多聚酶链式反应扩增DNA课件全解-人教课标版.ppt

课题2多聚酶链式反应扩增DNA 片段自学提纲：l 知识回顾：l 1.DNA 分子的结构（外侧、内侧、基本单位）；2.DNA 复制过程和特点；l 3.PCR 技术概念及应用。l 基本概念：变性、复性、Taq DNA 聚合酶、引物l 理解PCR 技术的原理l 掌握PCR 技术的全过程l 比较PCR 技术和体内DNA 复制的异同点。1、DNA 分子的3 端与5 端-OH 端为3;磷酸基团的末端为5。2、DNA 分子由两条反向平行的脱氧核苷酸链根据碱基互补配对原则形成氢键连接而成。解旋酶DNA 母链4种脱氧核苷酸DNA 聚合酶引物（RNA）打开DNA 双链模板合成子链原料催化子链合成使DNA 聚合酶能从引物3 端开始连接脱氧核苷酸 思考：3、体内DNA 复制的条件是什么？体外扩增DNA 如何提供相似环境？变性（80-100）Taq 聚合酶（耐高温）1530个核苷酸构成DNA 或RNADNA 双链单链变性（加热80-100）复性（缓慢冷却）4、DNA 分子的热变性原理：变性的目的：复性的目的：解开双链有利于引物和引物与两条单链的结合一、PCR 技术的原理l 利用DNA 分子的热变性原理，通过控 制温度来控制双链的解聚与结合，从而完成体外DAN 分子的扩增。l 体外DNA 复制的条件：四种脱氧核苷酸、耐高温的聚合酶、引物、模板；缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。l 复制的方向：子链的5 端向 3 端延伸。二、PCR 的反应过程每个循环包括：变性 复性延伸 从第二轮循环开始，上一次循环的产物也可以作为模板参与反应，并且由引物延伸而成的DNA单链会与引物结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。三、实验步骤：准备好PCR 反应体系的配方用微量移液器按配方在往微量离心管中加入各组分盖严盖子，用手指轻轻弹击管壁混合反应液离心10分钟将离心管放入PCR 仪上，设置好循环程序进行反应注意事项：详见操作提示 四、结果分析与评价DNA 含量的测定：稀释对照调零测定计算（公式见P63）波长260nm处读数蒸馏水做对照50倍PCR技术与体内DNA复制的区别：1.PCR不需要解旋酶；体内DNA复制需要；2.PCR需要耐热的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶），而生物体内的聚合酶在高温时会变性；3.PCR一般要经历三十多次循环，而生物体内DNA复制需要生物体自身的复制。练习巩固1、关于PCR 技术的应用，错误的一项是A 古生物学、刑侦破案、DNA 序列测定B 诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学C DNA 序列测定、基因克隆、刑侦破案D 诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA 序列测定2、DNA 的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？3、PCR 技术最突出的优点是A 原理简单 B 原料易找C TaqDNA 聚合酶有耐热性D 快速、高效、灵活、易于操作4、做PCR 使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是A 反复洗涤 B 不怕外源DNA 污染C 高压灭菌 D 在20 储存 3.下列关于“观察洋葱根尖细胞有丝分裂”实验的叙述，正确的是 A.通过观察细胞内染色体的行为判断细胞所处的时期 B.装片的制作流程是：解离染色漂洗制片 C.显微镜下观察到处于有丝分裂中期的细胞最多 D.显微镜下观察到的分生区细胞呈正方形，细胞继续分裂【答案】A【解析】有丝分裂不同时期，染色体的行为不同，所以可以通过观察细胞内染色体的行为判断细胞所处的时期，A 正确；观察洋葱根尖细胞有丝分裂过程中，装片的制作过程为：解离、漂洗、染色、制片，B 错误；有丝分裂过程中，分裂间期占有的时间最长，所以显微镜下观察到处于有丝分裂间期的细胞最多，C 错误；观察洋葱根尖细胞有丝分裂实验中，解离步骤细胞已经被杀死，所以不可能看见细胞继续分裂，D 错误。4.下列关于“细胞大小与物质运输的关系”实验的叙述，错误的是 A.实验的材料和试剂可用马铃薯小方块和蓝墨水替代 B.NaOH 在体积不同的琼脂块内扩散的速率相同 C.琼脂块的表面积与体积之比随着琼脂块的增大而增大 D.NaOH 扩散的体积与整个琼脂块的体积之比随着琼脂块的增大而减小【答案】C【解析】在“细胞大小与物质运输的关系”实验中，可以用蓝墨水代表进入细胞的物质，马铃薯小方块代表细胞，A 正确；NaOH 在体积不同的琼脂块内扩散的速率相同，B 正确；琼脂块的表面积与体积之比随着琼脂块的增大而减小，C 错误；由于NaOH 在琼脂块中的扩散速度是一定的，因此NaOH 扩散的体积与整个琼脂块的体积之比，随着琼脂块的增大而减小，D 正确。5.下列关于细胞分化、衰老、凋亡和癌变的叙述，正确的是 A.存在血红蛋白的细胞一定是已经分化的细胞 B.衰老细胞内酶的活性都降低，细胞核的体积减小 C.细胞凋亡是各种不利因素引起的细胞损伤和死亡 D.细胞癌变是致癌因子诱发正常基因突变成原癌基因和抑癌基因【答案】A【解析】血红蛋白存在于哺乳动物成熟的红细胞中，该细胞已经高度分化，A 正确；衰老细胞内大多数酶的活性都降低，细胞核的体积增大，B 错误；细胞凋亡是基因控制的程序性死亡，而各种不利因素引起的细胞损伤和死亡属于细胞坏死，C 错误；细胞癌变是致癌因子诱导原癌基因和抑癌基因发生基因突变的结果，D 错误。6.下列关于细胞全能性的叙述，错误的是