奶山羊养殖技术规范第3部分-双基因良种选育(DB61-T 1521.3-2021).pdf

ICS 65.020.30CCS B 43DB61陕西省地方标准DB61/T 1521.32021奶山羊养殖技术规范第 3 部分：双基因良种选育Technical Specifications for Dairy Goat FarmingPart 3:Double-gene breeding2021-12-17 发布2022-01-17 实施陕西省市场监督管理局发 布DB61/T 1521.32021I目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14选育方法.15选择程序.2附录 A（资料性）扩充特异引物.3DB61/T 1521.32021II前言DB61/T 1521奶山羊养殖技术规范分为如下部分：第 1 部分：关中奶山羊良种鉴定；第 2 部分：引进奶山羊良种鉴定；第 3 部分：双基因良种选育；第 4 部分：种公羊饲养管理；第 5 部分：后备羊培育；第 6 部分：泌乳奶山羊健康养殖；第 7 部分：人工授精；第 8 部分：胚胎移植；第 9 部分：苜蓿半干青贮；第 10 部分：疫病防控；第 11 部分：机器挤奶。本部分为DB61/T 1521的第3部分。本文件根据GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规则起草。本部分由西北农林科技大学提出。本部分由陕西省农业农村厅归口。本部分起草单位：西北农林科技大学、杨凌职业技术学院、陕西省动物研究所、陕西省畜牧技术推广总站、陕西关中奶山羊产业研究院、陕西省奶山羊养殖工程技术研究中心、陕西省羊产业技术创新与产业发展战略联盟、陇县畜产局。本部分主要起草人：安小鹏、侯金星、曹芳君、杨少华、李广、宋宇轩、田秀娥、付明哲、张磊。本部分由西北农林科技大学负责解释。本部分首次发布。联系信息如下：单位：西北农林科技大学电话：029-87092102地址：陕西杨凌示范区西农路22号邮编：712100DB61/T 1521.320211奶山羊养殖技术规范 第 3 部分：双基因良种选育1范围本部分规定了高产良种奶山羊选育方法、选育程序内容要求。本部分适用于以催乳素受体和促黄体素beta亚基基因选育关中奶山羊、莎能奶山羊等良种奶山羊。2规范性引用文件本部分无规范性引用文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本部分。3.1基因gene位于细胞染色体上具有遗传效应的DNA片段，是调控生物性状的基本遗传单位。3.2催乳素prolactin为动物垂体分泌的一种蛋白质激素，由199 个氨基酸残基组成。3.3受体receptor可与细胞外专一信号分子（配体）结合引起细胞反应的蛋白质，分为细胞表面受体和细胞内受体。3.4催乳素受体prolactin receptor催乳素受体位于山羊的16号染色体上，分为长受体(LF)、中受体(IF)及短受体(SF1a 及 SF1b)。不同催乳素受体由同一基因编码，经转录后选择性剪接而生成。PRLR是调控山羊产奶性能和产羔性能的重要候选基因。4选育方法4.1筛选高产个体筛选头胎产羔数达到2 只以上的奶山羊，以及产奶第3个月日均产奶量达到4 kg以上的高产个体作为功能基因检测的对象。DB61/T 1521.3202124.2检测高产个体基因型采用基因测序的方法对高产个体中的催乳素受体基因（PRLR）和促黄体素beta 亚基（LH）基因进行基因分型。5选择程序5.1血液采集从山羊的颈静脉采取1 mL的血样或从耳部采取0.5 g的耳组织。5.2DNA 提取利用DNA提取试剂盒从血液或耳组织中提取基因组DNA。5.3扩增目的片段根据催乳素受体基因（PRLR）和促黄体素beta 亚基（LH）基因的DNA序列分别设计扩增PRLR基因外显子9和LH基因5非翻译区的特异引物（附录A）。5.4检测目的片段利用2%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增的目的片段。5.5DNA 测序利用DNA测序技术检测基因的分型和统计不同个体的基因型。5.6基因型选配从5.5中检测的个体中筛选具有催乳素受体基因（PRLR）的GG基因型以及促黄体素beta 亚基（LH）基因的CC基因型的优秀个体进行杂交或者选同交配。5.7基因型的横交固定在不同基因型杂交后代中筛选同时具有GG和CC基因型的个体进行横交固定。5.8纯合基因型个体组群在横交固定的个体中检测和筛选基因型聚合纯化在一起的个体组群。5.9稳定基因型采用基因型选同交配的方法稳定基因型，从而形成产羔率和产奶量高的奶山羊核心群。5.10选育高产奶山羊新品种（系）对含有以上2 个基因型的个体进行遗传稳定性和生产性能稳定性的检测，结合常规育种方法，选育出高产奶山羊新品系或新品种。ADB61/T 1521.320213附录A（资料性）扩充特异引物A.1双基因型聚合育种技术用的分子生物学技术聚合酶链式反应（PCR），DNA测序，基因克隆，琼脂糖凝胶电泳。A.2双基因型聚合育种技术用统计方法多因素方差分析和线性回归模型。A.3双基因型聚合育种技术所需仪器设备PCR扩增仪（可设定温度梯度）；电子天平（精度为0.0001 g）；常温高速离心机（最大转速为15300 rpm）；低温冷冻离心机（能设定为4）；移液器（通用标准吸头有6个规格:10ul、20ul、100ul、200ul、1000ul、5000ul）；高压灭菌锅（工作蒸气压力 0.5 MPa）；凝胶成像仪（提供白光和紫外光以及蓝光光源进行拍摄凝胶）；水浴锅（可设定恒定温度）；垂直电泳槽（用于蛋白样品的电泳）；稳压稳流电泳仪（用于 DNA样品的电泳）；超低温冰箱（能设定-80）；脱色摇床（能设定恒定速率摇动）；恒温培养箱（设置为37）；超净工作台；纯水仪。A.4特异引物PCR扩增引物见表A.1表 A.1PCR 扩增引物基因位点引物序列退火温度（oC）片段大小（bp）PRLR 基因外显子 9F:5-CTTACCACAACATTGCTGAC-357465R:5-CCTTGGCTGGATTCTATGG-3LH基因 5非翻译区F:5-ACCAGATCTTGGCCCTTG-357291R:5-CAAAGCCTGAGTCCAAC-3DB61/T 1521.320214A.5PCR体系A.5.115L的PCR 反应体系包括 DNA模板50ng，7.5l 2Taq MasterMix，上下游引物(10 M)各0.3l，加灭菌水至15l。A.5.2PCR反应条件：95 预变性 5min，94 30s。退火温度57，退火 30s，72 延伸 35s，35个循环，最后72延伸10min。10l酶切反应体系：10Buffer 1l，内切酶0.3l，灭菌水3.7l，PCR产物5l。A.6目的片段测序PCR产物测序，根据测序结果对奶山羊个体进行基因分型，其中催乳素受体基因的GG基因型为高产基因型，促黄体素beta亚基基因的CC基因型为高产基因型。_