染色质免疫共沉淀ppt课件.ppt
篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统染色质免疫共沉淀(ChIP)篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统目录篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统一、简介DNA与蛋白质相互作用研究DNase 足纹法电泳迁移率变动分析生物信息学方法酵母单杂交系统ChIP篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统一、简介 ChIP 是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达关系。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统二、原理 在活细胞状态下固定蛋白质DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合物，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片段的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统三、技术流程 具体操作流程DNA 分析篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统1、甲醛交联细胞具体步骤10 ml1PBS孵育8min弃上清4-5ml预冷1 PBS预冷1PBS洗涤两次转移4000rpm离心5min弃上清1ml 预冷1PBS悬浮新离心管4000rpm离心5min1ml1.25mol/L甘氨酸室温10-20min篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统2、染色质超声断裂1.加SDS裂解溶液重悬浮沉淀，冰上10min.每1min颠倒摇动一次离心管。2.把DNA粉碎为长度200-1000bp，置于冰上。不同样本都进行超声条件优化实验。3.14000rpm离心10min（4），转移上清于1.5ml离心管。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统3.免疫沉淀蛋白和DNA复合物超声染色质液体2ml 超声稀释液4 摇床摇动一小时1000rmp 离心2min（4）转移上清液至新离心管ChIP 稀释液稀释10 倍加入20l 蛋白A/G 琼脂糖珠1-4l 免疫沉淀抗体取50l 上清液作为对照？篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统4、收获免疫复合物（抗体-蛋白质-DNA）样品摇动1-2h，4 40lProtein A/G Agarose Beads1PBS 洗3 次离心1000rpm,1min.弃上清，用4l 1PBS 悬浮1000rpm,离心5min,4 a 低盐洗脱溶液1ml 洗一次b 高盐洗脱溶液1ml 洗一次c 氯化锂洗脱溶液1ml 洗一次d TE 溶液(pH8.0)1ml 洗两次每次洗时，在摇床上摇10min,4，4000rpm 离心5min弃上清篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统5、洗脱免疫复合物Beads200lChIP 洗脱溶液洗脱摇床上摇动10min12000rpm 离心1min取上清Beads取上清200l,ChIP 洗脱溶液(3 次)600l 洗脱液篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统6、去除甲醛交联加5mlNaCl使用NaCl终浓度为0.2mol/l阴性对照+350lChIP洗脱溶液+16l 5mol/l NaCl。65,过夜,去交联。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统7、DNA纯化酚/氯仿抽提实验样本(600l)50l 阴性对照10lRNase 50l蛋白酶K 等量酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）12000rmp离心5min上清液 上清液1/10体积3mol/l乙酸钠 2倍体积冰冻无水乙醇-80冰箱1h.12000rmp离心20min，弃上清加入70%乙醇，悬浮沉淀，12000rpm离心10min，去上清，DNA干燥后，40lTE溶解硅胶柱纯化篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统8、染色质免疫共沉淀DNA的分析和蛋白质在DNA上结合位点的鉴定(1)如果目的蛋白靶序列已知，或怀疑某一序列是目的蛋白靶序列，则可选用定量或者半定量PCR方法。(2)如果目的蛋白的靶序列未知或者研究目的蛋白基因组分布情况，找出转录因子结合位点，则可采用ChIP克隆测序，ChIP-chip，和ChIP-seq方法。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统四、应用组蛋白修饰研究转录调控分析药物开发研究有丝分裂研究DNA 损伤与凋亡分析篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统五、优缺点优点：充分反映生理条件下DNA与蛋白质相互作用的真实情况，可以找出生理条件下某个DNA结合蛋白与DNA序列的结合位点，从而反映体内基因表达调控的真实情况。缺点：需要一个特异性蛋白质抗体，有时难以获得；为了获得高等丰度的结合片段，必须实验演示胞内条件下靶标蛋白质的表达情况；调控蛋白质的基因获取可能需要限制在组织来源。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统谢谢大家！篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统谢谢观看！2020
