高三生物复习真题分类汇编：考点20生物技术实践含答案.pdf

知识点20生物技术实践1.（2 0 1 4 江苏高考 T 1 6）下列关于“D N A的粗提取与鉴定”实验叙述,错误的是（）A.酵母和菜花均可作为提取D N A的材料B.D N A既溶于2 m o l/L N a Cl 溶液也溶于蒸储水C.向鸡血细胞液中加蒸储水搅拌,可见玻棒上有白色絮状物D.D N A溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热,冷却后变蓝【解题指南】关键知识:D N A在 0.1 4 m o l/L N a Cl 溶液中溶解度最低，随着N a Cl 溶液浓度增大或降低,D N A在其中的溶解度增大。选 C。本题考查“D N A的粗提取和鉴定”实验的选材、步骤和鉴定。原则上含D N A的生物材料都能作为提取D N A的材料，但是D N A含量高的材料,实验成功的可能性更大,所以酵母和菜花可作为提取D N A的材料,故A 正确;D N A在 2 m o l/L N a Cl 溶液和蒸储水中，溶解度较大,故B 正确；向鸡血细胞液中加蒸偏水搅拌，鸡血细胞会破裂，因 D N A在蒸储水中溶解度较大，故不会析出,C 项错误;D N A溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热,冷却后变蓝,故D 正确。2.（2 0 1 4 江苏高考 T 1 8）下列关于加酶洗衣粉的叙述,正确的是（）A.高温易使酶失活,因此冷水洗涤去污效果应该比温水好B.洗衣粉中表面活性剂对碱性蛋白酶活性有一定的促进作用C.在 pH 低于7.0的自来水中,碱性蛋白酶依然能起作用D.洗衣粉中酶主要是通过快速分解溶在水里的污渍发挥作用【解题指南】关键知识：（1）加酶洗衣粉适宜的洗涤温度和pH o（2）加酶洗衣粉去污原理是利用酶的催化作用使污渍分解成可溶物。选 C。本题考查加酶洗衣粉的使用。加酶洗衣粉中的酶在水温4 5 6 0 时，能充分发挥洗涤作用。水温高于6 0 时,碱性蛋白酶失去活性，水温低于1 5 时,酶的活性迅速下降,影响洗涤效果,所以A 错误;表面活性剂能影响碱性蛋白酶的活性,可能会使酶失活,因此B 错误;碱性蛋白酶适宜的pH 为 6.0 8.5,故 C 正确;洗衣粉中的酶能把衣物上的油脂、蛋白质等分解成可溶性的小分子物质，从而使其很容易被洗去，因而D 错误。3.（2 0 1 4 江苏高考T 2 4）某同学设计了如图所示的发酵装置，下列有关叙述正确的是（多选）（）心 入A.该装置可阻止空气进入,用于果酒发酵 水B.该装置便于果酒发酵中产生的气体排出二葡萄汁C.去除弯管中的水，该装置可满足果醋发酵时底层发酵液中大量醋酸菌的呼吸D.去除弯管中的水后,该装置与巴斯德的鹅颈瓶作用相似【解题指南】（1）图示信息:弯管没有插入葡萄汁的液面下,且未通入无菌空气,所以不能给底层的微生物提供氧气。（2）关键知识：果酒和果醋发酵的原理、条件。选 A、B、D 本题考查果酒、果醋的制备。该装置中注水的弯曲部分可阻止空气进入，能用于果酒发酵,A正确；果酒发酵产生的C O?可溶解在弯管的水中，进一步通过水排出，B 正确;醋酸菌是好氧菌，因弯管没有插入装置底部,且未通入无菌空气，去除弯管中的水后也不能满足底层发酵液中醋酸菌的呼吸需求,C 错误;去除弯管中的水后,该装置的弯管部分也能防止空气中的微生物进入,与巴斯德的鹅颈瓶作用类似,D正确。4.（2 0 1 4 广东高考 T 4）下列叙述错误的是（）A.醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸B.酵母菌在无氧条件下利用葡萄汁产生酒精C.泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸发酵D.腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪酶【解题指南】（1）关键知识:细胞呼吸原理和生物技术在食品加工方面的应用。（2）隐含信息:有氧呼吸和无氧呼吸的产物应用。选 A。本题考查细胞呼吸原理和生物技术在生产应用中的相关知识。A项中，醋酸菌酿醋时需要持续通气，即利用醋酸菌的有氧呼吸，故错误。B 项中，酵母菌是单细胞真核生物，在有氧条件下进行有氧呼吸,无氧条件下进行无氧呼吸,可以将有机物不彻底分解生成酒精和二氧化碳,并释放少量的能量,从而可利用葡萄汁产生酒精，故正确。C项中，乳酸菌属于厌氧型细菌，进行无氧呼吸产生乳酸,可用于泡菜腌制,故正确。D 项中,腐乳是豆腐在毛霉等微生物的作用下形成的，由于毛霉等微生物能产生蛋白酶和脂肪酶，可将豆腐中的蛋白质和脂肪分解成肽、氨基酸和甘油、脂肪酸等小分子物质，故正确。5.（2 0 1 4 山东高考T 3 5）玉米是重要的粮食作物，经深加工可生产酒精、玉米胚芽油和果糖等。流程如下：(1)玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。培养酵母菌时,该水解产物为酵母菌的生长提供_。发酵过程中检测酵母菌数量可采用 法或稀释涂布平板法计数。玉米胚芽油不易挥发,宜选用 法或 法从玉米胚芽中提取。(3)玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。利用技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本。(4)利用P CR 技术扩增葡萄糖异构酶基因时,需用耐高温的 催化。P CR 一般要经历三十次以上的循环,每次循环包括变性、和 三步。【解题指南】(1)题干关键词：“玉米秸秆”“玉米胚芽”和“玉米淀粉”。(2)关键知识:所有微生物生长繁殖均需要培养基，其含有碳源、氮源、无机盐、水等；P CR 技术与细胞内DN A 复制的最大区别是需要耐高温的DN A 聚合酶。本题主要考查微生物的培养和P CR 技术。(1)玉米秸秆中的纤维素经水解后的产物为葡萄糖,葡萄糖可为酵母菌的生长提供碳源。酵母菌可用显微镜直接计数法或稀释涂布平板法计数。(2)玉米胚芽油不易挥发，因此不宜选用蒸播法提取,可用压榨法或萃取法提取。(3)利用固定化酶技术可使酶重复利用，从而降低生产成本。(4)P CR 技术中应选用耐高温的DN A 聚合酶催化,P CR 的每次循环包括变性、复性和延伸三步。答案：(1)碳源 显微镜直接计数(2)压榨 萃取(注:两空可颠倒)固 定 化 酶(4)(T a q)DN A 聚合酶(低温)复性(或退火)(中温)延伸6.(2 0 1 4 浙 江 自选模块 T 1 7)“生物技术实践”模块下面是关于固定化酶和细菌培养实验的问题，请回答：(1)某兴趣小组欲利用固定化酶进行酶解淀粉的实验,分组见下表。组另U固定化酶柱长度(c m)淀粉溶液的流速(m L m i n1)甲1 00.3乙1 00.5丙1 50.3T1 50.5将吸附了 a -淀粉酶的石英砂装入柱中后，需用蒸储水充分洗涤固定化酶柱，以除去0按上表分组,将配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流出液进行K I-L 检测。若流出液呈红色,表明有生成,若各组呈现的颜色有显著差异，则流出液中淀粉水解产物浓度最高的是 组。(2)下列关于上述固定化酶实验的叙述,错误的是 oA.固定化酶柱长度和淀粉溶液流速决定了酶柱中酶的含量B.淀粉溶液流速过快会导致流出液中含有淀粉C.各组实验所用的淀粉溶液浓度应相同D.淀粉溶液的p H 对实验结果有影响(3)现有一份污水样品,某兴趣小组欲检测其中的细菌数,进行以下实验。将一定量的污水样品进行浓度梯度稀释。取适量不同稀释度的稀释液，用法分别接种于固体平面培养基上，经 培 养 后 进 行 计 数。该 实 验应注意，接 种 前，从盛有的容器中将玻璃刮刀取出，放在酒精灯火焰上灼烧,冷却后待用；分组时，需用 作为对照。(4)在上述细菌培养实验中进行计数时,应计数的是接种了 oA.各个稀释度样品的培养基上的细菌数B.合理稀释度样品的培养基上的细菌数C.各个稀释度样品的培养基上的菌落数D.合理稀释度样品的培养基上的菌落数【解题指南】(1)题干关键词：“固定化酶”“细菌培养”“接种”“计数”。(2)隐含信息:酶浓度对淀粉水解反应的影响、p H 等环境因素对酶活性的影响、底物淀粉与酶接触面积对反应速率的影响、微生物培养时防止杂菌污染的方法等。本题主要考查固定化酶应用的相关知识。题表中固定化酶柱长度代表所用固定化酶浓度的大小，长度越大酶柱中所含酶越多；淀粉溶液的流速决定了反应物与酶柱中酶相互接触的时间长短,流速越小,淀粉与酶越能充分接触而反应。淀粉遇K I-L 试剂显蓝色,而流出液中显示红色,说明大分子淀粉在酶的作用下水解。从表中可知,丙中酶柱较长,淀粉流速较小,最适合酶促反应,反应速率最快。(2)设计实验应遵循对照原则、单因子变量原则，所以每组实验中淀粉溶液浓度应相同、溶液的 p H 均应保持在淀粉酶的最适p H 条件下,所以C、D项正确。淀粉溶液流速过快,酶与底物不能充分反应，流出的可能是没有水解的淀粉，故 B项正确。酶柱中酶的含量由酶柱长度决定,但是酶在反应前后保持不变,所以淀粉溶液流速不能决定酶的含量,因此A项错误。(3)本实验所接种细菌为不同稀释度的菌液,而不是挑取菌落接种,应用涂布分离法。微生物培养为防止杂菌污染需在无菌条件下进行，常用的消毒灭菌方法有消毒法:煮沸、巴氏消毒法、化学试剂消毒法(7 0%酒精)；灭菌法:灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。(4)测定微生物数量的方法:直接计数法,此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量，但不能区分细菌死活;间接计数法，常用的是稀释平板计数法,此法在含菌数较少的情况下，也可计数,但需将待测样品制成均匀的系列稀释液,尽量使样品中微生物细胞分散开,为防止偶然性,应计数合理稀释度样品培养基上的菌落数,菌落易于观察。通过以上分析，故 D 项正确。答案：(1)未吸附的a-淀粉酶 糊精 丙(2)A (3)涂 布 分 离 7 0%酒精 未接种的培养基(4)D7.生物一一选修1:生物技术实践(2 0 1 4 新课标全国卷I T 3 9)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题：(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖甘酶可将 分解成。(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(C R)时,C R 可与纤维素形成 色复合物。用含有 CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的。(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)：酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂C R溶液水培养基甲+-+培养基乙+4-+-+注：“+”表示有，表示无。据表判断，培养基甲(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是；培 养 基 乙(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是【解题指南】(1)题干关键词：“纤维素酶”“刚果红”。(2)隐含信息:两种培养基中有琼脂的为固体培养基,无琼脂的为液体培养基;淀粉是微生物的碳源,不含纤维素粉不能作为分离和鉴别纤维素分解菌实验的选择培养基。(3)关键知识:土壤中某些微生物的分解作用和筛选纤维素分解菌的方法。本题主要考查纤维素酶的作用、刚果红染色法、分离和鉴别纤维素分解菌的方法。(1)纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。纤维素能被纤维素酶分解为葡萄糖,如图：纤维素f 够 g匕纤维二糖葡萄糖普味葡萄糖(2)刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。(3)分离和鉴别纤维素分解菌的培养基为固体培养基，且需要以纤维素为唯一碳源。答案：(1)纤维二糖葡萄糖 红 透 明 圈(3)不能液体培养基不能分离单菌落不能培养基乙中没有纤维素，不会形成C R-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌8.生物选修1:生物技术实践(2 0 1 4 新课标全国卷I I -T3 9)为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量,并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；然后,将 1 m L 水样稀释1 0 0 倍,在3 个平板上用涂布法分别接入0.1 m L 稀释液;经适当培养后,3 个平板上的菌落数分别为39、38 和 37,据此可得出每升水样中的活菌数为 o(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是O示意图A 和 B中,表 示 的 是 用 稀 释 涂 布 平 板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养,另一部分进行振荡培养。结果发现:振荡培养的细AB菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是:振荡培养能提高培养液中的含量，同时可使菌体与培养液充分接触,提高 的利用率。【解题指南】(1)题干关键词：“先行培养”“振荡培养”。(2)隐含信息:A图中菌落是采用平板划线法培养的结果,B图中菌落分布相对均匀，为稀释涂布平板法接种培养的结果。(3)关键知识:稀释涂布平板法检测细菌含量、平板划线法分离细菌。本题考查微生物培养、细菌分离的相关知识。为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成;利用平板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌数：(Y u,我脖U教 结 出 下 内 软 3 蓟 丽丽-x却 侪 数)3.NX 10：I.(2)接种时接种环需要灼烧灭菌;在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线,这样做的目的是通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。(3)根据示意图A和B中生长出的菌落形态,判定B图中为稀释涂布平板法接种培养的结果(菌落分布相对均匀)。(4)振荡培养可以增加液体培养基溶解氧的含量,促进好氧型微生物的生长；另外振荡培养还可以使菌体与培养液充分接触,提高营养物质的利用率。答案：(1)检测培养基平板灭菌是否合格3.8 X 1 07(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(4)溶 解 氧 营 养 物 质9.(2 0 1 4 四川高考 T 1 0)有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现,苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。选择培养划线纯化 菌种图 甲蛋白酶溶液取10mL加入测定苯磺隆降解率上 清 液 苯 磺 隆 溶 液图 乙(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、四类,该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源,其原因是 与 微 生 物 培 养 基 相 比,植 物 组 织 培 养 的 培 养 基 常 需 添 加 生 长 素 和,这些植物激素一般需要事先单独配制成 保存备用。(3)纯 化 菌 株 时,通 常 使 用 的 划 线 工 具 是。划线的某个平板培养后,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有(4)为探究苯磺隆的降解机制,将该菌种的培养液过滤离心,取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是,该 实 验 设 计 是 否 合 理？为什么？。【解题指南】(1)图示信息:利用选择培养基分离降解苯磺隆的菌株，取菌株产生的蛋白酶分解苯磺隆。关键知识:微生物的培养基成分、植物组织培养、微生物的接种、对照原则。本题考查微生物的培养及对照实验的设计原则。(1)微生物的培养基主要含有水、碳源、氮源和无机盐四类营养;选择培养基只允许特定种类的微生物生长，又要抑制或阻止其他种类微生物生长，因而必须以苯磺隆为唯一碳源，只让目的菌株生长繁殖。(2)植物组织培养中启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素是生长素和细胞分裂素,为了避免每次配制时都要称量,可将植物激素先配成母液。接种环在平板内的第二次划线起，都要先灼烧灭菌冷却后划线，而且要从上一次划线末端而非空白处划线,不冷却会烫死上一次划线末端的菌株,从空白处划线会无菌株。(4)从图乙上清液中加入蛋白酶溶液可知，蛋白酶是用于水解上清液中的某蛋白质的，由此可判定实验假设是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质，但是还需设计不加入蛋白酶的对照组。答案：(1)氮源和无机盐只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长繁殖(2)细 胞 分 裂 素 母 液(3)接种环 接种环灼烧后未冷却;划线未从第一区域末端开始划线(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质 不合理，缺少空白对照1 0.(20 1 4 江苏高考 T 29)为了获得植物次生代谢产物,先用植物外植体获得愈伤组织,然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题：(1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为 o(2)在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和p H的变化如下图所示。细 胞 干 重 在1 2 d后下降的原因有;培 养 液 中 蔗 糖 的 作用多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常用纤维素酶和酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞(2n)经诱导处理后，观察到染色体数为8 n的细胞,合理的解释是、o(4)为了更好地获得次生代谢产物,生产中采用植物细胞的固定化技术,其原理与酵母细胞固定化类似。下 列 说 法 正 确 的 有(填 序 号)。选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋 必须在光照条件下培养培养过程中需通空气 固定化后植物细胞生长会变慢【解题指南】(1)题干中有文字“在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和p H的变化”，从而推断图中曲线的含义。(2)关键知识:植物组织培养、染色体变异及细胞固定化。本题考查植物组织培养、诱导染色体加倍、有丝分裂、酶的固定化技术。(1)外植体在人工、无菌条件下,经脱分化可形成愈伤组织。由图蔗糖浓度下降可知，外植体离体培养过程中需要消耗蔗糖，1 2天后蔗糖浓度较低;p H下降会影响酶的活性，愈伤组织细胞对物质的合成少于分解,细胞干重下降。植物组织培养过程中,蔗糖既能维持一定的渗透压,又能提供植物细胞生命活动必须的营养物质(能量)。一定浓度的秋水仙素或低温都可抑制纺锤体的形成,使子染色体不能移向两极,从而使细胞中染色体数目加倍。植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，可通过纤维素酶、果胶酶破坏细胞壁，从而使愈伤组织细胞分离。在用秋水仙素或低温处理后，会出现染色体为2 n、4 n、8 n等的细胞,4 n的细胞在有丝分裂后期着丝点分裂,染色体数目加倍至8 n;8 n的细胞在有丝分裂中期能清晰看出8 n条染色体。(4)为了更好地获得次生代谢产物,应选用生长旺盛的愈伤组织细胞。愈伤组织不能进行光合作用，因此要通入无菌空气确保其正常的生命活动。细胞的固定化通常使用包埋法，由于包埋材料的影响，营养物质和氧气的扩散都受到一定的限制,所以固定化细胞生长速度会变慢。答案：(1)脱分化(2)蔗糖浓度下降,p H降 低 提 供 能 源 调 节 渗 透 压 秋 水 仙 素(低 温)果 胶 经加倍到4 n的细胞处于有丝分裂后期 经加倍到8 n的细胞处于有丝分裂中期(4)1 1.(2 0 1 4 江苏高考T3 0)为了 获 得 胡 萝 卜 素 产 品，某小组开展了产B-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：实 验 用 的 培 养 皿 常 用 的 两 种 灭 菌 方 法 是;为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该.(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是 o下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是 o (填序号)乙丙安全阀、放气阀、压力表放气阀、安全阀、压力表安全阀、放气阀、温度表放气阀、安全阀、温度表(4)为了将分离到的菌株纯化,挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长,最可能的原因是 为 增 加B -胡 萝 卜 素 提 取 量，在 研 磨 酵 母 细 胞 时，添 加 石 英 砂 的 目 的是;研磨时（填“需要”或“不需要”）添加C a C O3）理由是 o【解题指南】（1）图示信息:灭菌锅及其局部剖面示意图，从而推断甲、乙、丙指示的结构名称。（2）关键知识:微生物的培养与分离纯化、色素的提取。本题考查微生物培养中的灭菌、接种技术、灭菌锅的构造、色素提取的操作。（1）灭菌常用方法有高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌等,培养皿常用高压蒸汽灭菌、干热灭菌。将培养皿放入灭菌锅之前通常用牛皮纸或报纸包扎避免灭菌后的再次污染。（2）青霉素能破坏细菌的细胞壁并在细菌的繁殖期起杀菌作用，因此添加青霉素可抑制细菌的生长。乙连接软管为排（放）气阀，甲为安全阀,丙是压力表。（4）3块平板有两块平板长有菌落，说明含有菌株并可在培养基上生长;而其中一块未见菌落,说明菌株死亡,最可能的原因是接种过程中接种环灼烧后未冷却或未足够冷却，使菌株因温度过高被杀死。石英砂有助于研磨充分。C a C O s用于中和酸性物质，B-胡萝卜素较耐酸，因此不需添加C a C 03o答案：（1）干热灭菌和湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）用牛皮纸（报纸）包扎器皿（2）抑制细菌（放线菌）生长（3）（4）接种环温度过高,菌被杀死（5）有助于研磨充分 不需要 B -胡萝卜素较耐酸1 2.（2 0 1 4海南高考T3 0）生物一一选 修1:生物技术实践 已知泡菜中亚硝酸盐含量与泡制时间有关。为了测定不同泡制天数泡菜中亚硝酸盐的含量,某同学设计了一个实验,实验材料、试剂及用具包括:刻度移液管、比色管、不同浓度的亚硝酸钠标准溶液、亚硝酸盐的显色剂、不同泡制天数的泡菜滤液等。回答相关问题：（1）请完善下列实验步骤。标准管的制备:用 和显色剂制成颜色深浅不同的系列标准管。样 品 管 的 制 备:用 刻 度 移 液 管 分 别 吸 取 一 定 量 的,加到不同的比色管中，然后在各个比色管中加入等量的显色剂进行显色,得到样品管。将每个 分别与系列标准管进行比较，找出与样品管颜色深浅的标准管,该管中亚硝酸钠含量即代表样品管中的亚硝酸盐含量,记录各样品管亚硝酸盐的含量。下图表示的是泡菜中 趋势。（3）泡 菜 制 作 过 程 中 产 酸 的 细 菌 主 要 是（填“醋酸杆菌”或“乳酸菌”）o【解题指南】（1）题干关键词：“泡菜中亚硝酸盐含量与泡制时间有关”。（2）关键知识:亚硝酸盐含量的测定、泡菜的制作原理。本题主要考查泡菜制作原理及亚硝酸盐含量测定的相关知识。（1）在亚硝酸盐的含量测定中，用不同浓度的亚硝酸钠标准溶液和显色剂制成颜色深浅不同的系列标准管;用刻度移液管分别吸取一定量的不同泡制天数的泡菜滤液，加到不同的比色管中,然后在各个比色管中加入等量的显色剂进行显色，得到样品管;将每个样品管分别与系列标准管进行比较，找出与样品管颜色深浅相近的标准管,该管中亚硝酸钠含量即代表样品管中的亚硝酸盐含量，记录各样品管亚硝酸盐的含量。（2）据图可知，该图表示亚硝酸盐的含量随发酵时间的变化曲线。（3）制泡菜时使用的微生物是乳酸菌。答案：（1）不同浓度的亚硝酸钠标准溶液不同泡制天数的泡菜滤液样品管相同（相近）（2）亚硝酸盐含量的变化（3）乳酸菌知识点2 0 生物技术实践1.（20 1 5 广东高考 T 3）关于D N A 的实验,叙述正确的是（）A.用兔的成熟红细胞可提取D N AB.P C R 的每个循环一般依次经过变性一延伸一复性三步C.D N A 溶液与二苯胺试剂混合,沸水浴后生成蓝色产物D.用甲基绿对人的口腔上皮细胞染色,细胞核呈绿色,细胞质呈红色【解题指南】（1）题干关键词:提取D N A、P C R、二苯胺试剂、甲基绿。关键知识:D N A 的提取与检测方法、P C R 反应过程、甲基绿的作用。选 C。本题主要考查了实验的原理、选材以及试剂的使用。兔为哺乳动物，其成熟的红细胞中无细胞核,不能从中提取D N A,故 A项错误;P C R 每次循环都可以分为变性一复性一延伸三步,故 B 项错误;在沸水浴的条件下,D N A 遇二苯胺变成蓝色,故C 项正确；甲基绿使D N A 呈现绿色,不论是细胞核还是细胞质，只要含有D N A,都会呈绿色,故D项错误。2.（20 1 5 江苏高考 T 1 1）下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述，错误的是（）A.固定化酶的主要目的是实现酶的重复利用B.溶解氧交换受阻是固定化酶应用的重要限制因素C.固定化细胞用于生产能分泌到细胞外的产物D.凝胶与被包埋细胞之间不是通过共价键结合选 B o 本题主要考查固定化酶和固定化细胞。固定化酶制作的目的是能够顺利从发酵产物中把酶分离出来,并能够使酶反复使用，故 A项正确;溶解氧交换受阻会影响细胞呼吸,是固定化细胞应用的重要限制因素,故B 项错误；固定化细胞用于生产、获得细胞的代谢产物,故C 项正确;将细胞包埋在多孔载体内部而制成固定化细胞，细胞并不与凝胶通过共价键结合，故 D项正确。3.（2 0 1 5 江苏高考 T 1 7）关于“腐乳的制作”实验,下列叙述错误的是（）A.将腐乳坯堆积起来会导致堆内温度升高,影响毛霉生长B.腐乳坯若被细菌污染,则腐乳坯表面会出现黏性物C.勤向腐乳坯表面喷水,有利于毛霉菌丝的生长D.装坛阶段加入料酒,可有效防止杂菌污染选 C o 本题主要考查腐乳制作的过程和材料处理的方法及目的。将腐乳坯堆积起来会导致微生物大量繁殖，堆内温度升高,影响毛霉生长，故 A项正确；正常情况下毛霉等菌种，会使豆腐表面长出一层菌丝,被细菌污染,腐乳坯表面会出现黏性物,故B项正确;适于做腐乳的豆腐含水量为7 0%左右,适于毛霉菌丝生长,再加水不利于腐乳成形,故C 项错误;装坛时加入料酒,可抑制杂菌生长，故 D 项正确。4.（2 0 1 5 江苏高考 T 1 9）做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（）A.高压灭菌加热结束时,打开放（排）气阀使压力表指针回到零后,开启锅盖B.倒平板时,应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C.为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D.用记号笔标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上【解题指南】关键知识:培养基的灭菌方法、倒平板的方法和接种的过程。选 D。本题主要考查微生物的分离与培养实验。高压蒸汽灭菌加热结束后，让其自然冷却后再慢慢打开排气阀以排除余气,然后才能开盖取物,故A项错误;倒平板时左手拿培养皿,右手拿锥形瓶,左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，倒入培养基后立即盖上培养皿皿盖，故 B项错误;灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种，故 C项错误;皿底的标记不会因为盖子混淆而混淆,故D 项正确。5.（2 0 1 5 四川高考 T 3）下列是以酵母菌为材料进行的实验，有关叙述错误的是（）A.探究酵母菌的呼吸方式,可用澳麝香草酚蓝检测产生的C 02B.用酵母菌发酵酿制果酒,选择酸性重格酸钾检测产生的酒精C.探究酵母菌种群数量变化,应设空白对照排除无关变量干扰D.用稀释涂布平板法培养计数,应选择有3 0 3 0 0 菌落数的平板【解题指南】（1）题干关键词：“酵母菌”“错误”。（2）关键知识:酵母菌无氧呼吸产物的鉴定原理、探究酵母菌种群数量变化的实验设计原则及计数方法。选 C。本题考查酵母菌细胞呼吸方式探究及种群数量变化研究。A项，酵母菌呼吸作用产生的C 0,可使澳麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄,故正确。B项,橙色的酸性重铝酸钾与酒精发生化学反应,变成灰绿色,故正确。C 项,探究酵母菌种群数量变化,不同时间的取样即为对照,不必设空白对照,故错误。D项,菌落数若太少的话不准确,太多的话不好计数,一般选择有3 0 3 0 0 菌落数的平板计数,故正确。6.（2 0 1 5 江苏高考 T 2 4）下图为苹果酒的发酵装置示意图，下列叙述错误的是（多选）（）A.发酵过程中酒精的产生速率越来越快B.集气管中的气体是酵母菌无氧呼吸产生的C O2C.发酵过程中酵母菌种群呈“J”型增长D.若发酵液表面出现菌膜,最可能原因是发酵瓶漏气选 A、B、C。本题主要考查果酒的制作原理、步骤和注意事项。发酵后期，底物减少、酒精浓度增加等因素，都会造成酒精生产速率减慢，故 A项错误;发酵初期，由于发酵瓶中有氧气，酵产乳糖酶微生物L的筛选乳糖酶的提取纯化母菌能进行有氧呼吸产生C 02 1故B项错误 酵母菌种群数量先增加后减少,故C项错误;发酵瓶漏气,会使醋酸菌等大量繁殖,从而形成表面可以观察到的菌膜,故D项正确。7.（2 0 1 5 山东高考 T 3 5）乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖,具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下：产乳糖酶微生物L的培养_乳糖酶一|的固定化（1）筛选产乳糖酶的微生物L时,宜用 作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是。从功能上讲，这种培养基属于。（2）培养微生物L前,宜采用 方法对接种环进行灭菌。（3）纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量（相对分子质量）大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快,说明其分子量（相对分子质量）越。（4）乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的确定其应用价值。除 化 学 结 合 法 外，酶 的 固 定 化 方 法 还 包括、离子吸附法及交联法等。（1）已知乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用乳糖作为培养基中的唯一碳源，培养基中琼脂的作用是凝固剂，从功能上讲,这种培养基属于选择培养基。（2）为了避免杂菌污染,在培养微生物前,对接种环应采用灼烧灭菌。（3）用电泳法纯化乳糖酶时,若在相同条件下分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量（相对分子质量）越小，电泳速度越快。（4）固定化酶的应用价值与酶的活性（或活力）有关，因此用化学结合法固定化乳糖酶时，可通过检测固定化乳糖酶的活性（或活力）来确定其应用价值。固定化酶的方法包括化学结合法、包埋法、物理吸附法、离子吸附法及交联法等。答案：（1）乳糖 凝固剂 选择培养基（2）灼 烧（3）小（4）（酶）活性 或（酶）活力 包埋法 物理吸附法（注:后两空可颠倒）8.（2 0 1 5 全 国 卷I T 3 9）已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：（1）显微观察时,微生物A菌体中的油脂通常可用 染色。微生物A产生的油脂不易挥发,可选用（填“萃取法”或“水蒸气蒸储法”）从菌体中提取。（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落,可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以 为碳源的固体培养基进行培养。（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用 直接计数;若要测定其活菌数量,可选用 法进行计数。（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度,某同学测得相同时间内，在35、40、45温 度 下 降 解10 g油脂所需酶量依次为4mg、Img、6mg,则上述三个温度中,条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度,应围绕 C设计后续实验。【解题指南】（1）题干关键词:不易挥发、直接计数、活菌数量。（2）关键知识:提取油脂的方法、分解油脂的微生物的分离、测定微生物数量的方法和探究酶的最适温度的方法。（1）脂肪可被苏丹IH（IV）染液染成橘黄色（红色），题干中说明微生物A产生的油脂不易挥发,则可以采用萃取法提取微生物A中的油脂。（2）油脂为有机化合物,富含碳元素,故为了从自然界获得能够分解油脂的单菌落，应以油脂为唯一碳源来配制培养基。在该培养基上，能分解油脂的微生物可以正常生长，其他微生物不能正常生长。可利用血细胞计数板计数法测定菌液中的微生物数量,活菌和死亡的细菌都会被计数,所以测定培养液中的活菌数应采用稀释涂布平板法。（4）在4 5 c下，降 解10 g油脂所需酶量最多，则该温度下酶活性最低；由题干信息可知,40C下降 解10 g油脂所需的酶量最少。应围绕40设置不同温度梯度来探究酶的最适温度。答案：（1）苏丹11（或苏丹IV）萃取法（2）油脂（其他合理答案也可）（3）血细胞计数板 稀释涂布平板（其他合理答案也可）（4）45 409.（2015 全 国 卷H T39）回答与胡萝卜素有关的问题：胡萝卜含有的胡萝卜素中，最主要的是（填“a-胡萝卜素”“B-胡萝卜素”或“丫-胡萝卜素”），该 胡 萝 卜 素 在 人 体 内 可 以 转 变 成 两 分 子，后者缺乏会引起人在弱光下视物不清的病症，该疾病称为 o胡萝卜素是（填“挥发性”或“非挥发性”）物质。（2）工业生产上,用养殖的岩藻作为原料提取胡萝卜素时,（填“需要”或“不需要”）将新鲜的岩藻干燥。现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂,应选用其中的 作为胡萝卜素的萃取剂，不选用另外一种的理由是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _【解题指南】(1)题干关键信息：“弱光下视物不清”“萃取剂”。(2)关键知识:胡萝卜素不溶于水;一分子胡萝卜素可被氧化成两分子维生素A;含水量影响胡萝卜素的萃取效果。本题考查胡萝卜素的提取。(1)根据双键的数目可以将胡萝卜素划分a、B、丫三类，胡萝卜素是其中最主要的组成成分。一分子胡萝卜素在人或动物的小肠、肝脏等器官被氧化成两分子维生素A。胡萝卜素可以用来治疗因缺乏维生素A 而引起的各种疾病，如夜盲症等。胡萝卜素的化学性质比较稳定,不溶于水,是非挥发性物质。(2)萃取的效果受到含水量、温度等条件的影响,要保证好的萃取效果,需要将岩藻进行粉碎和干燥。萃取胡萝卜素的有机溶剂应不与水混溶,而乙醇为水溶性有机溶剂，乙酸乙酯为水不溶性有机溶剂，故选乙酸乙酯。答案：(1)B-胡萝卜素维生素A 夜盲症非挥发性(2)需 要(3)乙酸乙酯 萃取胡萝卜素的有机溶剂应不与水混溶，而乙醇为水溶性有机溶剂1 0.(2 0 1 5 广东高考T 2 9)泡菜是我国的传统食品之一，但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害，某兴趣小组准备参加“科技创新大赛”，查阅资料得到下图。876543210,()*然圈匿解()*侬相/港自制作泡菜时，泡菜坛一般用水密封，目的是。乳酸菌发酵第一阶段的产物有。(2)据题图，与第3天相比,第8天后的泡菜更适于食用，因为后者;p H 值呈下降趋势,原因是。该小组得到一株“优选”乳酸菌(亚硝酸盐还原酶活力比普通乳酸菌高5倍)，拟参照资料的实验方案和食盐浓度(蜴1 0酚，探究与普通乳酸菌相比用“优选”乳酸菌制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的高低,并确定其最适条件,请你设计一个实验结果记录表,并推测实验结论。【解题指南】(1)图示信息:p H随乳酸菌数量的增加而降低，随乳酸菌数量的减少下降速率减慢;亚硝酸盐的含量超过一定时间会降低。(2)关键知识:乳酸发酵原理、实验设计与分析。本题考查泡菜制作原理及实验设计方法。(1)乳酸菌是严格厌氧微生物,制作泡菜时用水密封泡菜坛，其目的是为了保持无氧的环境。乳酸菌进行乳酸发酵,其第一阶段的物质变化与有氧呼吸的第一阶段相同,均为葡萄糖分解产生丙酮酸、H、少 量A T P。(2)亚硝酸盐对人体的危害比较大，泡菜制作后一段时间才能食用，从图中曲线可看出第8天后亚硝酸盐含量与之前相比含量较低。在此过程中乳酸菌进行了乳酸发酵,产生了乳酸导致泡菜坛内pH下降。(3)设计的记录表中要包含乳酸菌类型、食盐浓度和发酵时间等自变量,因变量为亚硝酸盐的含量。通过相互对照确定用“优选”乳酸菌制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的高低,并确定最适发酵条件。答案：(1)隔绝空气,创造无氧环境，有利于乳酸菌发酵 丙酮酸、H、A T P(2)亚硝酸盐含量较低乳酸菌发酵产生的乳酸增多(3)两种乳酸菌在泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量变化表乳酸菌亚 硝 鼠 类 型 及盐 含 量、食盐0 n g/k g)度发 酵 标、间(天)普通乳酸菌“优选”乳酸菌4%5%.1.0.%4%5%.1.0.%123.10推测实验结论:与普通乳酸菌相比，“优选”乳酸菌制作泡菜时,相同条件下产生的亚硝酸盐含量低。1 1.(2 0 1 5-江苏高考 T 3 1)人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆,提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果,研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株,并对其降解纤维素能力进行了研究。请回答下列问