为成虫后，对其麻醉，辨别雌雄及观察眼色，作好记录工作。记录完毕后，将果蝇全部处理掉，清洗试管并整理器材等，进行后期的数据处理及分析工作。Methods果蝇的麻醉处理：用棉花蘸取少量乙醚，塞在试管口，约10秒后，果蝇因麻醉而不再动弹，移开棉花，将已麻醉的果蝇倒在一张白纸上，用毛笔和解剖镜观察性状、性别、计数或挑选处女蝇。果蝇的雌雄识别：果蝇的性梳是一个决定雌雄果蝇的第二性征。性梳着生在雄果蝇的第一对前足的第一个跗节上，因形状与梳头的梳子非常相似，又与性别有关而得名。在鉴别雌雄果蝇的特征中，除性梳这一性状需要借助显微镜观察外，其它性状都可以用肉眼直接观察。处女蝇的选取方法：雌果蝇自羽化开始10小时之内尚未成熟而无交配能力。选择处女蝇时，先把试管中的老果蝇全部除去，收集10小时之内羽化出来的新果蝇，麻醉后放在白纸上，将果蝇雌雄分开，这时得到的雌果蝇应该全部都是处女蝇。如果要验证选取的处女蝇是否准确，先不要放入雄蝇，3天后看雌蝇是否产卵，如果产卵就不是处女蝇了。果蝇的接种：用毛笔把未醒来的果蝇，先放在倒着的试管内，以免沾死在培养基上，醒后再将试管直立。必须及时塞上塞子，并给试管标注果蝇性别、性状、培养时间等。正交P：X+X+XwY(红眼雌蝇）（白眼雄蝇）Discussion F1:X+Xw X+Y（红眼雌蝇）（红眼雄蝇）F2：X+X+X+Y X+Xw XwY(红眼雌蝇）（红眼雄蝇）（白眼雄蝇）2：1：1 反交P:XwXw X+Y（白眼雌蝇）（红眼雄蝇）F1：X+Xw XwY(红眼雌蝇）（白眼雄蝇）F2：X+Xw X+Y XwXw XwY(红眼雌蝇）：（白眼雌蝇）：（红眼雄蝇）：（白眼雄蝇）1:1:1:1 实验设计杂交图谱如下所示：Discussion图:果蝇染色体图示及相关基因位置展示实验预期结果：正交：F1：全是红眼F2：雌蝇均为红眼，雄蝇红眼、白眼各半反交：F1：雌蝇均为红眼，雄蝇均为白眼F2：雌蝇红眼、白眼各半，同样，雄蝇红眼、白眼各半控制眼色的等位基因位于X染色体上，红眼为显性，白眼为隐性Discussion1)在培养果蝇时应该注意：要经常观察,及时将已生霉的试管中的果蝇转移到干净的试管中。注：本次试验中有一支试管受真菌感染作废，原因可能是在转移的时候棉塞受污染所导致的。2)试管必须加盖(用纱布、卫生纸、滤纸、棉塞等物),以免果蝇飞出管外，但也要保证透气性。3)用消过毒的毛笔挑取果蝇，并放在洁净的白纸上观察，切忌使用镊子或其他锋利的金属器具，以免戳伤果蝇蝇体和生殖器，影响果蝇生长繁育。Discussion4)要控制温度，果蝇的生活史周期的长短与温度有密切关系，提高温度和降低温度都会使果蝇的生活史周期缩短或延长。如果超过30，会造成雌蝇的育性下降或不育，甚至可引起果蝇的死亡。相反，把环境温度降低到10，果蝇的生活史周期可延长到50多天，这时果蝇的生活力很低。果蝇的适宜环境温度2025，故应放在恒温箱中培养，最好为25。5)在F1代和F2代培养的试管中要控制虫体密度,可在受精卵开始发育时将成蝇的大部分或全部放掉,或转移至新试管中。在下一代的子代羽化之前一定要将亲本全部清除干净并处死，以免出现回交现象影响统计结果的准确性。Discussion6)果蝇的麻醉要适度。掌握好麻醉的时间，乙醚滴加的量要控制好，如果麻醉不足会导致果蝇在实验完成前苏醒，果蝇活动影响观察；若麻醉过度甚至会导致果蝇死亡，影响翅膀等性状的观察和判断。7)亲本必须为处女蝇，其原因是雌蝇生殖器官有受精囊，可以保存交配所得的大量精子，能使交配后卵巢产生的卵受精。在杂交时，若雌蝇不是处女蝇，其体内已储有另一类型雄蝇的精子，会严重影响实验结果，导致整个实验失败。故处女蝇的挑选十分关键。磨刀不误砍柴工Experience失败是成功之母有志者，事竟成千里之堤，溃于蚁穴三人行，必有我师焉 风雨总在阳光后Reference1.贺竹梅编著.现代遗传学教程.2002.3 ISBN978-7-306-01896-0.中山大学出版社 2.路淑霞，常重杰，卢龙斗，等.果蝇杂交实验方案的设计与安排J.生物学通报，2000(11):36-37.3.李国泰.白眼残翅果蝇的培养及遗传分析J.通化师范学院学报，2004(10):55-56.4.王金发，戚康标，何炎明.遗传学实验教程J.2008年2月第1版.北京：高等教育出版社，2008，2：7-8，19-22.谢谢您的聆听！Thanks for your listening
