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甲流乙流病毒检验进展甲流乙流病毒检验进展甲流乙流病毒检验进展甲流乙流病毒检验进展 陕西省中医医院检验科王荔敏 流感的分型流感的分型n流感病毒属于流感病毒属于RNA病毒。流行性感冒是由甲（病毒。流行性感冒是由甲（A)、乙（、乙（B）、丙（）、丙（C）三型流感病毒引起，）三型流感病毒引起，nA型流感病毒常以流行形势出现，能引起世界性流感大流行，它在动物中广泛分布，并也能在型流感病毒常以流行形势出现，能引起世界性流感大流行，它在动物中广泛分布，并也能在动物中引起流感流行和造成大量动物死亡；动物中引起流感流行和造成大量动物死亡；nB型流感病毒常常引起局部暴发，不引起世界性流感大流行；型流感病毒常常引起局部暴发，不引起世界性流感大流行；nC型流感病毒主要以散在形式出现，主要侵袭婴幼儿，一般不引起流行。型流感病毒主要以散在形式出现，主要侵袭婴幼儿，一般不引起流行。n目前感染人的主要是甲型流感病毒中的目前感染人的主要是甲型流感病毒中的H1N1、H3N2亚型及乙型流感病毒中的亚型及乙型流感病毒中的Victoria和和Yamagata系。系。流感的实验室检查流感的实验室检查n外周血常规：白细胞总数一般不高或者降低，重症病例淋巴细胞计数明显降低外周血常规：白细胞总数一般不高或者降低，重症病例淋巴细胞计数明显降低n血生化：部分病例出现低钾血症，少数病例肌酸激酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转血生化：部分病例出现低钾血症，少数病例肌酸激酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、肌酐等升高。移酶、乳酸脱氢酶、肌酐等升高。病原学相关检查病原学相关检查n（1）病毒核酸检测：以）病毒核酸检测：以RT-PCR（最好采用（最好采用real-timeRT-PCR）法检测呼吸道标本（咽拭子、）法检测呼吸道标本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽或气管抽取物、痰）中的流感病毒核酸。病毒核酸检测的特异性和敏感性最好，鼻拭子、鼻咽或气管抽取物、痰）中的流感病毒核酸。病毒核酸检测的特异性和敏感性最好，且能区分病毒类型和亚型且能区分病毒类型和亚型n（2）病毒抗原检测（快速诊断试剂检测）：快速抗原检测方法可采用胶体金和免疫荧光法。）病毒抗原检测（快速诊断试剂检测）：快速抗原检测方法可采用胶体金和免疫荧光法。由于快速抗原检测的敏感性低于核酸检测，因此对快速抗原检测结果的解释应结合患者流行病由于快速抗原检测的敏感性低于核酸检测，因此对快速抗原检测结果的解释应结合患者流行病史和临床症状综合考虑史和临床症状综合考虑n（3）血清学检测：检测流感病毒特异性）血清学检测：检测流感病毒特异性IgM和和IgG抗体水平。动态检测的抗体水平。动态检测的IgG抗体水平恢复期抗体水平恢复期比急性期有比急性期有4倍或以上升高有回顾性诊断意义倍或以上升高有回顾性诊断意义n（4）病毒的分离培养和鉴定：属于金标准，在流感流行季节，流感样病例快速抗原诊断和免）病毒的分离培养和鉴定：属于金标准，在流感流行季节，流感样病例快速抗原诊断和免疫荧光法检测阴性的患者建议再做病毒分离疫荧光法检测阴性的患者建议再做病毒分离n病毒抗原检测（快速诊断试剂检测）病毒抗原检测（快速诊断试剂检测）n血清学检测血清学检测（呼吸道病毒检测）（呼吸道病毒检测）目前我院检验科流感病毒开展的项目目前我院检验科流感病毒开展的项目病毒抗原检测流程病毒抗原检测流程n1.大夫留取标本，立即送检；大夫留取标本，立即送检；n2.检验科工作人员接收标本；检验科工作人员接收标本；n3检验科人员接收标本半个小时后在检验科门诊四楼窗口打化验单；检验科人员接收标本半个小时后在检验科门诊四楼窗口打化验单；病毒抗原检测的标本采集病毒抗原检测的标本采集n咽喉拭子（推荐）：用灭菌过的棉签从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上鄂、扁桃体发红咽喉拭子（推荐）：用灭菌过的棉签从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上鄂、扁桃体发红部位为中心，摩擦数次，采集粘膜表皮部位为中心，摩擦数次，采集粘膜表皮n鼻腔拭子：用灭菌过的棉签完全插入鼻腔中，摩擦鼻甲数次，采集粘膜表皮。鼻腔拭子：用灭菌过的棉签完全插入鼻腔中，摩擦鼻甲数次，采集粘膜表皮。n鼻腔抽洗液：抽吸器的一侧的管子连接在抽吸泵上，另一侧的管子从外鼻孔完全插入鼻腔，启鼻腔抽洗液：抽吸器的一侧的管子连接在抽吸泵上，另一侧的管子从外鼻孔完全插入鼻腔，启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。将棉签浸入到鼻腔抽洗液，使标本沾到棉签上。动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。将棉签浸入到鼻腔抽洗液，使标本沾到棉签上。n注意：应使用泡沫或人造丝材质的棉签采集样本注意：应使用泡沫或人造丝材质的棉签采集样本!样本采集后应尽快送检，如果不能及时送检，样本采集后应尽快送检，如果不能及时送检，应室温储存在密闭容器中，但不可超过应室温储存在密闭容器中，但不可超过24小时，样本处理和储运不合适，可能会造成假阴性。小时，样本处理和储运不合适，可能会造成假阴性。采集用的棉签到检验科塔楼二楼领取。采集用的棉签到检验科塔楼二楼领取。病毒抗原检测内容病毒抗原检测内容n普通甲流抗原（普通甲流抗原（H1N1及其亚型，及其亚型，H3N2及其亚型，及其亚型，H5N1及其亚型，及其亚型，H9N2及其亚型，及其亚型，H7N3及及其亚型其亚型n乙型流感抗原（乙型流感抗原（Brigit,B/R5HongKong/5/72Russia/69Lee/40）病毒抗原检测病毒抗原检测的方法和原理的方法和原理n方法：方法：Flu检测试剂运用胶体金标记和免疫层析技术，检测临床样本中的检测试剂运用胶体金标记和免疫层析技术，检测临床样本中的Flu抗原并以可视信号抗原并以可视信号的方式直接显示结果。的方式直接显示结果。n原理：加入充分裂解的临床样本后，原理：加入充分裂解的临床样本后，Flu抗原在试剂条的前段与胶体金标记的抗原在试剂条的前段与胶体金标记的Flu抗体结合，形抗体结合，形成抗原成抗原-抗体复合物，该复合物在试剂膜上层析流动，经抗体复合物，该复合物在试剂膜上层析流动，经Flu单克隆抗体条带（单克隆抗体条带（FluA或或FluB测测试线）时再次结合试线）时再次结合Flu单克隆抗体，形成双抗体夹心，并显示紫红色条带。单克隆抗体，形成双抗体夹心，并显示紫红色条带。病毒抗原检测结果的解读病毒抗原检测结果的解读n阳性阳性样本中含有样本中含有Flu抗原抗原,n阴性阴性样本中不含样本中不含Flu抗原，或者含量低于本产品的检测水平抗原，或者含量低于本产品的检测水平n建议对阴性建议对阴性结果的样本进行微生物培养以确定是否感染流感，若培养结果与检测结果不同，应结果的样本进行微生物培养以确定是否感染流感，若培养结果与检测结果不同，应再次取样进行微生物培养复查再次取样进行微生物培养复查病毒抗原检测方法的局限性病毒抗原检测方法的局限性 n可快速检测甲型和乙型流感病毒，诊断应结合临床症状、病毒分离培养等其他检查结果，由医可快速检测甲型和乙型流感病毒，诊断应结合临床症状、病毒分离培养等其他检查结果，由医生综合判断进行确诊生综合判断进行确诊nFlu病毒已失活的情况下样本中仍可能有病毒已失活的情况下样本中仍可能有Flu抗原抗原nFlu检测试剂结果为阴性并不排除患者检测试剂结果为阴性并不排除患者Flu感染的可能性，取样不充分或操作方法不当，以及样感染的可能性，取样不充分或操作方法不当，以及样本中抗原水平低于检测限均会导致假阴性本中抗原水平低于检测限均会导致假阴性nFlu检测试剂所使用的单克隆抗体可能无法检测出所有的检测试剂所使用的单克隆抗体可能无法检测出所有的Flu抗原变异体或者是抗原变异体或者是Flu新的菌株新的菌株呼吸道病毒（血清学）检测呼吸道病毒（血清学）检测n检测标本：血清检测标本：血清n检测内容：抗甲型流感病毒抗体检测内容：抗甲型流感病毒抗体IgM(不分型，欧蒙公司专利不分型，欧蒙公司专利)抗乙型流感病毒抗体抗乙型流感病毒抗体IgM(不分型，欧蒙公司专利不分型，欧蒙公司专利)n检测方法：间接免疫荧光法检测方法：间接免疫荧光法呼吸道病毒检测的方法局限性呼吸道病毒检测的方法局限性n1.检测结果必须结合患者的临床症状进行综合诊断检测结果必须结合患者的临床症状进行综合诊断n2.感染初期，病原体特异性感染初期，病原体特异性IgM抗体未产生或者滴度很低会导致阴性结果，如有怀疑病原体感抗体未产生或者滴度很低会导致阴性结果，如有怀疑病原体感染，应提示患者在染，应提示患者在7-14天内抽取第二份样本复查天内抽取第二份样本复查n3.二次感染和复发感染时也可能检测到特异性二次感染和复发感染时也可能检测到特异性IgM抗体抗体n4免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，其血清学免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，其血清学IgM抗体检测的参考价值有限抗体检测的参考价值有限n5.近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群，对其阳性检测结果的分析应慎重近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群，对其阳性检测结果的分析应慎重n6.不能区分流感病毒反复感染病例不能区分流感病毒反复感染病例n7当检测流感病毒时，若包被毒株和患者感染毒株之间的差异太大，可能存在漏检当检测流感病毒时，若包被毒株和患者感染毒株之间的差异太大，可能存在漏检n8.接种流感疫苗也会产生接种流感疫苗也会产生IgM抗体，抗流感病毒抗体的解释应考虑疫苗接种史抗体，抗流感病毒抗体的解释应考虑疫苗接种史临床病例分析临床病例分析n医嘱名称医嘱名称流感病毒检测流感病毒检测n收费代码收费代码020916n收费标准收费标准116/次次n医嘱名称医嘱名称呼吸道病毒检测呼吸道病毒检测n收费标准收费标准274/次次n取报告时间取报告时间每周三下午三点出结果每周三下午三点出结果n流行性出血热病毒抗体检测流行性出血热病毒抗体检测n检测内容：本实验主要定性检测人血清或血浆标本中汉坦病毒检测内容：本实验主要定性检测人血清或血浆标本中汉坦病毒IgG和和IgM抗体。抗体。n标本采集：采静脉血，避免溶血，采集后的标本及时送检，若不能及时送检，可在标本采集：采静脉血，避免溶血，采集后的标本及时送检，若不能及时送检，可在28保存保存3天，长期保存需分装血清冷冻于天，长期保存需分装血清冷冻于-20，忌反复冻融。，忌反复冻融。n检测方法：本实验采用胶体金免疫层析技术，仅限于定性检测样本中的汉坦病毒抗体。检测方法：本实验采用胶体金免疫层析技术，仅限于定性检测样本中的汉坦病毒抗体。n临床意义：肾综合征出血热（临床意义：肾综合征出血热（HFRS）亦称流行性出血热。是由汉坦病毒引起的急性、地方性、）亦称流行性出血热。是由汉坦病毒引起的急性、地方性、自然疫源性传染病，病情危急，并发症多，病死率高。自然疫源性传染病，病情危急，并发症多，病死率高。n医嘱名称：流行性出血热病毒抗体测定医嘱名称：流行性出血热病毒抗体测定n收费代码：收费代码：020919n收费标准：收费标准：48元元/次次n报告时间：每周一到周五报告时间：每周一到周五10:30之前采集的标本，当天下午三点出结果；之前采集的标本，当天下午三点出结果；n每周六周日采集的标本，下周一下午三点出结果。每周六周日采集的标本，下周一下午三点出结果。谢谢聆听谢谢聆听!