猪瘟传染病实验猪伪狂犬病的实验室诊断.x-[自动保存的]课件.ppt

猪伪狂犬病的实验室诊断 神经症状 死胎猪伪狂犬病临床症状 淋巴结肿大 肺部病变 肝脏白色坏死灶猪伪狂犬病剖检病变实验目的：熟悉伪狂犬病的实验室诊断方法伪狂犬病的实验室诊断实验内容抗原的检测特异性抗体的检测病毒的分离培养特异性免疫荧光诊断法中和抗体的检测：灵敏、假阳性少乳胶凝集试验测定抗体胶体金：猪伪狂犬病抗体检测卡ELISA诊断方法接种鸡胚分离病毒：911日龄鸡胚绒毛尿囊膜接种。特征性病变：心肝脾增大；心包腔积液，液体混浊；肝脾有大的坏死灶；皮肤和脑出血。在血管内皮细胞、脾基质细胞、肝的实质细胞和基质细胞内，镜检可见核内包涵体。细胞培养分离病毒：常用猪肾细胞，仓鼠肾细胞,鸡胚成纤维细胞。接种后一般经48小时出现病变，出现巨细胞。病毒鉴定：除对病毒的形态结构、理化学和培养特性检查外，要重点做病毒中和实验。病毒的分离培养（二）对可疑病畜或接种动物的中枢神经系统如中脑、桥脑、延脑或脊髓作冰冻切片或压片，用免疫荧光直接法检查。阳性病例可见神经节细胞浆及核内均有荧光。特异性免疫荧光诊断法原理 微孔反应板已包被有高纯度的猪伪狂犬病毒抗原，能与样本中的PRV-Ab结合，再与酶标抗猪IgG抗体形成包被抗原+PRV-Ab+酶标抗猪IgG抗体复合物，加入显色剂，通过酶催化反应显色。显色深浅与PRV-Ab的量成正比，当样本反应显色后，经酶标仪检测所得结果超过设定的临界值时结果判为阳性，即表明免疫产生了抗体或有自然感染存在。特异性抗体检测（ELISA）在酶标仪上测各孔的OD值。检测结果有效的条件是阳性对照孔的OD值0.6，阴性对照孔的OD值必须0.1；样品中抗体存在与否，或样品中抗体的相对水平的高低由S/P值决定，S/P值计算时按以下方式处理：S/P=（样本OD450/630值-NCX）/(PCX-NCX)NCX:阴性对照孔的OD值 PCX:阳性对照孔的OD值当样本的S/P值0.25时判为阳性样本的S/P值0.25时判为阴性 样本中抗体相对水平效价（ET），其与S/P的关系如下：Lg（ET的倒数）=0.7168X+2.1823X=S/P值 注：此效价是根据实验室目前对PRV检测方法和免疫的抗体反应两方面综合而定；在免疫时效检测和记录有代表性样本的抗体效价是对猪群的免疫状况的最好评价。结果判定