人教版教学课件专题2课题1微生物的实验室培养.ppt

专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养.微生物的类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌 真菌：原生生物：显微藻类、原生生物（如：草履虫、变形虫等）病毒、类病毒、朊病毒微生物的共同特点：一.微生物基础知识1.细菌的形态球菌弧菌杆菌二分裂 2.细菌的繁殖3.细菌的菌落.定义：单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。.功能：每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。为抵抗不良环境可形成细菌的休眠体为抵抗不良环境可形成细菌的休眠体芽孢芽孢几种菌落及其形态几种菌落及其形态微生物需要的五大类营养要素物质是：.微生物需要的营养物质及功能1.碳源 2.氮源 3.生长因子 4.无机盐 5.水：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。无机碳源：CO2；NaHCO3等有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等构成细胞物质和一些代谢产物异养微生物的能源.概念.来源：.作用：1.微生物的碳源无机氮源：无机氮源：NN22、NHNH44+、NONO33-、NHNH33等。等。有机氮源：有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等基酸等凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供NN元素元素的营养物质。的营养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含NN的代谢产的代谢产物。物。2.微生物的氮源.概念：概念：.来源：来源：.作用：作用：3.生长因子.常见的生长因子：常见的生长因子：.概念：概念：.作用：作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。.培养基 1.概念：培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的营养基质。3.培养基的类型和用途2.培养基的成分：一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气等的要求。P14P14P15P15划分标准 培养基种类 特点 用途物理性质化学成分天然培养基合成培养基用途鉴别培养基培养基的种类不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确 分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基P84P84练习1.不能作为异养微生物碳源的是（）A 牛肉膏B 含碳有机物C 石油D 含碳无机物DD2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是（）A 碳源B 氮源C 无机盐D 生长因子 A A3.下列关于生长因子的说法中，不正确的一项是（）A 是微生物生长不可缺少的微量有机物B 是微生物生长不可缺少的微量矿质元素C 主要包括维生素、氨基酸和碱基等D 一般是酶和核酸的组成成分BB4.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在碳源为纤维素的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素，可以抑制细菌和放线菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出（）大肠杆菌霉菌放线菌纤维素分解菌A.B.C.D.解析：选A。本题考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可以利用纤维素，大部分微生物却不能；培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌，但霉菌能够生长。编号 成分 含量 粉状硫 10g（NH4）2SO40.4g K2HPO44.0g MgSO49.25g FeSO40.5g CaCl20.5g H2O 100ml5右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类型是。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入，用于培养，自养型微生物 含碳有机物 金黄色葡萄球菌（3）若除去成分，加入（CH2O），该培养基可用于培养。（4）表中营养成分共有 类。（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是。（6）右表中各成分重量确定的原则是。（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分。固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）编号 成分 含量 粉状硫 10g（NH4）2SO40.4g K2HPO44.0g MgSO49.25g FeSO40.5g CaCl20.5g H2O100ml思考：1.获得纯净培养物的关键？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）3.消毒和灭菌有何不同？4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。.无菌技术防止外来杂菌的入侵比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和 部分生活状态的微生物不能灭菌强烈 全部微生物 能消毒与灭菌的比较煮沸消毒法：100煮沸5-6min。巴氏消毒法：70-75下煮30min或 80下煮15min。化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。紫外线消毒。.消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法表面灭菌和空气灭菌等使用 紫外线 灭菌法，所用器械是 紫外灯。照射30min，可先喷洒石炭酸或煤酚皂溶液加强消毒效果。（2）灭菌a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌a.灼烧灭菌微生物的接种工具(接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧注意适用范围b.干热灭菌 c.160170；12h能耐高温的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)c.高压蒸汽灭菌 d.100kPa 121 e.15-30min通常用于培养基的灭菌请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶和吸管实验操作者的双手答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。P16旁栏思考二.实验操作(以培养大肠杆菌为例).制备牛肉膏蛋白胨培养基1.计算2.称量3.溶化4.灭菌:将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。5.倒平板:待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。倒平板操作答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。问题讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（）A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸C.待培养基冷却至50左右时，进行倒平板D.待平板冷却凝固约5min10min后，将平板倒过来放置解析：选A。本题考查了牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程。其顺序为：计算称量溶化灭菌倒平板，故A项错误。.纯化大肠杆菌平板划线法和稀释涂布平板法。微生物的接种的常用接种方法有：1.平板划线的操作方法视频视频答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。问题讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？2.稀释涂布平板的操作方法视频视频4.菌种的保存固体斜面培养基上4保存，菌种易被污染或产生变异3.微生物的恒温培养.长期保存：20甘油管在冷冻箱中保藏.临时保藏：三.结果分析与评价 本课题知识小结:【典例解析】例例:关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是()()A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生 不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于 物的具体情况分析。对于A A、B B选项，它的表达是不完整的。有 选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如 的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH NH4 4HCO HCO3 3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于 源，也是能源，如蛋白胨。对于C C选项，除水以外的无机物种 选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳 类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；源；NaHCO NaHCO3 3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl NaCl则 则只能提供无机盐。对于 只能提供无机盐。对于D D选项，无机氮源提供能量的情况还是 选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如 存在的，如NH NH3 3可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。D2010 年上学期 湖南长郡卫星远程学校 制作 05例2.下面对灭菌的理解不正确的是()A.防止杂菌污染B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前B练习1.获得纯净培养物的关键是A 将用于微生物培养的器皿，接种用具和 培养基等器具进行灭菌B 接种纯种细菌C 适宜环境条件下培养D 防止外来杂菌的入侵练习1.获得纯净培养物的关键是A 将用于微生物培养的器皿，接种用具和 培养基等器具进行灭菌B 接种纯种细菌C 适宜环境条件下培养D 防止外来杂菌的入侵练习2.下列操作与无菌技术无关的是A 接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手B 接种前用火焰烧灼接种针C 培养在50左右时搁置斜面D 在酒精灯的火焰旁完成练习2.下列操作与无菌技术无关的是A 接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手B 接种前用火焰烧灼接种针C 培养在50左右时搁置斜面D 在酒精灯的火焰旁完成练习3.外科手术器械和罐头食品的处理，要以能够杀死什么为标准A 球菌 B 杆菌 C 螺旋菌 D 芽孢练习3.外科手术器械和罐头食品的处理，要以能够杀死什么为标准A 球菌 B 杆菌 C 螺旋菌 D 芽孢例1某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。（1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 和。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是 和。（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是。（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于 中培养，培养的温度设定氮源氮源碳源碳源无机盐无机盐水水高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌恒温箱恒温箱在37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种 作为对照进行实验。（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有 种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越。（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐 细菌，这种培养基被称为。无菌水无菌水多多高高选择培养基选择培养基盐盐练习4.某学校打算开辟一块食用菌栽培基地,以丰富学生的劳动技术课内容,首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理,准备食用菌栽培所需的各种原料和用具,然后从菌种站购来各种食用菌菌种.请回答以下问题:练习对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_，它不提供营养。练习对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_，它不提供营养。牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂练习对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_，它不提供营养。牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂蛋白胨练习对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_，它不提供营养。牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂蛋白胨牛肉膏练习对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_，它不提供营养。牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂蛋白胨牛肉膏凝固剂练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.比例练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.比例 搅拌练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.比例 搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅100KPa练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅100KPa121 练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅100KPa121 15 30min练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅100KPa121 15 30min自然降至零后 练习使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内倒入 _，把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭.练习使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内倒入 _，把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭.适量水练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.外练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.外冷却练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.外冷却4