【生物课件】动物细胞融合技术与单克隆抗体课件 2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

单克隆抗体筛选二多种融合细胞杂交瘤细胞体外或体内培养筛选一骨髓瘤细胞 诱导融合分泌特异抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞群提取已免疫的多种B淋巴细胞动物细胞 动物细胞融合技术 融合技术动物细胞 动物细胞培养技术 培养技术单克隆抗体的制备既能大量繁殖 既能大量繁殖又能产生抗体 又能产生抗体特异性强 特异性强灵敏度高 灵敏度高可大量制备 可大量制备注射抗原既能大量繁殖 既能大量繁殖又能产生 又能产生特定抗体 抗体能大量繁殖 能大量繁殖，但，但不 不能产生抗体 能产生抗体能产生抗体 能产生抗体，但，但不 不能大量繁殖 能大量繁殖一10-50代细胞取动物组织分瓶培养制成细胞悬液原代培养传代培养继续培养分离成单个细胞，加培养液细胞株（遗传物质发生改变）细胞系请同学们快速阅读课本P48-20页回答以下问题：1.什么是动物细胞融合技术（概念）？原理是什么？2.所形成的杂种细胞有什么特点？3.诱导动物细胞融合的方法有哪些？4.动物细胞融合技术的意义和应用有哪些？5.怎么制备单克隆抗体？6.单克隆抗体有什么应用？第2节 动物细胞工程 动物细胞融合技术与单克隆抗体A细胞B细胞正在融合的原生质体再生出细胞壁脱分化再分化移栽植物细胞融合 植物组织培养杂种植株愈伤组织A原生质体B原生质体移栽后的植株植物体细胞杂交技术 回顾旧知实例：1970年 人-鼠细胞融合融合实验回顾-必修一：细胞膜的结构1.概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。细胞膜的流动性化学法：PEG 融合法突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。动物细胞融合特有杂交细胞：具有原来两个或多个细胞的遗传信息 01动物细胞融合技术2.原理：3.融合方法：4.意义：5.应用：研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。物理法：电融合法生物法：灭活病毒诱导法 灭灭活是指用物理或化学手段活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏，但并不破坏它们的抗原结构。它们的抗原结构。灭活病毒诱导细胞融合的灭活病毒诱导细胞融合的原理原理是：病毒表面含有的糖蛋是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。相关信息动物细胞融合成功的标志 19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象？病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。植物体细胞杂交 动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导细胞融合的方法细胞融合成功的标志主要用途意义细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法再生出细胞壁细胞核的融合获得完整的杂种植株主要用于制造单克隆抗体打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能动物细胞融合 植物体细胞杂交 02单克隆抗体及其应用产量低，纯度低，而且特异性差反复注射动物体内抗原 多种浆细胞多种抗体（血清）缺点（2）什么细胞分泌抗体？浆细胞（3）抗体主要分布在哪里？血清（4）早期获得抗体的方法有哪些？1.传统抗体的制备2.大量制备单一抗体的思路和需解决的问题单克 隆抗 体一个 一个B B 淋巴细胞 淋巴细胞 细胞群 细胞群抗体 抗体克隆（1）什么是抗体？机体受抗原刺激后产生的，能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。B 淋巴细胞不可能无限增殖 02单克隆抗体及其应用：什么细胞具有无限增殖的能力？：有什么方法能培养出既能分泌抗体且无限增殖的细胞？骨髓瘤细胞（癌细胞）动物细胞融合一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖动物细胞融合杂交瘤细胞动物细胞培养单克隆抗体米尔斯坦和科勒大胆设想：既能迅速大量增殖，又能产生抗体单克隆抗体：由单个B淋巴细胞产生的只能识别一种抗原表位的特异性抗体。注射到腹腔注射抗原培养骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合多种杂交细胞诱导融合抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞体外培养用特定抗原对小鼠进行免疫，并从其脾中获取能产生特定抗体的B淋巴细胞用特定的选择培养基进行筛选：只有融合的杂交瘤细胞才能生长多次的克隆化培养和抗体检测，再筛选体外大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖从培养液或小鼠腹水中获得大量的单克隆抗体杂交瘤细胞单克隆抗体第一次筛选：获得杂交瘤细胞第二次筛选：获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备能产生抗体 能产生抗体，但，但不 不能大量繁殖 能大量繁殖能大量繁殖 能大量繁殖，但，但不 不能产生抗体 能产生抗体既能大量繁殖 既能大量繁殖又能产生抗体 又能产生抗体既能大量繁殖 既能大量繁殖又能产生 又能产生特定抗体 抗体 02单克隆抗体及其应用1、诊断试剂最广泛应用抗原-抗体杂交法抗 抗 人绒毛促性腺激素 人绒毛促性腺激素 单克隆抗体 单克隆抗体比原来诊断方法提前了 比原来诊断方法提前了10d 10d 左右，左右，准确率在 准确率在90 90 以上。以上。具有准确、高效、简易、快速特点诊断优点：乙肝测定试剂 艾滋病检测试剂 利用同位素或荧光标记的单克隆抗体在特定组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病 02单克隆抗体及其应用主要用于癌症治疗。如：单克隆抗体+药物=“生物导弹”2、用于治疗疾病和运载药物优点：位置准确、疗效高、副作用小(“(“生物导弹生物导弹”单抗单抗导向导向，药物为药物为弹头弹头)一、概念检测1.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是（）A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞D.前者主要为了获得细胞产品，后者主要为了获得杂种植株练习与应用C2.科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原，制备出了单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（）A.利用该单克隆抗体可以诊断是否感染 SARS病毒B.体外培养单个B淋巴细胞可以获得针对SARS病毒的单克隆抗体C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合,经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞D.将纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，从小鼠血清中分离出的抗体为单克隆抗体练习与应用A