(9)--蛋白质浓度测定生物化学.ppt

蛋白质浓度的测定双缩脲法0101掌握蛋白质浓度测定的原理及方法03掌握标准曲线的制作02掌握分光光度法的原理及方法实 验 目 的在碱性条件下，双缩脲与Cu2+作用形成紫红色的络合物+Cu+Cu2+2+OHOH-紫红色络合物蛋白质两个/两个以上肽键化合物均可进行此反应实 验 原 理 双缩脲反应A=吸光度 C=物质浓度 L=光通过溶液的距离 K=比例常数含义：当一束单色光通过均一溶液时，光能被吸收的程度与溶液的浓度和液体厚度（光通过液体的距离）成正比度A CL 或 A=KCL实 验 原 理 分光光度法实 验 原 理 分光光度法6 Page标准管对照法标准曲线法实 验 原 理 分光光度法实 验 原 理 分光光度法标准曲线法8 Page蛋白浓度（mg/mL）吸光度值A540C待测实 验 原 理 分光光度法标准曲线法9 PageA CL 或或 A=KCLK C待测待测 LA待测待测=C标准标准C待测待测=A标准标准A待测待测 A标准标准K C标准标准 L=A=吸光度 C=物质浓度 L=光通过溶液的距离 K=比例常数标准管对照法实 验 原 理 分光光度法1234血清0.9%NaCl溶液蛋白质标准溶液(酪蛋白2.0mg/mL)双缩脲试剂实 验 试 剂1.试管架实 验 仪 器3.分光光度计2.移液管 管号试剂 1 2 3 4 5 6 7 蛋白质标准溶液（ml）2mg/ml 0.51.0 1.5 2.02.5 0待测蛋白液（ml）3.0蒸馏水（ml）3 2.52.0 1.5 1.00.5 0双缩脲试剂（ml）2.02.02.02.02.02.02.0蛋白浓度（mg/ml）0？u各管混匀后，室温放置30minu取7支大试管，按照下列表格添加液体实 验 步 骤u在540nm 处（1号管调零）测定各管吸光度，准确记录u绘制标准曲线：以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标u对照标准曲线，计算出待测液蛋白质浓度。u书写、提交实验报告实 验 步 骤每毫升血清中蛋白质的含量：？（单位）实 验 结 论注意事项注意各步混匀，保证反应完全标记好各个试管规范化使用分光光度计感 谢 聆 听