风湿病与免疫性疾病的实验诊断史晓敏-课件.ppt

第十章第十章 风湿病与免疫性疾病风湿病与免疫性疾病的实验诊断的实验诊断第十一章第十一章 肿瘤的实验诊断肿瘤的实验诊断检验科免疫室第十章第十章 风湿病与免疫性疾病的风湿病与免疫性疾病的实验诊断实验诊断免疫系统免疫系统immune systemn n人体的防卫系统l l监视自己监视自己l l抵御外侵抵御外侵免疫性疾病免疫性疾病immuno diseasesn n自身免疫性疾病(autoimmune diseasesautoimmune diseases)*n n变态反应性疾病(allergic diseasesallergic diseases)*n n免疫缺陷性疾病 (immunodeficiency diseasesimmunodeficiency diseases)n n移植排斥(transplantation rejectiontransplantation rejection)n n第一部分第一部分一般检查及免疫功能试验免疫性疾病免疫性疾病n n一般检查 血常规、尿常规、肝肾功能、血沉、血常规、尿常规、肝肾功能、血沉、血常规、尿常规、肝肾功能、血沉、血常规、尿常规、肝肾功能、血沉、C C C C反应蛋白反应蛋白反应蛋白反应蛋白 n n免疫功能试验l l体液免疫体液免疫l l细胞免疫细胞免疫免疫球蛋白定量（掌握）免疫球蛋白定量（掌握）克隆性免疫球蛋白的分类与鉴定（熟悉）克隆性免疫球蛋白的分类与鉴定（熟悉）免疫球蛋白轻链测定（熟悉）免疫球蛋白轻链测定（熟悉）补体测定（熟悉）补体测定（熟悉）冷球蛋白测定（了解）冷球蛋白测定（了解）血液淋巴细胞免疫表型分析（熟悉）血液淋巴细胞免疫表型分析（熟悉）细胞因子测定（了解）细胞因子测定（了解）免疫球蛋白免疫球蛋白immunoglobulin,Ign n概念 B B B B细胞经抗原刺激后分化为浆细胞后所产生的一类具细胞经抗原刺激后分化为浆细胞后所产生的一类具细胞经抗原刺激后分化为浆细胞后所产生的一类具细胞经抗原刺激后分化为浆细胞后所产生的一类具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白。有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白。有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白。有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白。n n分布 血液、体液、外分泌液及某些细胞的胞膜上。血液、体液、外分泌液及某些细胞的胞膜上。血液、体液、外分泌液及某些细胞的胞膜上。血液、体液、外分泌液及某些细胞的胞膜上。n n功能 与病原微生物发生免疫反应，清除抗原物质，保持与病原微生物发生免疫反应，清除抗原物质，保持与病原微生物发生免疫反应，清除抗原物质，保持与病原微生物发生免疫反应，清除抗原物质，保持自稳自稳自稳自稳免疫球蛋白的分类免疫球蛋白的分类根据重链的不同分为五大类：根据重链的不同分为五大类：n nIgG（）n nIgA（）n nIgM（）n nIgD（）n nIgE（）IgGn n血清中含量最高和最主要的血清中含量最高和最主要的IgIg，占，占IgIg的的70-8070-80。n n是再次免疫应答的主要抗体，是再次免疫应答的主要抗体，对各种病毒、细菌、寄生虫等对各种病毒、细菌、寄生虫等都具有抗体活性。都具有抗体活性。n n它是唯一能够通过胎盘的它是唯一能够通过胎盘的IgIg。IgMn n是分子量最大的是分子量最大的Ig,Ig,占占IgIg的的5-10%5-10%。n n当机体受到抗原刺激后最当机体受到抗原刺激后最先产生的先产生的IgIg，水平增高说，水平增高说明有近期感染。明有近期感染。n n是极为有效的凝集和溶解是极为有效的凝集和溶解细胞的因子，天然血型抗细胞的因子，天然血型抗体体(抗抗A A、抗、抗B)B)、冷凝集素、冷凝集素等均属此类。等均属此类。免疫球蛋白的定量检测免疫球蛋白的定量检测n n适应症 了解体液免疫功能了解体液免疫功能了解体液免疫功能了解体液免疫功能n n标本类型 血液、尿液、脑脊液、血液、尿液、脑脊液、血液、尿液、脑脊液、血液、尿液、脑脊液、浆膜腔积液浆膜腔积液浆膜腔积液浆膜腔积液n n参考区间 血清血清血清血清 IgGIgGIgGIgG6.94-16.18 g/L6.94-16.18 g/L6.94-16.18 g/L6.94-16.18 g/LIgAIgAIgAIgA0.68-3.78 g/L0.68-3.78 g/L0.68-3.78 g/L0.68-3.78 g/LIgMIgMIgMIgM0.60-2.63 g/L 0.60-2.63 g/L 0.60-2.63 g/L 0.60-2.63 g/L 速率散射比浊法速率散射比浊法 IgEIgEIgEIgE100 IU/mL 100 IU/mL 100 IU/mL 959520-60302030205099抗抗dsDNA抗体抗体50-80少见少见0-29少见少见少见少见35少见少见抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体25-60950-3002701020抗抗Sm抗体抗体25-40少见少见少见少见少见少见少见少见少见少见抗抗nRNP抗体抗体26-45014102202010100抗抗SSA（RO）抗）抗体体30-406075010少见少见520少见少见抗抗SSB（La）抗体）抗体0-15506005少见少见05020抗抗Scl-70抗体抗体-3060-抗抗PM-1抗体抗体-2050-抗抗Jo-1抗体抗体-2050-抗着丝点抗体抗着丝点抗体-2050(CREST)80-抗核仁抗体抗核仁抗体6939-15-How to read an inspection report of ANA1.positive or negative2.fluorescence pattern3.titer4.antigen5.reference rangeInspection report of ANAWhats Titer?抗体滴度及强度抗体滴度及强度抗体滴度及强度抗体滴度及强度临床意义临床意义临床意义临床意义1:1001:100（）可疑阳性可疑阳性可疑阳性可疑阳性1:3201:320弱阳性，追踪观察弱阳性，追踪观察弱阳性，追踪观察弱阳性，追踪观察1:10001:1000中等阳性，提示可能存在相关疾病中等阳性，提示可能存在相关疾病中等阳性，提示可能存在相关疾病中等阳性，提示可能存在相关疾病 1:3200 1:3200强阳性，高度提示存在相关疾病强阳性，高度提示存在相关疾病强阳性，高度提示存在相关疾病强阳性，高度提示存在相关疾病 1:10000 1:10000 极强阳性，高度提示存在相关疾病极强阳性，高度提示存在相关疾病极强阳性，高度提示存在相关疾病极强阳性，高度提示存在相关疾病陽性陽性陽性陽性抗双链脱氧核糖核酸抗体抗双链脱氧核糖核酸抗体（抗（抗dsDNAdsDNA抗体）抗体）n n检测方法 IIF ELISA 抗双链脱氧核糖核酸抗体抗双链脱氧核糖核酸抗体（抗（抗dsDNAdsDNA抗体）抗体）临床意义：1、SLE诊断标准之一2、抗dsDNA抗体与SLE疾病活动密切相关，用于监视SLE病情变化，药物治疗效果观察等 3、如果健康人血清中检测到抗dsDNA抗体，其中85%的人在5年内发展为SLE 抗可提取性核抗原抗体抗可提取性核抗原抗体（抗（抗ENAENA抗体）抗体）n nENA（extractable nuclear antigen）由小分子由小分子RNA和特定蛋白质组成的核糖核蛋白，和特定蛋白质组成的核糖核蛋白，不含组蛋白，可以溶解于生理盐水和磷酸盐缓冲不含组蛋白，可以溶解于生理盐水和磷酸盐缓冲液中。液中。n n检测方法检测方法 抗可提取性核抗原抗体抗可提取性核抗原抗体（抗（抗ENAENA抗体）抗体）n n临床意义：临床意义：抗U1RNP抗体 混合性结缔组织病的标志抗体抗Sm抗体 SLE的标志抗体的标志抗体抗SS-A抗体 干燥综合征，狼疮抗SS-B抗体 干燥综合征抗Scl-70抗体 进行性系统性硬化症（弥漫性）抗Jo-1抗体 多发性肌炎/皮肌炎抗PM1抗体 多发性肌炎/皮肌炎，系统性硬化症 类风湿因子（Rheumatoid factor，RF）n n概念变性IgG刺激机体产生的抗IgG Fc段抗体n n临床意义：1、诊断RA的重要血清学指标，阳性率50-70%2、滴度与活动度相关，持续高滴度的阳性提示类风湿关节炎活动，骨侵蚀发生率高，预后不好 3、也见于其他疾病：自身免疫性疾病，感染性疾病，非感染性疾病如 弥漫性肺间质纤维化、结节病等变态反应病变态反应病变态反应变态反应n n是是指人体与抗原物质接触后发生的不正常的免疫反应，它与生理性免疫反应不同，不但不起保护作用，相反由于反应的过度剧烈而导致生理功能的紊乱或组织的损伤。n n 分为分为 型（速发型），型（速发型），型（细胞毒型），型（细胞毒型），型（免疫型（免疫复合物型），复合物型），型（迟发型）四型。型（迟发型）四型。变态反应病变态反应病n n是由于不正常的免疫反应即变态反应而引起。n n目前变态反应病按变态反应分型，相应的分为、型变态反应病，变态反应病的诊断原则变态反应病的诊断原则变态反应病的诊断原则变态反应病的诊断原则 症状的诊断症状的诊断 病史的诊断病史的诊断 非特异性的诊断非特异性的诊断 体检诊断体检诊断 实验室一般检查实验室一般检查 影像学诊断影像学诊断 皮内试验皮内试验 皮肤试验皮肤试验 点刺试验点刺试验 划痕试验划痕试验 变态反应变态反应 斑帖试验斑帖试验 病的诊断病的诊断 体内特异性诊断体内特异性诊断 眼结膜试验眼结膜试验 鼻试验鼻试验 激发试验激发试验 支气管试验支气管试验 食物激发试验食物激发试验 特异性诊断特异性诊断 药物激发试验药物激发试验 物理性变态反物理性变态反 应激发试验应激发试验 1.tIgE1.tIgE 2.sIgE 2.sIgE 体外特异性诊断体外特异性诊断 3.ECP3.ECP 4.4.抗血细胞抗体抗血细胞抗体 5.CIC5.CIC 6.T 6.T细胞和淋巴细胞因子检测细胞和淋巴细胞因子检测 7.sIgG7.sIgGn n总总IgEIgE （掌握）（掌握）n n特异性特异性IgEIgE （熟悉）（熟悉）n n特异性特异性IgG IgG （了解）（了解）n n嗜酸性细胞阳离子蛋白嗜酸性细胞阳离子蛋白 （了解）（了解）n n循环免疫复合物的检查循环免疫复合物的检查 （了解）（了解）变态反应病常用的检查项目变态反应病常用的检查项目总IgE(total IgE，tIgE)n n体内含量最低的Ig，介导型变态反应n n临床意义：tIgE水平升高提示患有型变态反应病、寄生虫病的可能n n评价与问题 1、影响tIgE水平的因素：年龄、性别、种族 2、tIgE水平升高还见于感染、IgE骨髓瘤等，其不能作为型变态反应病的过筛指标 特异性特异性IgEIgE（specific IgEspecific IgE，sIgEsIgE）n n适应症：适应症：用于型变态反应性疾病的病因诊断及监测脱敏疗效。n n临床意义临床意义：1、体外检测变应原的重要手段2、脱敏治疗有效时，sIgE血清含量逐步下降（1）食物类：）食物类：鸡蛋白 牛奶 小麦开心果 腰果 黄豆 桃虾 鳕鱼 蟹（2）吸入类：）吸入类：户尘螨 粉尘螨 烟曲霉 交链孢霉豚草 法国梧桐 律草 蒿 桦树花粉 榆树花粉 柏树花粉 柳树花粉（3）其它类：）其它类：蟑螂 蚊子 蛾子猫毛发皮屑 狗毛发皮屑蚕丝 鸽粪蛔虫 甲醛变态反应病的实验诊断策略变态反应病的实验诊断策略1、当考虑为、当考虑为 型变态反应病时，需检测型变态反应病时，需检测tIgEtIgE，sIgEsIgE，ECPECP等；等；2 2、当考虑为、当考虑为 型变态反应病时，需检测抗血细胞抗体型变态反应病时，需检测抗血细胞抗体等；等；3 3、当考虑为、当考虑为型变态反应病时，需检测型变态反应病时，需检测CICCIC和某些自和某些自身抗体等；身抗体等；4 4、当考虑为、当考虑为型变态反应病时，需检测型变态反应病时，需检测T T细胞和淋巴细胞和淋巴细胞因子等；细胞因子等；5 5、当考虑为混合型变态反应病或不明变态反应病时，、当考虑为混合型变态反应病或不明变态反应病时，可进行上述实验项目不同组合的检测；可进行上述实验项目不同组合的检测；6 6、当变态反应病患者进行脱敏治疗时，需检测、当变态反应病患者进行脱敏治疗时，需检测sIgGsIgG等。等。第十一章第十一章 肿瘤的实验诊断肿瘤的实验诊断教学内容教学内容contents1、血清肿瘤标志物检测（掌握）2、肿瘤细胞周期与DNA倍体分析（了解）3、肿瘤基因及其表达产物的检测（了解）血清肿瘤标志物血清肿瘤标志物(tumor marker，TM)n n概念 存在于肿瘤细胞内，或由肿瘤细胞异常产生，存在于肿瘤细胞内，或由肿瘤细胞异常产生，或是宿主对肿瘤组织反应而产生的物质。或是宿主对肿瘤组织反应而产生的物质。n n分布 血液、细胞、组织或体液中n n分类 激素类、蛋白质类、糖类、酶类等肿瘤的诊断肿瘤的诊断n n病史n n临床表现n n影像学诊断n n病理学诊断-确诊依据l l缺点：不能早期诊断 监测疗效、判断复发不够灵敏n n对高危人群进行肿瘤筛查 n n辅助肿瘤的诊断 n n监测肿瘤的治疗效果、判断预后和复发肿瘤标志物肿瘤标志物理想的肿瘤标志物的特征理想的肿瘤标志物的特征(1)敏感性高，能早期测出所有肿瘤患者；(2)特异性好，非肿瘤患者均阴性；(3)有器官特异性，能对肿瘤定位；(4)血清中浓度与瘤体大小、临床分期相关，可用以判断预后；(5)半衰期短，能反映肿瘤的动态变化，监测治疗效果、复发和转移；(6)测定方法精密度、准确性高，操作简便，试剂盒价廉 常用的肿瘤标志物常用的肿瘤标志物n n1.肝：AFP、CEAn n2.结肠、胰：CEA、CA19-9、CA242n n3.胃：CA72-4、CEA、CA19-9n n4.食道：SCC、CEAn n5.肺：CEA、CA19-9、SCC、TPA、NSE、CYFRA21-1、ProGRPn n6.乳房：CA15-3、CA125、CEA、TPAn n7.卵巢：CA125、AFP、-HCG、CEAn n8.子宫：SCC、-HCGn n9.前列腺：f-PSA、t-PSA、PAP肿瘤标志物肿瘤标志物 主诊主诊 其他其他AFP AFP 肝肝肝肝 胃、胰胃、胰胃、胰胃、胰CEA CEA 结肠结肠结肠结肠 胃、胰、肝、肺、乳腺胃、胰、肝、肺、乳腺胃、胰、肝、肺、乳腺胃、胰、肝、肺、乳腺CA19-9 CA19-9 胰腺胰腺胰腺胰腺 胃、肝、胆管、结肠胃、肝、胆管、结肠胃、肝、胆管、结肠胃、肝、胆管、结肠CA125 CA125 卵巢卵巢卵巢卵巢 胰、肝、胆管、结肠、胃胰、肝、胆管、结肠、胃胰、肝、胆管、结肠、胃胰、肝、胆管、结肠、胃CA153 CA153 乳腺乳腺乳腺乳腺 胰、肺、卵巢、胃、结肠胰、肺、卵巢、胃、结肠胰、肺、卵巢、胃、结肠胰、肺、卵巢、胃、结肠CA72-4 CA72-4 胃胃胃胃 结肠、卵巢、食管、胰结肠、卵巢、食管、胰结肠、卵巢、食管、胰结肠、卵巢、食管、胰PSA PSA 前列腺癌前列腺癌前列腺癌前列腺癌NSE NSE 小细胞肺癌小细胞肺癌小细胞肺癌小细胞肺癌 神经母细胞瘤、内分泌瘤神经母细胞瘤、内分泌瘤神经母细胞瘤、内分泌瘤神经母细胞瘤、内分泌瘤SCC SCC 鳞癌鳞癌鳞癌鳞癌 肺、食道、宫颈、皮肤肺、食道、宫颈、皮肤肺、食道、宫颈、皮肤肺、食道、宫颈、皮肤CYFRA21-1 CYFRA21-1 非小细胞肺癌非小细胞肺癌非小细胞肺癌非小细胞肺癌 肺肺肺肺-HCG -HCG 绒癌、睾丸癌绒癌、睾丸癌绒癌、睾丸癌绒癌、睾丸癌 乳腺癌、胃肠道癌、肺癌乳腺癌、胃肠道癌、肺癌乳腺癌、胃肠道癌、肺癌乳腺癌、胃肠道癌、肺癌 甲胎蛋白甲胎蛋白-fetoprotein，AFPn n一种糖蛋白，胎儿期由肝脏合成，出生后不久即转为阴性或含量极微n n当肝细胞或生殖腺组织发生恶性肿瘤时，有关基因被激活，AFP重新开始合成-临床意义：(1)原发性肝癌 400 ng/mL 400 ng/mL（医学决定水平）（医学决定水平）(2)生殖腺肿瘤 睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤等睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤等(3)其他消化道恶性肿瘤 胃癌、肠癌、胆管癌等胃癌、肠癌、胆管癌等 (4)急慢性肝炎、肝硬化 300ng/mL300ng/mL(5)孕妇 1010周周，8 89 9月高峰月高峰(400)(400)，分娩后约，分娩后约3 3周正周正常；异常增高帮助产前诊断胎儿宫内死亡、神经管畸形、常；异常增高帮助产前诊断胎儿宫内死亡、神经管畸形、脑积水、无脑儿和脊柱裂脑积水、无脑儿和脊柱裂 甲胎蛋白，甲胎蛋白，AFP癌胚抗原癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）n n富含多糖的蛋白复合物，由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝的细胞所合成，出生后血中含量极低临床意义：n n非器官特异性肿瘤相关抗原，通常为消化道恶性肿瘤，尤其是肠癌的标志物（通常高于参考上限4倍）n n肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者血清CEA量会明显升高 n n监测血清CEA含量，对肿瘤疗效及复发判断更具有意义 n n消化系统、呼吸系统良性病变，可轻度升高 癌胚抗原癌胚抗原，CEAn n1.肝：AFP、CEAn n2.结肠、胰：CEA、CA19-9、CA242n n3.胃：CA72-4、CEA、CA19-9n n4.食道：SCC、CEAn n5.肺：CEA、CA19-9、SCC、TPA、NSE、CYFRA21-1、ProGRPn n6.乳房：CA15-3、CA125、CEA、TPAn n7.卵巢：CA125、AFP、-HCG、CEAn n8.子宫：SCC、-HCGn n9.前列腺：f-PSA、t-PSA、PAP(1）在良性疾病时，如炎症性疾病会使一些肿瘤标志表达增加(2）有一些生理变化，如妊娠时 AFP、CAl25、人绒毛膜促性腺激素和月经时CAl25也会升高 结果分析：假阳性结果分析：假阳性（1）产生肿瘤标志的肿瘤细胞数目少。（2）细胞或细胞表面被封闭。（3）机体体液中一些抗体与肿瘤标志(肿瘤抗原)形成免疫复合物。（4）肿瘤组织本身血循环差，其所产生肿瘤标志物不能分泌到外周血中。结果分析：假阴性结果分析：假阴性应用注意事项应用注意事项 n n对无症状人群进行早期肿瘤筛选是无意义的n n对不同个体的结果进行相互比较是不可取的n n在对病人监测的连续测试过程中，应选用同一分析系统。不同的实验方法、不同的实验室，参考值有所不同n n应合理选用项目，组合测定n n思考题l l免疫功能试验包括哪些内容；免疫球蛋白定量测定免疫功能试验包括哪些内容；免疫球蛋白定量测定的临床意义。的临床意义。l l临床现在常用的淋巴细胞免疫表型分析有那几种，临床现在常用的淋巴细胞免疫表型分析有那几种，临床意义。临床意义。l l什么是什么是RFRF，有何临床意义。，有何临床意义。l l什么是抗核抗体（什么是抗核抗体（ANAANA），检测方法是什么，常见），检测方法是什么，常见的自身免疫性疾病特异性的自身抗体有哪些。的自身免疫性疾病特异性的自身抗体有哪些。l l如怀疑如怀疑 型变态反应性疾病需做哪些实验室检查。型变态反应性疾病需做哪些实验室检查。l lAFPAFP，CEACEA检测的临床意义，临床几种常见肿瘤首检测的临床意义，临床几种常见肿瘤首先选用的肿瘤标志物先选用的肿瘤标志物 。n n主要参考书1、王建中主编，实验诊断学，2010。2、朱立华主编，长学制用实验诊断学，2001。3、Thomas 主编，Clinical Laboratory Diagnostics,20004、自身抗体及其免疫荧光模型，马东来等主编。北京科学技术出版社。5、免疫学和免疫学检验 陶义训主编 人民卫生出版社 第二版