基因工程试题(完整).docx

名词解释问题：Gene manipulation答案： 基因操作。将在细胞外产生的核酸（物质）份子插入到病毒，质粒或者其它载体系统中，再整合到特定的宿主中，从而形成一种新的可连续繁 殖的有机体。名词解释问题：Interrupted genes参考答案： 间断基因。序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段。我们称这种编码序列不连续的基因为间断 基因。名词解释问题：Promotor参考答案：启动子。DNA份子可以与RNA聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。名词解释问题：Subcloning参考答案：亚克隆。当初始克隆中的外源DNA片段较长，含有许多目的基因以外的DNA片段时，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，将目的基因所对应的一小段DNA找出来，这个过程叫“亚克隆”。填空题问题：基因操作（Gene manipulation）的核心部份是基因克隆（gene cloning） , gene cloning的基本要点有（），（）和（）。参考答案：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择填空题问题：（）是遗传物质的基本单位，也是作为遗传物质的核酸份子上的一段片段。它可以是连续的，也可以是0；可以是0,也可以是RNA：可以存在于染色体上，也可以0参考答案：基因：连续；DNA；存在于染色体之外（如质粒，噬菌体等）填空题问题： 基因操作并非一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、。、（）和（）等与基因研究相关的内容。参考答案：表达；调控；检测；改造填空题问题： 启动子（Promotor）是指0。通常一个 Gene是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。在转录过程中，Promoter还是0的结合 位点。参考答案：基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA聚合酶填空题问题： 原核生物的RNA polymerase主要由两部份组成：。和。，其中。-因子并不参预RNA的合成，它的作用主要是。参考答案：核心酶；o因子；识别要转录的起始位点填空题问题： 从。到0的这一段距离称为一个转录单位，或者一个转录产物，其中可包括一个或者多个Gene 。参考答案：启动区；终止区填空题问题：转录终止子主要有两种，一种是。，另一种是0。参考答案： 依赖P因子；不依赖P因子填空题问题：Gene的书写方式，通常是写出的DNA序列总是与。相同的那条链，方向是从。到。对于碱基的位置，普通自转录起始点向两个方 向编号，其中转录起始点定为（），（）定为-1 o参考答案：mRNA； 5'； 3'； +1；在起始点上游第一个碱基填空题问题： 重叠基因（Overlapping gene）是指。，间隔基因（Interrupted gene）是指。参考答案：一个基因的序列中，单个DNA序列可编码一个以上的蛋白质；在编码序列中间插入的一段无编码作用的碱基序列简答题问题：简述基因克隆的两个基本特征？参考答案：基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸份子（普通情况下都是DNA）在不同宿主中的繁殖，打破自然种的界限将来自于不相关物种的基因 放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征，基因操作的另一个重要特征是繁殖。简答题问题：谈谈你对gene的认识，并简要说说gene概念的发展情况？参考答案：能够表达和产生基因产物（Proteinor RNA）的DNA序列（可自由发挥，发展情况请查找相关资料）基因概念的发展：基因作为遗传学中的专用术语，其概念每发展一步都意味着遗传学乃至整个生物学的一次革命和突破，其内容的每次丰富和充实都凝结着生物学家们的滴滴心血。“基因”概念的提出： 遗传学的奠基人孟德尔在1866年发表的论文植物杂交试验指出生物每一个性状都是通过遗传因子来传递的，遗传因子是一些独立的遗传单位。这样把可 观察的遗传性状和控制它的内在的遗传因子区分开来了，遗传因子作为基因的雏形名词诞生了。1909年丹麦遗传学家约翰逊在精密遗传学原理.一书中提出“基因”概念，以此来替代孟德尔假定的“遗传因子”。从此，能够表达和产生基因产物p（rotein or RNA）的DNA序列（可自由发挥）“基因”一词向来伴有着遗传学发展至今。基因结构和功能的探索：摩尔根和他的学生们利用果蝇作了大量的潜心研究，1926年他的巨著基因论出版，从而建立了著名的基因学说，首次完成为了当时最新的基因概念的描述，即基因以直线形式罗列，它决定着一个特定的性状，而且能发生突变并随着染色体同源节段的互换而 交换，它不仅是决定性状的功能单位，而且是一个突变单位和交换单位。1941年比德尔和塔特姆提出一个基因一个酶说；1949年鲍林与合作者在研究镰刀型细胞贫血症时推论基因决定着多肽链的氨基酸顺序；1944年艾弗里、麦卡蒂首次用实验明确证实：DNA是遗传信息的载体； 1952年赫尔希和简答题问题： 某DNA序列中存在Dpnl酶切位点，以此DNA为模板，在体外合成DNA序列，当用该酶进行酶切时，发现切割不动，试分析可能原因？参考答案： 生物体内的DNA序列可能是经过甲基化修饰的，而在体外合成时，缺乏这种修饰作用。当用依赖于甲基化的限制酶Dpnl来切割非甲基化的 序列时，就会浮现不能切割的情况。简答题问题：天然的质粒载体(plasmid vectors)通常需经改造后才干应用，包括去除不必要的片段，引入多克隆位点等。试问在此过程中如何增减酶切位点？参考答案：在酶切水平上，通过酶切和连接产生新的酶切位点。将产生的5'突出端补平后，再连接以产生新的酶切位点；同尾末端的连接，不同的同尾酶切割DNA产生的末端，再相互连接时，可产生新的酶切位点，同时原来的酶切位点却消失；平末端的连接简答题问题：双脱氧终止法测定DNA序列的片段普通不能太长，如何运用本章所学知识测定较长片段的DNA序列？参考答案：将所需要测序的DNA片断采用2种不同的限制性内切酶切割，产生不同的酶切片段，将此酶切片段连接到载体上，测序后，拼接，即可得到全长的DNA序列；用一种限制性内切酶进行部份酶切，酶切产物与载体连接后，测序，拼接，即可得到全长DNA片断。采用以上任一方法均可，需要 注意的是，在进行部份酶切时，应该控制好条件，要确保所得到的酶切片断能覆盖所需测序的DNA片断。您的答案：简答题问题：大肠杆菌DNA聚合酶I,具有3'-5'外切活性和5'3'的聚合酶活性以及5'3'的外切活性，试根据此猜测该聚合酶可能具有哪 些用途？参考答案：利用E. coli DNA聚合酶的5'3'外切核酸酶活性，可用切口平移法标记DNA ，所有DNA聚合酶中惟独此酶有此反应；用 于cDNA克隆中的第二链，即单纯的DNA聚合活性；对3，突出端的DNA作末端标记(交换或者置换反应)。简答题问题：用T4 phage DNA polymerase可进行末端标记，试简述其原理？参考答案：T4 phage DNA聚合酶具有3'- 5'外切活性和5' 3'的聚合酶活性，3' 5'的外切活性可以被5'- 3'的聚合活性所封闭，首先在反应体系中加入一种dNTP ,产生3'凹端，然后加入经过标记的dNTP ,利用T4 phage DNA聚合酶的聚合活性补平3'凹端，即可得到标记 了末端的DNA片断°简答题问题：BAP和CIAP有何作用？为何普通采用CIAP而不采用BAP ?参考答案：作用：催化除去DNA或者RNA 5，磷酸。BAP抗性强，抗高温和去污剂。CTAP可用蛋白酶K消化灭活，或者在5mM EDTA下，65 处理或者75 处理10分钟，然后用酚氯仿抽提，纯化去磷酸化的DNA ,从而去除CIAP的活性。相比之下， CIAP比BAP更易去除，因此， 普通采用CIAP o简答题问题：依赖于DNA的RNA聚合酶包括SP6噬菌体RNA聚合酶和T4或者T7噬菌体RNA聚合酶，这种聚合酶可用于表达外源基因， 阐述常用的构建策略？参考答案： 将T7 RNA聚合酶基因置于E. coli lacUV5启动子之下，插入到A 噬菌体中，感染E. coli ，建立稳定的溶源菌。E. coli BL21 (DE3)菌株即为将lacLV5启动子和T7聚合酶基因置于人噬菌体DE3区，该人噬菌体DNA整合于染色体的BL21处。若将T7噬菌体 启动子控制的目的基因经质粒载体导入该宿主菌中，在IPTG诱导下，可启动外源基因的表达；先导入带T7噬菌体启动子控制的目的基因的质粒，再 用 A 噬菌体(带T7 RNA聚合酶基因)感染E. coli ，激活目的基因的表达。简答题问题： 简述T4多核甘酸激酶的活性和用途？参考答案：T4多核甘酸激酶的活性催化ATP的Y 一磷酸基转移到DNA或者RNA的5'末端。可表现为两种反应，正反应指ATP的丫 一磷 酸基被转移到去磷酸化的DNA 5'端，用于对缺乏5'一磷酸的DNA进行磷酸化。在交换反应中，过量的ATP可使该激酶将磷酸化的5'端磷酸转 移 给 ADP ,然后DNA从【丫 -32P】ATP中获得放射性标记的丫 一磷酸而重新磷酸化，因此可用于DNA的末端标记。用途：该酶主要用于对缺乏 5' 一磷酸的DNA或者合成接头进行磷酸化，同时可对末端进行标记。通过交换反应，用于标记5'末端，以供Maxam-Gilbert法测序、S1核酸酶分析以及其它须使用末端标记DNA的步骤。您的答案：思量题问题：限制性内切酶可划分为哪几个类型，各自有何特点？思量题问题： 哪些酶可用于DNA片段的末端标记？思量题问题：DNA聚合酶有哪些类型，各有什么活性？思量题问题：在份子克隆中所用的酶主要作用于哪些底物？第三章名词解释问题：Vehicle参考答案： 载体。将外源DNA或者基因携带入宿主细胞(host cell)的工具称为载体。具备以下三个必须元件：复制原点、多克隆位点和筛选标记。名词解释问题： Gene clone参考答案：基因克隆。克隆作动词时，指从单一祖先产生同一的DNA份子群体或者细胞群体的过程；作名词时指从一个共同祖先无性繁殖下来的一群遗传上同一的DNA份子、细胞或者个体所组成的特殊的生命群体。利用重组DNA技术分离目的基因，称之为基因克隆。名词解释问题：Gene library参考答案：基因文库。由大量的含有基因组DNA （即某一辈子物的全部DNA顺序）的不同DNA片段的克隆所构成的群体，称之为基因文库。名词解释问题：Plasmid incompatibility参考答案：质粒不相容性。利用同一复制系统的两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第二个质粒导入后，在不涉及DNA限制系统时浮现的现象。名词解释问题：。-complementation参考答案：。-互补。指lacZ基因上缺失近控制基因区段的突变体与带有完整的近控制基因区段的a-半乳糖甘酶阴性的突变体之间实现的互补。这两个 无酶学活性的产物混合在一起时，可恢复。-半乳糖甘酶的活性。名词解释问题：X-gal/IPTG参考答案：两者都是乳糖的衍生物，X-gal：乳糖控制子底物，可以作为生色剂，被a半乳糖昔酶分解后可产生兰色产物，可使菌落呈现兰色；IPTG：乳糖控制子诱导物。名词解释问题：lytic growth参考答案：裂解生长状态。噬菌体侵染宿主细胞后，大量复制并组装成子代噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂解的现象称裂解生长状态。名词解释问题：lysogenic state参考答案：溶源状态。噬菌体侵染宿主细胞后，将A 噬菌体基因组DNA通过位点专一性重组整合到宿主的染色体DNA中，并随宿主的繁殖传给子代 细胞的现象称溶源状态。名词解释问题：Multiplicity of infection参考答案：感染复数。指单个宿主细胞感染的噬菌体颗粒数，等于实验所用的噬菌体与细胞的数量之比。名词解释问题：Insertion vectors参考答案：插入型载体。通过特定的酶切位点允许外源DNA片段插入的载体称为插入型载体。名词解释问题：Replacement vectors参考答案：置换型载体。而允许外源DNA片段替换载体的非必须DNA片段的载体，称为置换型载体。名词解释问题：Cosmic!参考答案：粘粒。带有将DNA包装到噬菌体颗粒中所需的cos序列的质粒。包括质粒复制起点，可以象质粒一样转化并增殖；包括cos位点，可以象噬菌体颗粒一样包装、侵染。名词解释问题：Replicative form DNA参考答案：复制型DNA o在宿主细胞内，感染性的单链噬菌体DNA（正链）在宿主酶的作用下转变成环状双链DNA ,用于DNA的复制，这种双链DNA称为复制型DNA o名词解释问题：Phagemid参考答案：噬菌粒。具有ColEl复制起点及单拷贝的丝状体噬菌体主要基因间隔区的质粒载体。此基因间隔区含病毒DNA合成的起始与终止及噬菌体颗 粒形态发生所必须的全部顺式作用序列。含phagemid的细菌被噬菌体感染后，基因II蛋白作用于间隔区，启动滚环复制产生ssDNA并进行包装。您的答案：名词解释问题：M13K07 help phage参考答案：M13KO7辅助噬菌体。Ml3单链丝状噬菌体的衍生株，基因II带有一个GT的突变。M13KO7基因组双链DNA可表达产生子代单 链DNA所必需的所有蛋白。M13K07中突变的基因II产物与自身携带的噬菌体复制起点的作用尚不如它与克隆于噬菌粒pUCH8和pUC119中的病 毒复制起点的作用有效，可以确保在细胞所产生的病毒颗粒中来自噬菌粒的单链DNA能够占领优势。名词解释问题：Yeast art i f icial chromosomes参考答案：酵母人工染色体载体。利用酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）染色体的复制元件来驱动外源DNA片段复制的载体称为酵母人工染色体载体。由自主复制序列、着丝粒、复制子及选择标记等元件组成。名词解释问题：Bacterial artificial chromosomes参考答案：细菌人工染色体。是基于大肠杆菌的F质粒构建的高通量低拷贝质粒载体。包括严谨型控制的复制区oriS 、启动DNA复制的由ATP驱 动的解旋酶（RcpE）,以及三个确保低拷贝并使质粒精确分配至子代细胞的基因座（parA,parB和parC）等元件）。名词解释问题：Pl arti f icial chromosomes参考答案：Pl人工染色体载体。结合了 P1载体和BAC载体的特性，是P1噬菌体载体的改进载体。重组份子不能通过体外包装来感染宿主细胞， 而只能通过电转化来将重组份子导入宿主细胞。名词解释问题：Shuttle vector参考答案：穿梭载体。能够在两类不同的宿主中夏制、增殖和选择的载体称为穿梭载体。填空题问题： 载体（Vehicle）的类型有（），（）,（）,（）等。参考答案：质粒载体；噬菌体载体；粘粒载体；噬菌粒载体填空题问题： Gene cloning是指。，基因文库（Gene library）是指（）。参考答案：利用重组DNA技术分离目的基因；由大量的含有基因DNA （即某一辈子物的全部DNA顺序）的不同DNA片段的克隆所构成的群体填空题问题： Plasmid的定义是0, Plasmid能进行自我复制，大多数为。链。状DNA份子，大小普通为。kb。参考答案：染色体外的遗传因子；双；闭环；200您的答案：填空题问题： （）即为质粒的拷贝数，按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为。和。，（）质粒多数是一些具有转移能力的大质粒；（）质粒多数是一些 不具有转移能力的小质粒。参考答案：单个细胞中所含有的质粒DNA份子数目；严谨型；松弛型；严谨型；松弛型填空题问题：松弛型质粒和严谨型质粒融合以后，杂合质粒普通优先使用。的复制子。参考答案：松弛型参考答案：两个质粒在同一宿主中不能共存的现象；相同填空题问题：质粒具有转移性，它是指（），它需要（），（）和（）参考答案：在自然条件下，不少质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内；挪移基因mob ；转移基因tra ；转移起始位点填空题问题： 根据质粒的转移性可以将质粒分为（）和（），普通大质粒都是（），。普通都是小质粒，其上没有（）参考答案：接合型质粒；非接合型质粒；接合型质粒；非接合型质粒；编码其DNA转移的基因填空题问题：按其用途可将标记基因分为选择标记和筛选标记，选择标记普通用于0,筛选标记普通用于0参考答案：鉴别目的DNA （载体）的存在；将特殊表型的重组子挑选出来填空题问题：常用的用来鉴定重组质粒的细菌菌落的方法有（），（），。等。参考答案：。一互补；插入失活；原位杂交填空题问题：PBR322质粒是基因工程最重要的人工质粒之一，它的大小约为（）kb,用于其组建的三个亲本质粒是（），（），和0。此质粒具有一个colEl 松弛型质粒复制子，两个筛选标记氨羊青霉素抗性基因利四环素抗性基因，其中colEl松弛型质粒复制子来源于0,氨羊青霉素抗性基因来源于。，四环素 抗性基因来源于（）参考答案：4.3； pM131； pSClOl； pSF2124； pM131； pSF2124； pSClOl填空题问题：pUC系列的质粒载体是由。和（）两种质粒构建而来的，其中氨茉青霉素抗性基因来自于。，多克隆位点MCS来自于0。 pUC系 列的质粒载体普通是成对存在的如pUC18和pUC19 ,其主要区别是0。参考答案：pBR322； Ml3mpi8/19； pBR322； M13mpl8/19； MCS 方向不同填空题问题：质粒载体的附加功能要素主要有。，（），。等。参考答案：。一互补；ssDNA phage origin, promotor填空题问题：A 噬菌体Genome的长度约为0 kb,其DNA份子为。（填单或者双）链。它的DNA份子既可以以。状存在也可以以环状存在，而 且可以自然成环，其原因是在A噬菌体的线性份子的两端各有一个长度为。个碱基的天然粘性末端，这种粘性末端可以自然成环，成环后的粘性末端就叫做（）。参考答案：50；双；线；12； cos位点填空题问题：A噬菌体在感染大肠杆菌以后，可以进入Lytic growth也可以进入Lysogenic state 。如果其基因组DNA通过专一性重组整合到宿主染色体中，则其进入。；它也可以选择进入。，大量复制并组装子代噬菌体颗粒。参考答案：Lysogenic state； Lytic growth填空题问题： 在 人噬菌体载体中，常用的选择标记有0, cl基因失活，和。等。参考答案：LacZ； spi筛选填空题问题： 改造后的A噬菌体才可用作载体，按照改造方式的不同可将其分为两种类型，即插入型载体（insertion vectors）和替代型载体（replacement vectors） 0其中 Insertion vectors 是指（）； Replacement vectors 是指（）参考答案：通过特定的随切位点允许外源DNA片断插入的载体；允许外源DNA片断替换载体的非必须DNA片断的载体填空题问题：A gtlO是一个由A噬菌体衍生而来的insertion vectors ,主要用于（）。它缺失了含有溶源整合的0 ； A gtll载体也是一种insertion vectors ,该载体的最大特点是在最左侧可替代区置换了 一段。基因，可编码B -半乳糖昔陶，在IPTG/X-gal平板上可形成。色噬菌 斑。参考答案：克隆小的cDNA； b257： lacZ；蓝填空题问题：A 噬菌体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，其总的DNA长度应该在噬菌体genome的。范围内。参考答案：78%105%填空题问题：Cosmid实际上是由（）和。构成的杂合载体，也可以说是带有（）序列的质粒。参考答案：COS位点；质粒；cos填空题问题：染色体步查指0。参考答案：采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA片段作为探针以鉴定含有相邻序列的重组克隆。填空题问题：Cosmid的组成包括三个部份：（），。和。，其中复制子来源于（），cos序列来源于（）。参考答案： 质粒复制起点；cos位点；抗性标记；质粒；噬菌体您的答案：填空题问题：A噬菌体的最大克隆片段是（）kb, Cosmid的最大克隆片段可达到0 kbo参考答案：23； 45填空题问题：利用A 噬菌体载体构建的gene library中，文库是以（）的形式存在的；用质粒载体构建的gene library是以（）的形式存在的； 粘粒载体构建的gene library是以0的形式存在的。参考答案：噬菌斑；菌落；菌落填空题问题：M13噬菌体颗粒是（）状的，其基因组为（）（填单或者双）链DNA 。它只感染0性大肠杆菌，感染宿主以后，其噬菌体颗粒的释放不像A 噬参考答案： 丝；单；雄；从感染的细胞中分泌出噬菌体颗粒填空题问题：M13噬菌体仅有两个大的基因间隔区，分别位于（）与（）之间以及（）和0之间，这些基因间隔区内含有（）的元件。其中，（）称为IG区， 它有三个最重要的功能即（），（）和（）。参考答案：III； II； IV；调节基因表达和DNA合成；GeneII和GenelV 之间的间隔区；含有可对包装及DNA在病毒颗粒中的定向进行调控的顺 式作用因子；正链与负链DNA合成起始和终止位点；不依赖与p 因子的转录终止信号填空题问题：RFDNA是指0。参考答案：复制型DNA ,感染性的单链噬菌体DNA（正链）在宿主酶的作用下转变成环状双链DNA ,用于DNA的复制。填空题问题：M13K07辅助噬菌体是（）的衍生株，它带有一个来自（）的复制起点，还带有一个来自（）的卡那霉素抗性基因，用作选择标记；基因II带 有一个。的突变，导致基因蛋白质第40位氨基酸由甲硫氨酸变为异亮氨酸。参考答案： M13 phage； pl5A； Tn903； G-T填空题问题： YAC 载体基本组成元件有（），0 , 0 ,（）和（）。参考答案：复制起点；着丝粒；端粒；MCS；筛选标记填空题问题： 表达载体（Express vector）是在常规载体的基础上衍生而来的，其构建的原理.主要是增加一个。，以及有利于表达产物的分泌、分离或者 纯化的元件；穿梭载体（Shuttle vector） 是指。参考答案：表达元件；能够在两类不同宿主中复制、增殖和选择的载体选择题问题：氨节青霉素的工作原理为0参考答案：A可以抑制细胞壁肽聚糖的合成点评：B、D为四环素的工作原理；C为氯霉素的工作原理选择题问题：PUC18与pUC19的区别在于。参考答案：B二者的多克隆位点方向相反点评：系列载体的区别普通不大，主要是克隆方向或者读码框等方面的差别。选择题问题：载体所具备的特点中，以下描述不恰当的是（）参考答案：D必须具有较高的拷贝数，便于制备点评：对于那些有剂量限制的基因克隆需要使用低拷贝的质粒载体选择题问题：复制子由三部份组成，以下不属于的为0参考答案：D 启动子点评：了解质粒的生物学性质。选择题问题：pBluescript M13载体在多克隆位点的两侧引入了 T7和T3两个噬菌体的启动子，这样增加了该载体的功能，以下4种功能哪一种是不正确的。参考答案：D利用这两个启动子进行定点突变点评：了解pBluescript Ml3载体的工作原理及特性。选择题问题：以粘粒为载体转染受体菌后，平板上生长的菌落会浮现大小不一、生长速度不一的现象，其原因是0参考答案：D重组体中插入片段的大小不同点评：插入片段本身的复制以及插入片段在宿主菌中的表达产物都会影响宿主的生长。选择题问题： 噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是0,而来自噬菌体的主要结构是。参考答案：A, A重组体中插入片段的大小不同点评：了解噬菌粒的生物学特性。选择题问题：野生型的Ml3有10个基因，分为三个功能基团，其中与复制有关的两个基因是（）参考答案：A 基因II ；基因IV点评：熟悉Ml3噬菌体的遗传学性质。选择题问题：M13单链噬菌体的复制分为三个阶段，以下哪一项不属于此0参考答案：D SS-SS点评：RFDNA特指M13单链噬菌体复制型双链DNA选择题问题：y 噬菌体DNA和Ml 3单链噬菌体DNA在成熟前的DNA复制类型为0参考答案：A 滚环复制模型点评：y 噬菌体DNA利M13单链噬菌体侵染宿主后，都是先0 复制模型，后转为滚环复制模型。选择题问题： 以下对PUC18的描述中，错误的为0参考答案：C可以在辅助质粒的匡助下合成单链DNA点评：pUC18没有IG区，不可能形成单链。选择题问题：以下对粘粒为载体的重组体的描述正确的是（）参考答案：B各重组体在平板上生长的速度不同，转化子中插入片段的扩增量也是不同的点评：理解粘粒载体的工作原理。选择题问题：下列哪种克隆载体对外源DNA的装载量最大0参考答案：B酵母人工染色体（YAC点评：人工染色体包括YAC、BAC、PAC等，其特点是可以装载大的（100kb以上）外源DNA片段。选择题问题： 同一种质粒DNA ,以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是（）参考答案：B SC DNA>L DNA>OC DNA点评：DNA份子结构越紧凑，泳动时受到的阻力越小，迁移速率越大。选择题问题：关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确0参考答案：A在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点点评：能够在两类不同的宿主中复制、增殖和选择的载体称为穿梭载体。选择题问题：反向重复序列：（）参考答案：C可以回折形成发夹结构点评：理解什么是反向重复序列。选择题问题：y 噬菌体线性DNA份子的两端各有一个0个碱基组成的天然黏性末端参考答案：B 12点评：y 噬菌体线性DNA份子的两端各有一个12个碱基组成的天然粘性末端，称为cos位点。选择题问题： 下列关于细菌人工染色体（BAC）的特点描述，除。以外都是正确的参考答案：B BAC载体在大肠杆菌中为高拷贝点评：细菌人工染色体。是基于大肠杆菌的F质粒构建的高通量低拷贝质粒载体。包括严谨型控制的复制区oriS 、启动DNA复制的由ATP驱动的解旋酶（RepE）,以及三个确保低拷贝并使质粒精确分配至子代细胞的基因座（parA , parB和parC）等元件。选择题问题：粘粒（cosmid）是一种人工建造的载体，下列对它的描述中哪一项是不正确的。参考答案：D进入受体细胞后，可引起溶源化反应点评：粘粒指带有将DNA包装到噬菌体颗粒中所需的cos序列的质粒。包括质粒复制起点，可以像质粒一样转化并增殖；包括cos位点，可以像噬菌体 颗粒一样包装、侵染。选择题问题：松弛型质粒：（）参考答案：A在寄主细胞中拷贝数较多点评：理解松弛型质粒的概念。选择题问题：关于质粒的不相容性，下列哪一种说法正确0参考答案：C如果两个质粒不相容，说明它们的复制机制相同点评：利用同一复制系统的两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第二个质粒导入后，在不涉及DNA限制系统时浮现的现象。选择题问题：普通情况下，质粒的存在情况以下描述正确的是0参考答案：A独立存在点评：质粒指细菌或者某些低等生物里面存在的独立于染色体外的双链闭合环状DNA份子（现在也发现有线状的），它时常携带一些不必需的遗传信息。选择题问题：转座子不包括下列哪个部份0参考答案：D 重复序列点评：理解转座子的概念。选择题问题：下列哪一项不是质粒载体必备的基本特征0参考答案：D 含lacZ点评：lacZ是一种筛选标记，能够使载体使用的更加方便，但不是载体的必需元件。选择题问题：质粒的消失和染色体的突变是不同的，表现在（）参考答案：A前者不能恢复，后者可以通过回复突变恢复该基因的性状点评：理解回复突变。选择题问题：以下的描述中，哪一项是正确的0参考答案：C如果细菌的某种表型特征在UV处理下丧失后再也不恢复，这种表型有可能是质粒赋予的点评：了解质粒的生物学性质及质粒载体的工作原理。选择题问题：线性质粒复制的引物来自于0参考答案：D自身末端的端粒序列点评：参照染色体的复制。选择题问题：下面关于松弛型质粒的性质描述中，（）是不正确的参考答案：A通常带有抗性标记点评：氯霉素可以增加质粒的复制，而不影响染色体的复制。选择题问题：ColEl是惟一用作遗传工程载体的自然质粒，以下对这种质粒描述不正确的是0参考答案：B具有四环素抗性点评：ColEl是自然质粒，没有四环素抗性基因，不能通过抗性筛选选择题问题：以下不是表达载体所必须的条件是0参考答案：C启动子不需要受控制点评：表达载体与克隆载体相比就是多了表达所必须的各种遗传元件。您做对了 0个简答题问题： 何为载体？ 一个理想的载体应具备那些特点？参考答案：将外源DNA或者目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）；必须具备合适的酶切位点，供外源DNA片段插入，同时不影响其复制；有一定的选择标记，用于筛选；其它：有一定的拷贝数，便于制备。简答题问题：含pMBl或者（ColEl）复制子的plasmid是如何复制的，其调节机制如何？参考答案： 复制方式：在复制时，首先合成前RNAH ,即前引物，并与DNA形成杂交体；而后Rnasell切割前RNAII ,使之成为成熟的RNAI1 , 并形成三叶草二级结构。该引物引导质粒的复制。调节机制：形成的RNAI 可控制RNAII形成二级结构，同时Rop增强RNA I的作用，从而控制质 粒的拷贝数。削弱RNAI 和RNAII之间相互作用的突变，将增加带有pMBl或者（ColEl）复制子的拷贝数。简答题问题：当向细菌培养基中加入氯霉素时，可以使细菌质粒的拷贝数得到扩增，试分析其原理？参考答案：pMBl质粒的复制并不需要质粒编码的功能蛋白，而是彻底依靠宿主提供的半衰期较长的酶（DNA聚合酶I, DNA聚合酶III）,依赖于 DNA的RNA聚合酶，以及宿主基因dnaB 、dnaC 、dnaD和danZ的产物。因此，即使存在抑制蛋白质合成并阻断细菌染色体复制的氯霉素或者 壮观霉素等抗生素时，带有pMBl （或者ColEl）复制子的质粒将继续复制，最后每一个细胞中可积聚23千个质粒。简答题问题：抗性基因（Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？参考答案： 氨节青霉素抗性基因（ampr）、四环素抗性基因（tetr）、氯霉素抗性基因（Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（kanr , neor）以及虎魄突变 抑制基因supF o背霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。Ampr编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化p- 内酰胺环水解，从而解除氨苇青霉素的毒性。四环素与核糖体30S亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。 Tetr编码一个由399个氨基酸组 成的膜结合蛋白，可阻挠四环素进入细胞。简答题问题： 何为 。-complement ?如何利用 a -complement来筛选插入了外源DNA的重组质粒？参考答案：a -complementation指lacZ基因上缺失近控制基因区段的突变体与带有完整的近控制基因区段的B -半乳糖甘酶阴性的突变体之间实现互 补。-complemenlalion是基于在两个不同的缺陷p 半乳糖甘酶之间可实现功能互补而建立的。实现a-comp 1 emenI主要有两部份组成： LacZAM15 ,放在F质粒或者染色体上，随宿主传代； LacZ',放在载体上，作为筛选标记，当在LacZ'中插入一个片断后，将不可避免地导 致产生无。-complement能力的0 一半乳糖甘酶片断。在诱导物IPTG和底物X-gal （同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有 活性的 B 一半乳糖甘酶，不能分解X-gal ,呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。简答题问题：为什么野生型的A 噬菌体DNA不宜作为基因工程载体？参考答案： 野生型噬菌体DNA没有容载能力，因为噬菌体的头部对DNA包装的量是有限制的，不能大于基因组的105%,所以要将A 噬菌体改造 成载体，必须削减份子量；野生型的A 噬菌体对于一些常用的酶都有多个识别和切割位点，不便于克隆；没有可供选择的标记；野生型的A 噬菌 体具有感染性，因此不够安全。简答题问题：试简述A 噬菌体的Lytic growth和Lysogenic state两种循环的分化及其调节过程？参考答案：Lytic growth是A 噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代A 噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂解。 Lysogenic state为A 噬菌体 基因组DNA通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程： 由感染复数和细胞的营养状态决定的，感染复数越高， 营养状态越差，则溶源化的频率就越高。溶源现象的生化媒介可能是3'5' cAMP,它在细胞内的浓度会随营养条件的变化而改变，当细胞在富营养培养基中 生长时，cAMP的浓度较低，有利于裂解生长；在缺乏cAMP的突变细胞中，更有利于裂解生长此外一个重要的调节因素是噬菌体的CII蛋白，它是噬菌体 基因转录的激活子，抑制裂解功能基因的表达，催化噬菌体DNA整合到细菌的染色体中去。高浓度的CII蛋白促进溶源化，而低浓度的CII蛋白促进裂 解生长。当CII蛋白浓度足够时，激活CI蛋白和基因int的表达，导致噬菌体DNA与染色体整合，朝着溶源态生长。您的答案：简答题问题：用A 噬菌体载体进行gene cloning时，主要利用A 噬菌体的生物学特性作选择标记，其中有cl失活和Spi筛选，请问什么 叫cl筛选？什么叫Spi筛选？参考答案：CI蛋白控制溶源态的形成，裂解生长受到抑制，当外源基因片段插入cl中， c I蛋白失活，溶源态打破而进入裂解生长而筛选出重组 克隆，叫做cl筛选。野生型噬菌体在带有P2原噬菌体的溶源性E.coli中的生长会受到限制的表型，称作Spi+ ，即对P2噬菌体的干扰敏感 （sensitive to P2 interference ）。如果 A噬菌体缺少两个参预重组的基因red和 gam ,同时带有 chi位点，并且宿主菌为rec+ ,则可以在P2溶源性E. coli中生长良好，噬菌体的这种表型称作Spi-。因此，通过A 噬菌体载体DNA上的red和/或者gam基因的缺失 或者 替换，可在P2噬菌体溶源性细菌中鉴别重组和非重组A 噬菌体。简答题问题：简述A 噬菌体载体的克隆原理及普通步骤？参考答案：A 噬菌体载体属于克隆载体，主要用于克隆DNA片断。工作原理： A 噬菌体载体克隆外源DNA片断