实验三环境和人体微生物的检验及无菌操作技术.ppt

实验三 环境和人体微生物的检验及无菌操作技术目目 的的 要要 求求n掌握从土壤中分离微生物的方法，通过检测掌握从土壤中分离微生物的方法，通过检测环境和人体中微生物的存在，体会微生物分环境和人体中微生物的存在，体会微生物分布的广泛性。布的广泛性。n学习无菌操作的技术，掌握平板划线分离微学习无菌操作的技术，掌握平板划线分离微生物的方法。生物的方法。实实 验验 原原 理理n 自然环境中和人及动物的体表、体内都存在大量的自然环境中和人及动物的体表、体内都存在大量的微生物，它们一遇到适合的条件就会大量繁殖。当把微生物，它们一遇到适合的条件就会大量繁殖。当把取自不同来源的含菌样品接种于含有生长发育需要的取自不同来源的含菌样品接种于含有生长发育需要的各种营养成分的固体培养基时，就会形成肉眼可见的各种营养成分的固体培养基时，就会形成肉眼可见的微生物集体群落。微生物集体群落。n 每种微生物群落都有其独有的特点，如大小、颜色、每种微生物群落都有其独有的特点，如大小、颜色、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑、边缘整表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑、边缘整齐或不整齐等。因此，可以通过平板培养来检测不同齐或不整齐等。因此，可以通过平板培养来检测不同环境下微生物的数量、种类和特点。环境下微生物的数量、种类和特点。实实 验验 材材 料料n培养基培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、察氏一号培养基；：牛肉膏蛋白胨培养基、察氏一号培养基；n土土 样样：地面以下：地面以下5-10cm的土壤；的土壤；n其其 他他：酒精灯、无菌棉棒、无菌生理盐水、涂布棒、：酒精灯、无菌棉棒、无菌生理盐水、涂布棒、记号笔、培养皿、吸管、磁力搅拌器。记号笔、培养皿、吸管、磁力搅拌器。实实 验验 程程 序序（无菌操作技术（无菌操作技术）在酒精灯火焰旁操作，将融化并冷却至不烫手的灭菌在酒精灯火焰旁操作，将融化并冷却至不烫手的灭菌固体培养基倒入无菌的培养皿，倒量为容积的固体培养基倒入无菌的培养皿，倒量为容积的1/31/21/31/2或或者覆盖皿底者覆盖皿底5 5毫米左右毫米左右，然后平放到桌面待其凝固即为无，然后平放到桌面待其凝固即为无菌平板。菌平板。倒平板倒平板实实 验验 程程 序序 （土样的稀释分离（土样的稀释分离）n制备土样悬浊液：制备土样悬浊液：称取土样称取土样1g，迅速倒入盛有，迅速倒入盛有99ml无无菌水和玻璃球的三角瓶中，置菌水和玻璃球的三角瓶中，置入磁力棒，搅拌入磁力棒，搅拌10-15min，使土样充分打散，即成，使土样充分打散，即成10-2的土壤悬浊液。的土壤悬浊液。n稀释：稀释：用无菌移液管吸用无菌移液管吸10-2的土壤悬液的土壤悬液0.5mL，放入，放入4.5mL无菌水中即为无菌水中即为10-3稀释液，如此重复，可依次制稀释液，如此重复，可依次制成成10-310-6的稀释液。的稀释液。q (注意：操作时每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土注意：操作时每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土液后，要将移液管插入液面，吹吸液后，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于次，每次吸上的液面要高于前一次，以减少稀释中的误差。前一次，以减少稀释中的误差。)土样的稀释方法示意图土样的稀释方法示意图图图1 1 从土壤中分离微生物操作过程从土壤中分离微生物操作过程实实 验验 程程 序序 （环境及人体各部位取菌样（环境及人体各部位取菌样）共取六个菌样，分别为：共取六个菌样，分别为：口腔、鼻腔、口腔、鼻腔、头发、空气头发、空气和土壤稀释液中的和土壤稀释液中的1010-5-5、1010-6-6两个稀释浓度（无菌吸管分别取两个稀释浓度（无菌吸管分别取0.2ml0.2ml，无菌操作加到平板上）无菌操作加到平板上）口腔口腔:将无菌平板打开适度开口，嘴对着开口咳嗽将无菌平板打开适度开口，嘴对着开口咳嗽3-5次，次，使口腔中的微生物接种到平板中，将皿盖合上，放在桌面即使口腔中的微生物接种到平板中，将皿盖合上，放在桌面即可。可。鼻腔：鼻腔：取一支无菌棉棒，放入无菌生理盐水中沾湿后，插取一支无菌棉棒，放入无菌生理盐水中沾湿后，插入到鼻孔中转动一周，取出，在无菌平板上划线接种，取出入到鼻孔中转动一周，取出，在无菌平板上划线接种，取出棉棒，合上皿盖。棉棒，合上皿盖。头发：头发：将皿盖打开，轻拍头发，使头发中的微生物降落到将皿盖打开，轻拍头发，使头发中的微生物降落到平板表面，合上皿盖。平板表面，合上皿盖。空气：空气：选好地点后，打开皿盖，手托住平板，静止选好地点后，打开皿盖，手托住平板，静止3-5分分钟，使空气中的微生物自然降落到平板表面，合上皿盖。钟，使空气中的微生物自然降落到平板表面，合上皿盖。1010-5-5 、1010-6-6的土壤稀释液的土壤稀释液：无菌移液枪分别取：无菌移液枪分别取0.2ml，无，无菌操作加到两种平板上，每个稀释度做两套平板）。菌操作加到两种平板上，每个稀释度做两套平板）。实实 验验 程程 序序 （标记、培养（标记、培养）n标记：标记：培养类别培养类别-组别组别-样品类别样品类别-姓名姓名 1、按培养基类别：按培养基类别：细菌培养基细菌培养基-A-A，霉菌培养基，霉菌培养基-B-B 2、按按4 4个大组：个大组：、3、按样品类别：按样品类别：1010-5-5、1010-6-6、口腔、口腔-a-a、鼻腔、鼻腔-b-b、头发头发-c-c、空气、空气-d-d 4、按个人标记：按个人标记：姓名姓名n培养：培养：将接种的平板分别放入细菌和霉菌培养箱中培养。将接种的平板分别放入细菌和霉菌培养箱中培养。霉菌保持霉菌保持25-2725-27，3-53-5天天；细菌；细菌35-3735-37，1-21-2天天。具体分工小组成员菌样菌样培养平板培养平板1 1口腔口腔-a-aA AB BA A2 2鼻腔鼻腔-b-bA AB BA A3 3头发头发-c-cA AB BA A4 4空气空气-d-dA AB BA A5 51010-5-5A AB BB B6 61010-5-5A AB BB B7 71010-6-6A AB BB B8 81010-6-6A AB BB B备注备注倒平板倒平板:12:12套套A A 12 12套套B B作土壤悬液作土壤悬液8 87 76 65 54 43 32 21 1小组成员小组成员B BB BA A1010-5-5B BB BA A1010-6-6B BB BA A1010-6-6B BB BA A1010-5-5A AB BA A空气空气-d-dA AB BA A头发头发-c-cA AB BA A鼻腔鼻腔-b-bA AB BA A口腔口腔-a-a菌样菌样作土壤稀释液作土壤稀释液:1010-2-2、1010-3-3、1010-4-4、1010-5-5、1010-6-6、倒平板倒平板:12:12套套A A 12 12套套B Bn无菌倒平板时注意的事项有哪些？无菌倒平板时注意的事项有哪些？n平板接种后为什么要倒置培养？平板接种后为什么要倒置培养？n通过本次试验你学到了什么？有什么体会？通过本次试验你学到了什么？有什么体会？结果与思考题结果与思考题