乙型病毒性肝炎的实验室检查课件.ppt
乙型病毒性肝炎的实验室检查报告人：付红伟天津医大总医院检验中心2011.1.21我国感染概况 一般人群携带率高达7.18%；现有慢性感染者约9 300万人，占全世界的1/4；其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过 2 000 万例，占全世界慢性乙肝患者的1/3；15 岁以下儿童携带率下降显著，1-4 岁组仅为0.96%；1 4 岁组阳性率由1992 年15.75%升至72.25%;抗阳性率由1992 年30.08%降至3.76%；2基因组 是由长链L(负链)和短链S(正链)组成的不完全双链环状，短链的长度相当于长链的50%85%。长链载有病毒蛋白质的全部密码，有4个开放读码框架()，分别称为S、C、P和X区。编码7个蛋白质。易发生变异，特别是前S或S区基因较易突变。嗜肝病毒的共同特点：内含33.3 松散环状、部分双链基因组及聚合酶；病毒的复制需逆转录过程。3抗原和抗体系统表面抗原()：外膜糖蛋白蛋白 S蛋白：狭义的指S蛋白。阳性说明机体有感染。中分子蛋白：2 大分子蛋白：12S 蛋白中分子蛋白大分子蛋白PreS1 PreS2 S1和抗e抗原()：是可溶性蛋白质只存在于血液中是病毒复制和传染性的标志e抗体(抗)：对感染有一定的保护作用其出现标志着病毒复制减少、传染性降低前C 区C 区前C/C 蛋白表达切割、加工只存在于血清中 C基因分泌到细胞外2.和抗5 的三种形态1 B()2 3 6 自然复制周期7生物化学检测1HBV 血清标志物的检测2HBV 分子生物学诊断3HBV 临床药物疗效检测4感染的实验室检查81.乙型肝炎的生物化学检测 主要指标：,，血清白蛋白，血清胆红素，胆碱酯酶,甲胎蛋白,凝血酶原时间()及部分凝血因子；9 方法学的发展：灵敏性高，成本低，适用于普通病人筛查；胶体金免疫层析法(金标法)：简便易行，可用于急诊病人快速检测；化学发光法定量检测：价格昂贵，可用于为临界值的病人的确证；可间接反映宿主的复制水平，在评价抗病毒治疗的病毒学应答、疗效和判断预后方面有重要意义。新增检测指标 S1、S2 及其相应抗体 对乙肝两对半的新认识2.血清标志物检测10血清标志物检测方法的成本效果分析(1)11血清标志物检测方法的成本效果分析(2)12()()1 1 344 34412Ss1 s26613X S&S基因“a”决定簇 G 145 R 变异，与抗 的亲和力降低S 基因变异可导致隐匿性 感染()，表现为血清 阴性，但仍可有 低水平复制(血清 常 104 拷贝)献血员人群，隐匿性感染的检出率可达0.19%1415S1检测的临床价值 前S1 蛋白主要存在于颗粒和管型颗粒上，在感染宿主细胞 过程及在病毒复制和刺激机体产生免疫反应中起重要作用;前S1 抗原与之间有高度相关性，并可区别因变异种及其他原因造成的乙肝病毒e 抗原()假阴性，可作为假阴性补充，从而准确反映患者体内病毒复制情况；可作为感染及复制的标注，与其它血清标志物联合检测，相互补充。16大三阳小三阳17血清学标志检测结果分析16类型 样本数(n)构成比(%)1 4 0.212 23 1.203 98 5.114 46 2.405 68 3.556 184 9.607 63 3.298 470 24.539 960 50.10合计 125 717 23 350 486 1916 100 1916 例血清标志物阳性类型分布模式192021 定量检测 病毒复制水平最可靠，最直接的证据，与传染性和疾病进展密切相关；主要用于感染的判断，治疗适应症的选择及抗病毒疗效的判断。基因分型 基因分型的必要性；基因分型的主要方法；耐药突变的检测3 分子生物学诊断22慢性感染治疗适应症的选择 阳性，载量 105,2;阴性，载量 104,2;持续阳性，年龄40 岁，大于正常上限，也可给予抗病毒治疗；持续阳性，年龄40 岁，持续正常，应密切随访，动态观察疾病进展，必要时行肝组织检测，有病变证据时，可以给予抗病毒治疗；23 感染抗病毒治疗的疗效评估 治疗终点：明显下降或低于检测下限，并伴有正常；水平治疗开始后3 个月内持续下降1 以上才说明治疗有效；每日0.5 恩替卡韦治疗1 年时,阳性和阴性慢性乙型肝炎患者 检测不到率分别为67%和90%,恩替卡韦的转换率为21%,与其他口服抗病毒药相似。并不以转阴或转阴为治疗终点或目标。24 定量检测试剂盒的性能对比25同时可以实现对1,衣原体，及淋病的一体化检测26病毒基因突变疾病进展 临床表现对干扰素应答耐药变异生化学改善血清学转换 清除急性乙型肝炎慢性乙型肝炎肝硬化()肝细胞癌()基因型/基因亚型27分型方法 优缺点序列测定法 最直接，最可信，是基因分型的金标准，但繁琐费时而且价格昂贵，混合型检测能力差，不适于大样本检测。聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法()较测序法简便，适于大样本检测，但由于需要进行酶切，所以操作仍较为繁琐，成本较高，并存在酶切不彻底等问题。2单克隆抗体酶联免疫测定(法)简单、快速，已商品化，适于大样本检测，但检测费用较高并不能有效鉴别有些混合型感染和低表达及某些表位表达不充分的标本。分子探针杂交法 简单、快速，对混合型检测非常敏感，已商品化，适于大样本检测，但检测费用较高而且灵敏度和特异度还有待提高。型特异性引物法 简单、快速，成本低，具有较高的灵敏度，适于流行病学研究和临床大样本检测。但特异度还有待提高。常用基因分型方法比较28B型特异性“引物对”的特异度分析B型特异性引物（正义链）：5 3294 临床药物治疗监测 乙肝病毒的耐药性检测，是精准治疗乙肝的关键！目前由于治疗不够规范，造成我国目前超过95%的乙肝患者发生耐药、病毒变异、病毒耐药，变异检测势在必行！拉米夫定是第一个被批准治疗慢性乙型肝炎的口服抗病毒药,已在全世界广泛应用。但其耐药发生率高,治疗1年时耐药发生率为23%,2 年为46%,3 年为55%,4 和5 年分别为65%和71%。30耐药核苷(酸)类似物()治疗失败最重要原因拉米夫定阿德福韦酯替比夫定恩替卡韦替诺福韦：抑制病毒复制长期使用耐药变异31临床耐药 表型耐药基因耐药耐耐药药研究研究3233()()1 1 344 344逆转录酶()区某些位点变异与耐药相关12s1 s266可同时分析：耐药变异，变异，基因型，血清型34全长区分析技术路线 提取 提取扩增区 扩增区 产物直接测序 产物直接测序生物信息学分析与数据信息挖掘 生物信息学分析与数据信息挖掘血清与资料收集 血清与资料收集Neg.B C kb可同时分析：耐药变异，变异，基因型，血清型35小 结 更新了对乙肝两对半结果的认识；1 的临床价值和应用；检测的临床价值和意义；耐药株和耐药位点筛查方法的建立。36Thanks for your attention报告人：付红伟Email:37
