《细胞工程》考试大纲_资格考试-报关员资格考试.pdf

细胞工程考试大纲 第一章 绪论 一、名词 高技术、生物技术、细胞工程、生化工程.二、知识点 现代生物技术是一项高技术；生物技术的基本内容；细胞工程在整个生物工程中的地位；细胞工程主要的技术领域；细胞工程的主要应用。第二章 细胞工程理论基础 一、名词 奢侈基因、管家基因.二、知识点 细胞共性。第三章细胞工程基本技术 一、名词 生物安全、p1 级实验室、湿热灭菌、无菌操作技术、细胞贴壁率、细胞计数、MTT 法、活体染色、成集落试验、污染。二、知识点 细胞工程实验室主要的仪器设备；细胞培养室的基本要求；p1 级实验室的基本要求；细胞培养室常见的消毒方法；玻璃器皿的清洗方法；无菌操作的技术要领与要求；培养细胞的观察技术；培养细胞的主要污染与排除；细胞冻存与复苏的技术要点及注意事项。第四章 细胞培养与代谢调控 一、名词 分批式培养、流加式培养、半连续式培养、连续式培养、灌流式培养。第五章 植物人工繁殖 一、名词 植物细胞工程、植物组织培养、外植体、脱分化、再分化、愈伤组织、胚状体、大量元素、微量元素、器官发生途径、胚状体发生途径、植物快速无性繁殖、胚培养、胚乳培养、人工种子、体细胞胚。二、知识点 植物细胞工程的主要内容；植物组织培养的理论基础；植物细胞工程的技术手段；植物组织 欢迎下载 2 再分化的两条途径；植物组织培养的主要步骤与技术要点；影响植物细胞脱分化和再分化因素；愈伤组织有的特点及其在细胞工程中的重要性；愈伤组织再生植株的途径；生长素、细胞分裂素的生理作用及其在组织培养中的意义。成熟胚培养与幼胚培养在技术上的异同；植物胚乳培养的类型；植物胚胎培养的意义及影响因素；愈伤组织的形成的三个阶段及主要特征；人工种子的组成、构建与应用；体细胞胚胎发生的同步控制；植物快繁技术的主要步骤；微繁殖中芽的增殖方式。第六章 动物人工繁殖 一、名词 胚胎工程、体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎融合、嵌合体、胚胎性别鉴定、胚胎冷冻技术、试管婴儿、超数排卵、同步发情、胚胎细胞克隆、同种体细胞克隆、异种体细胞克隆、核移植技术。二、知识点 胚胎工程的主要技术领域；体外受精的基本过程、试管婴儿的基本步骤、胚胎工程的意义；克隆研究的主要内容；克隆的理论与技术基础；核移植的技术要点、应用与发展前景；“多莉”的制备步骤；“多莉”引发的思考；你对克隆人的看法。第七章 细胞重组与细胞融合 一、名词 细胞重组、胞质体、核质体、微细胞、细胞融合、HAT 培养基、单克隆抗体、基因定位。二、知识点 细胞重组的方式与意义；HAT 选择的原理；细胞融合的主要应用；PEG 诱导细胞融合的基本原理；融合体的基本类型及其筛选。第八章 新品种培育 一、名词 花药培养、植物原生质体融合、端体系统、三体植物系统、单体系统、孤雌生殖、染色体加倍、单体植物、缺体植物。1、花药培养：方法是诱导和培养外植体花药经由胚状体途径,培育出再生幼苗。一般选取单核中期到单核后期发育阶段的花药,经过预处理和材料灭菌,接种到适宜的培养基上进行诱导,34 周后就可以由裂开的花药长出愈伤组织,再转移到分化培养基上分化出有正常根茎叶的再生植株，移栽于灭菌的土壤中。2、植物原生质体融合：3、端体系统：技术的基本内容细胞工程在整个生物工程中的地位细胞工程主要的技术领域细胞工程的主要应用第二章细胞工程理论基础一名词奢侈基因管家基因二知识点细胞共性一名词第三章细胞工程基本技术生物安全级实验室湿热灭菌无菌操本要求级实验室的基本要求细胞培养室常见的消毒方法玻璃器皿的清洗方法无菌操作的技术要领与要求培养细胞的观察技术培养细胞的主要污染与排除细胞冻存与复苏的技术要点及注意事项第四章细胞培养与代谢调控一名词分批式脱分化再分化愈伤组织胚状体大量元素微量元素器官发生途径胚状体发生途径植物快速无性繁殖胚培养胚乳培养人工种子体细胞胚二知识点植物细胞工程的主要内容植物组织培养的理论基础植物细胞工程的技术手段植物组织再分化 欢迎下载 3 4、三体植物系统：如果细胞中增加一条同种的染色体，则染色体数成为 2n+1，称为三体。如果增加两条同种染色体（非同源），结果有两对染色体都变成三条，则称双三体。5、单体系统：普通小麦有 21 对染色体，小麦的 21 种单体植物总称为单体系统 6、孤雌生殖：孤雌生殖是指雌雄配子未经融合，而由雌配子单性发育成种子的一种无融合生殖。7、染色体加倍：通过杂交或其他方法将同种或异种、属的染色体导入受体种的染色体组 中的现象。8、单体植物：从细胞中去掉一条染色体，则染色体数成为 2n-1，这样的植物叫做单体植物。9、缺体植物：去掉两条染色体(同源)，2n-2 二、知识点 1、花药培养中外植体的选择 2、花药培养与花粉培养的不同点 3、花药培养中再生植株的形成途径与再生植株倍性的关系 4、植物原生质体制备的方法 5 原生质体再生植株的技术路线 6、植物远缘杂交遇到的主要困难。两大困难：（1）由于生殖隔离造成交配困难；（2）即使交配成功，但因染色体组受平衡作用而难以通过减数分裂使合并的异源染色体组在后代固定下来。第九章 植物细胞代谢产物制备 一、名词 看护培养、饲养层培养、细胞固定化培养、冠瘿组织、转基因植物。1、看护培养：用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖。这块愈 伤组织被称为看护组织。2、饲养层培养：用处理过的（如 X 射线处理）无分裂能力或分裂很慢的细胞来饲养所需培养的细胞，使其分裂和生长。3、细胞固定化培养：是指将游离的细胞包埋在支持物内部或表面进行培养的一门技术是在20 世纪 70 年代的酶固定化催化技术基础上发展起来的。4、冠瘿组织：是由根癌农杆菌感染引起的植物肿瘤组织，它能在无外加植物激素的培养基技术的基本内容细胞工程在整个生物工程中的地位细胞工程主要的技术领域细胞工程的主要应用第二章细胞工程理论基础一名词奢侈基因管家基因二知识点细胞共性一名词第三章细胞工程基本技术生物安全级实验室湿热灭菌无菌操本要求级实验室的基本要求细胞培养室常见的消毒方法玻璃器皿的清洗方法无菌操作的技术要领与要求培养细胞的观察技术培养细胞的主要污染与排除细胞冻存与复苏的技术要点及注意事项第四章细胞培养与代谢调控一名词分批式脱分化再分化愈伤组织胚状体大量元素微量元素器官发生途径胚状体发生途径植物快速无性繁殖胚培养胚乳培养人工种子体细胞胚二知识点植物细胞工程的主要内容植物组织培养的理论基础植物细胞工程的技术手段植物组织再分化 欢迎下载 4 上生长。5、转基因植物：是指将外源基因转入到植物的细胞或组织获得了新的遗传性状的植物。第十章 微藻培养及应用 一、名词 微藻：一般是指那些在显微镜下才能辨别形态的微小的藻类 二、知识点 1、微藻的特点及分类。特点：（1）利用太阳能和二氧化碳通过光合作用生产有机物，生长速度快、效率高、能耗低。（2）微藻提取有效成分不需要复杂的前处理。（3）种类多，许多微藻可产生有生物活性的化合物。（4）可以利用贫瘠土地、盐碱地等极端环境。（5）微藻培养简单，容易产业化。分类：微藻有原核微藻和真核微藻两大类，根据微藻生长环境可分为水生微藻、陆生微藻和气生微藻 3 种生态类群、水生微藻又有淡水生和海水生之分，根据分布又可分为浮游微藻和底栖微藻。2、微藻的应用。（课本 202）1）微藻生物能源（1）藻类生物柴油 （2）藻类生物制氢 2）生物活性物质制备 3）水产饵料 4）微藻基因工程 5）微藻的多糖如紫球藻多糖可作为黏合剂、增稠剂和乳化剂 第十一章 动物细胞培养 一、名词 动物细胞工程、细胞培养、组织培养、器官培养、原代培养、继代培养、细胞系、克隆、接触抑制、密度抑制、天然培养液、合成培养液、“一代”细胞、组织块培养法、单层细胞培养法。1、动物细胞工程：模拟体内生理环境使分离的动物细胞在体外生存、增殖的一门技术。2、细胞培养：是指从体内组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌、适当条件下使其生长繁 殖一种技术。细胞培养的对象是单个细胞或细胞群。技术的基本内容细胞工程在整个生物工程中的地位细胞工程主要的技术领域细胞工程的主要应用第二章细胞工程理论基础一名词奢侈基因管家基因二知识点细胞共性一名词第三章细胞工程基本技术生物安全级实验室湿热灭菌无菌操本要求级实验室的基本要求细胞培养室常见的消毒方法玻璃器皿的清洗方法无菌操作的技术要领与要求培养细胞的观察技术培养细胞的主要污染与排除细胞冻存与复苏的技术要点及注意事项第四章细胞培养与代谢调控一名词分批式脱分化再分化愈伤组织胚状体大量元素微量元素器官发生途径胚状体发生途径植物快速无性繁殖胚培养胚乳培养人工种子体细胞胚二知识点植物细胞工程的主要内容植物组织培养的理论基础植物细胞工程的技术手段植物组织再分化 欢迎下载 5 3、组织培养：4、器官培养：5、原代培养：直接从生物体内获取细胞进行首次培养称为原代培养。6、继代（传代）培养：当培养的细胞增殖达一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细 胞分散后，从一个容器以 1：2 或其他比率转移到另一个容器中扩大培养，为继代（传 代）培养 7、细胞系：是由原代培养经传代培养纯化，获得的能在体外生存的细胞群体。8、克隆：是指从一个细胞得到的两个以上的生物体、细胞群或细胞，甚至是一段 DNA 的 拷贝片段。9、接触抑制：当培养细胞分裂增殖相互间密切接触时，细胞停止活动的现象为接触抑制。（非正常细胞如癌细胞除外）。10:、密度抑制：细胞密度过大，代谢物增多，营养物质耗尽导致分裂停止。11、天然培养液：指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基。包括生物性液体（如 血清）、组织浸液（如胚胎浸液）、凝固剂（如血浆凝块）等。12、合成培养液：13、“一代”细胞：是指从细胞接种培养到分离再培养期间的一段时间。14、组织块培养法：把组织切割成 0.51mm3的小块后，由于组织块体积很小，在不加任 何粘着剂的情况下，它们也能直接贴附于瓶壁上，然后细胞自组织块边缘向外长出生长 晕，最后连接成片形成单层细胞。此方法程序比较简单，所以是当前各培养室常用的方 法。15:、单层细胞培养法：所有组织中都含有一定量的细胞间质(纤维、基质等)，妨碍细胞生长 用酶消化后，能除去间质，使组织松散，容易分离成单个细胞或较小的细胞团，接种后细胞易于生长。二、知识点 1、体外培养细胞的主要类型及其生长特点 体外培养细胞的分型 1）贴附生长型细胞：上皮样细胞、成纤维样细胞、游走型细胞、多形型细胞 2）非贴附型细胞（悬浮生长型细胞）生长特点：贴附、接触抑制、密度抑制（依赖性）2、细胞系的生长过程的主要阶段及其特征 技术的基本内容细胞工程在整个生物工程中的地位细胞工程主要的技术领域细胞工程的主要应用第二章细胞工程理论基础一名词奢侈基因管家基因二知识点细胞共性一名词第三章细胞工程基本技术生物安全级实验室湿热灭菌无菌操本要求级实验室的基本要求细胞培养室常见的消毒方法玻璃器皿的清洗方法无菌操作的技术要领与要求培养细胞的观察技术培养细胞的主要污染与排除细胞冻存与复苏的技术要点及注意事项第四章细胞培养与代谢调控一名词分批式脱分化再分化愈伤组织胚状体大量元素微量元素器官发生途径胚状体发生途径植物快速无性繁殖胚培养胚乳培养人工种子体细胞胚二知识点植物细胞工程的主要内容植物组织培养的理论基础植物细胞工程的技术手段植物组织再分化 欢迎下载 6 1）原代（初代）培养期 从接种到第一次传代，一般持续 14 周，此期有细胞分裂，但不旺盛。2）传代期 细胞增殖旺盛，约传代 1050 次。3）衰退期 细胞增殖很慢或不增殖，开始逐渐衰退凋亡。3、血清的主要用途及注意事项 用途：注意事项：血清使用前必须经过分析检测，只有无菌、无内毒素、无溶血或低溶血、蛋白质等营养素达一定标准以上的血清才能使用。4、细胞培养液配置的技术要点 5、原代细胞培养的方法、主要步骤、技术要点以及各自的适用范围 方法：组织块培养法(explant culture)和组织消化培养（单层细胞培养法)主要步骤：1）组织块培养法 取材、剪碎、漂洗、贴瓶、翻瓶加培养液、干涸、培养 2）组织消化培养（单层细胞培养法)取材、消化与分散组织块、离心和计数、接种培养、观察 技术要点 适应范围 6、贴壁细胞传代的主要方法及技术要点 7、悬浮细胞传代的主要方法及技术要点 8、细胞模型的建立与应用 9、细胞培养的作用意义。第十二章 转基因生物反应器 一、名词 转基因动物、基因治疗、基因打靶、动物生物反应器。1、转基因动物：以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代 的一类动物。2、基因治疗：3、基因打靶：4、（转基因）动物生物反应器：利用转基因活体动物的某种能够高效表达外源蛋白的器官或组织来生产活性蛋白的技术，这些蛋白一般是药用蛋白或营养保健蛋白。用于表达的场所包括动物乳腺、血液、泌尿系统、精囊腺等，还包括蛋禽和昆虫个体等。二、知识点 技术的基本内容细胞工程在整个生物工程中的地位细胞工程主要的技术领域细胞工程的主要应用第二章细胞工程理论基础一名词奢侈基因管家基因二知识点细胞共性一名词第三章细胞工程基本技术生物安全级实验室湿热灭菌无菌操本要求级实验室的基本要求细胞培养室常见的消毒方法玻璃器皿的清洗方法无菌操作的技术要领与要求培养细胞的观察技术培养细胞的主要污染与排除细胞冻存与复苏的技术要点及注意事项第四章细胞培养与代谢调控一名词分批式脱分化再分化愈伤组织胚状体大量元素微量元素器官发生途径胚状体发生途径植物快速无性繁殖胚培养胚乳培养人工种子体细胞胚二知识点植物细胞工程的主要内容植物组织培养的理论基础植物细胞工程的技术手段植物组织再分化 欢迎下载 7 1、遗传物质导入受体细胞的方法 （1）物理法 ；包括电穿孔法、显微注射法和裸露 DNA 直接注射法。（2）化学法：DEAE-葡聚糖法、磷酸钙DNA 沉淀法和脂质体载体包埋法。（3）生物学方法：指病毒介导的基因转移。常用 DNA 病毒载体和反转录病毒载体。2、动物生物反应器的类型与特点。类型：动物乳腺生物反应器和动物血液生物反应器。特点：第十三章 干细胞与组织工程 一、名词 干细胞、胚胎干细胞、成体干细胞、ES 细胞、EC 细胞、EG 细胞、组织工程。1、干细胞：即起源细胞，是一类未分化的细胞或原始细胞，具有自我更新和分化潜能的细 胞。2、胚胎干细胞：从早期胚胎中分离出来的干细胞，具有全能性。可以分化成任何组织类型的细胞。3、成体干细胞：是成体组织内具有自我更新及分化产生 1 种或 1 种以上子代组织细胞的未成熟细胞。4、ES 细胞：是从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的一种全能性细胞，是可以分化成任何一种组织类型的细胞。5、EC 细胞：分离自胚胎瘤细胞的干细胞称为 EC 细胞。6、EG 细胞：从原始生殖细胞分离的干细胞称为胚胎生殖细胞，简称 EG 细胞 7、组织工程：利用细胞生物学和工程学原理，将人体某部分的组织细胞种植和吸附在一种生物材料的支架上进行人工培养繁殖、扩增，然后移植到人体内所需要的部位，从而达到器官修复或再造的治疗目的的一种技术。二、知识点 1、干细胞的分类与特点 分类：按其分化潜能可分为三类全能干细胞、多能干细胞、专能干细胞 按干细胞来源分为两类胚胎干细胞、成体干细胞 技术的基本内容细胞工程在整个生物工程中的地位细胞工程主要的技术领域细胞工程的主要应用第二章细胞工程理论基础一名词奢侈基因管家基因二知识点细胞共性一名词第三章细胞工程基本技术生物安全级实验室湿热灭菌无菌操本要求级实验室的基本要求细胞培养室常见的消毒方法玻璃器皿的清洗方法无菌操作的技术要领与要求培养细胞的观察技术培养细胞的主要污染与排除细胞冻存与复苏的技术要点及注意事项第四章细胞培养与代谢调控一名词分批式脱分化再分化愈伤组织胚状体大量元素微量元素器官发生途径胚状体发生途径植物快速无性繁殖胚培养胚乳培养人工种子体细胞胚二知识点植物细胞工程的主要内容植物组织培养的理论基础植物细胞工程的技术手段植物组织再分化 欢迎下载 8 特性：（1）通常呈圆形、体积小、核质比例大。（2）具有较高的端粒酶活性，因此分裂能力极强。（3）增殖速度较慢，只有当机体需要时，进入分化状态并开始逐渐加快。（4）具有自稳性。会自我更新维持自身数目的恒定。2、目前已分离的胚胎细胞、成体干细胞的种类 胚胎干细胞包括 ES 细胞、EG 细胞 成体干细胞包括神经干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞，表皮干细胞、生殖干细胞等。3、干细胞研究的主要应用与意义 干细胞是目前国内外生命科学研究的热点和前沿课题。胚胎干细胞在临床医学、组织工程、克隆动物、转基因工程、生物学基础研究等领域具有重要的理论价值与应用潜力，其中人类胚胎干细胞在心肌梗死、心肌坏死、帕金森氏症、老年性痴呆症、脊髓损伤、皮肤烧伤等修复与治疗方面，具有广阔的应用前景。技术的基本内容细胞工程在整个生物工程中的地位细胞工程主要的技术领域细胞工程的主要应用第二章细胞工程理论基础一名词奢侈基因管家基因二知识点细胞共性一名词第三章细胞工程基本技术生物安全级实验室湿热灭菌无菌操本要求级实验室的基本要求细胞培养室常见的消毒方法玻璃器皿的清洗方法无菌操作的技术要领与要求培养细胞的观察技术培养细胞的主要污染与排除细胞冻存与复苏的技术要点及注意事项第四章细胞培养与代谢调控一名词分批式脱分化再分化愈伤组织胚状体大量元素微量元素器官发生途径胚状体发生途径植物快速无性繁殖胚培养胚乳培养人工种子体细胞胚二知识点植物细胞工程的主要内容植物组织培养的理论基础植物细胞工程的技术手段植物组织再分化