《生物化学》实验讲义.docx

试验一 蛋白质及氨基酸的颜色反响一、目的意义1、学习几种鉴定氨基酸与蛋白质的一般方法及其原理。2、学习和了解一些鉴定蛋白质的特别颜色反响及其原理。二、试验原理1、双缩脲反响当尿素加热到 180左右时，2 分子尿素发生缩合放出 1 分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成简单的紫红色化合物，这一呈色反响称为双缩脲反响。蛋白质分子中含有多个与双缩脲相像的键，因此也具有双缩脲的颜色反响。借此可以鉴定蛋白质的存在或测定其含量。应当指出，双缩脲反响并非蛋白质的特异颜色反响，由于凡含有肽键的物质并不都是蛋白质。2、茚三酮反响蛋白质与茚三酮共热，产生蓝紫色化合物，此反响为一切蛋白质及-氨基酸除脯氨酸和羟脯氨酸所共有。含有氨基酸的其他化合物也呈此反响。该反响格外灵敏，1:1500000 浓度的氨基酸水溶液就能呈现反响。因此，此反响广泛用于氨基酸的定量测定。3、黄色反响含有苯环侧链的特别是含酪氨酸蛋白质溶液与硝酸共热时，呈黄色硝基化合物，再加碱则变为橙黄色，此反响也称为黄蛋白反响。OH +HNOHONO+ H O322OHHO NO2+NaOH 1O N OH三、仪器与试剂1、试剂(1) 蛋白质溶液：取10mL 鸡蛋清，用蒸馏水稀释至100mL，搅拌均匀后用纱布过滤得上清液。(2) 0.3%色氨酸溶液、0.3%酪氨酸溶液、0.3%脯氨酸溶液、0.5%甘氨酸溶液、0.5%苯酚溶液。(3) 0.1茚三酮乙醇溶液：称取 0.1g 茚三酮，溶于 100mL 95乙醇。(4) 10NaOH 溶液、1硫酸铜溶液、尿素、浓硝酸。2、仪器：试管及试管夹、酒精灯。四、操作方法1、双缩脲反响(1) 取一支枯燥试管，参加少量尿素，用微火加热使之熔化，待熔化的尿素开头变硬时停顿加热。此时，尿素已缩合为双缩脲并放出氨气可由气味区分。待试管冷却，参加约 1mL10 NaOH 溶液，振荡使其溶解，再参加1 滴 1硫酸铜溶液。混匀后观看消灭的粉红色。(2) 另取 1 支试管，参加 1mL 蛋白质溶液，再参加 2mL 10NaOH 溶液摇匀，然后再参加 2滴 1的硫酸铜溶液。摇匀观看其颜色变化。(3) 留意事项参加的硫酸铜不行过量，否则会产生蓝色的氢氧化铜，从而掩盖了双缩脲反响的粉红色。(4) 记载上述试验过程和结果，并解释现象。2、茚三酮反响(1) 取 3 支试管，分别参加蛋白质溶液、0.3%脯氨酸溶液、0.5%甘氨酸溶液各 1mL，再加 0.5mL 0.1茚三酮乙醇溶液，混匀后在小火上加热煮沸12min，放置冷却，观看颜色变化。(2) 在滤纸的不同部位分别滴上一滴 0.3%脯氨酸溶液、0.5%甘氨酸溶液，风干后再在原处滴一滴 0.1茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观看斑点消灭及其颜色。(3) 记载上述试验过程和结果，并解释现象。3、黄色反响向 6 个试管中按下表加试剂，观看现象并记录。管 号123456材 料蛋白质溶液指甲头发0.5%苯酚0.3%色氨酸0.3%酪氨酸参加量滴4少许少许444浓硝酸滴2202044酒精灯加热煮沸4现象逐滴加 10%NaOH 后现象10试验二 蛋白质的沉淀反响蛋白质是亲水胶体，当其稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶性盐类后，即自溶液中沉淀析出浑浊现象，此现象叫蛋白质的沉淀反响。一蛋白质的盐析作用一、目的意义了解盐析法及可逆沉淀的原理，学习用盐析法沉淀分别蛋白质。二、试验原理盐析现象是指般蛋白质在高浓度盐溶液中溶解度下降，故向其溶液中参加中性盐至肯定浓度时，蛋白质即自溶液中沉淀析出。盐析作用与两种因素有关：蛋白质分子被浓盐脱水；分子所带电荷被中和。盐溶现象为低盐浓度可使蛋白质的溶解度增加，试验时要加足够量的盐。蛋白质的盐析作用是可逆过程，用盐析方法沉淀蛋白质时，较少引起蛋白质变性，经透析或用水稀释时又可溶解。三、仪器与试剂1、试剂 蛋白质溶液：取 10mL 鸡蛋清，用蒸馏水稀释至 100mL，搅拌均匀后用纱布过滤得上清液。 饱和硫酸铵溶液； 10%氢氧化钠溶液； 1%硫酸铜溶液。四、操作方法1、取蛋白质溶液约 2mL 于试管中，参加过量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置 3 分钟则析出沉淀。二重金属盐类沉淀蛋白质一、目的意义了解重金属盐类沉淀法的原理，学习用重金属盐类沉淀法沉淀分别蛋白质。二、试验原理溶液 pH 在蛋白质等电点以上时，重金属盐类如Pb2+、Cu2+、Hg2+及 Ag+等易与蛋白质结合成不溶性盐而沉淀。重金属盐类沉淀蛋白质通常比较完全，故常用重金属盐除去液体中的蛋白质。但应留意， 在使用某些重金属盐如硫酸铜或醋酸铅沉淀蛋白质时，不行过量，否则将引起沉淀再溶 解，此时的溶解为生成憎水胶体的原因。三、仪器与试剂1、试剂 蛋白质溶液与双缩脲反响一样； 5% CuSO4 3%AgNO3溶液； 溶液。四、操作方法1、取试管 2 支各加蛋白质溶液 1mL。2、向各管分别滴加 23 滴加 5CuSO4溶液、3AgNO3溶液，观看各管所生成的沉淀。3、在硫酸铜产生蛋白质沉淀的试管中，倒掉大局部沉淀，留少量沉淀，连续参加 5CuSO4溶液，观看沉淀的溶解。三有机酸沉淀蛋白质一、目的意义了解有机酸沉淀法的原理，学习用有机酸沉淀法沉淀分别蛋白质。二、试验原理生物碱是植物中具有显著生理作用的一类含氮的碱性物质。凡能使生物碱沉淀，或能与 生物碱作用产生颜色反响的物质，称为生物碱试剂。如鞣酸、苦味酸和磷钨酸等。当蛋白质 溶液 pH 值低于其等电点时，蛋白质为阳离子，能与生物碱试剂的阴离子结合成不溶性盐而沉淀。溶液中的蛋白亦能被有机酸沉淀，其中以三氯醋酸的作用最为灵敏而且特异，因此广泛 地被用于沉淀蛋白质，为首选沉淀剂，只能沉淀蛋白质，不能沉淀其水解产物，加热可除去。三、仪器与试剂1、试剂 蛋白质溶液与双缩脲反响一样； 5%三氯醋酸溶液； 5% 单宁酸溶液。四、操作方法1、取蛋白质溶液 1mL 于试管中，加数滴三氯醋酸溶液，观看现象。2、取蛋白质溶液 1mL 于试管中，加数滴单宁酸溶液，观看现象。试验三 氨基酸的纸层析一、目的意义1、了解并把握氨基酸纸层析的原理和方法。2、学习纸层析的操作技术，分别鉴定未知样品的氨基酸成分。二、试验原理纸层析法属于安排层析法的一种，是以滤纸作为惰性支持物。滤纸纤维上分布大量的亲 水性羟基，因此能吸附水作为固定相，通常把有机溶剂作为流淌相。将样品在滤纸上此点 称为原点，用有机溶剂进展展层时，样品中的各种溶质即在两相溶剂中不断进展安排。由于各种溶质在两相溶剂中的安排系数不同，因而不同溶质随流淌相移动的速率不等，于是从点 样的一端向另一端开放时，样品中不同溶质被分别开来，形成距原点距离不等的层析点。样 品被分别后在纸层析图谱上的位置，是用比移值Rf 来表示的在肯定条件下如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变，某物质的 Rf 值是一个常数，借此可作定性分析依据。三、仪器与试剂1、试剂(1) 氨基酸标准溶液：1%的甘氨酸、脯氨酸。(2) 混合氨基酸溶液：将 1%的甘氨酸、脯氨酸也按 1%浓度制成混合溶液。(3) 展层剂：将20 毫升的正丁醇和 5 毫升的冰醋酸放入分液漏斗中，与15 毫升水混合，充分振荡，静止后分层，放出下层水层后备用。(4) 显色剂：0.1%茚三酮正丁醇溶液。2、仪器层析缸12*12CM 规格，垂直型、层析滤纸华一号滤纸，事先裁成11*11CM 规格、电吹风学生自带，每组一个、三角板、铅笔和干纸巾学生自带，每组一套、毛细管。四、操作方法1、预备滤纸：三个点，每隔2CM 画一个“+”，用铅笔连起描成一条直线。每个“+”点距离滤纸底端 2CM。2、点样：每个样品用毛细管点 3 次，每次点完后用电吹风吹干。一个样品用一支毛细管。3、饱和平衡：在缸底部玻璃突起的一侧参加 10-15ml 展层剂，另一侧先不加；让滤纸都放先放到未加展层剂的枯燥一侧，然后盖上盖子平衡饱和20 分钟。可写试验报告，简洁讲课 4、开头层析：略微拿出滤纸，再在枯燥的一侧也参加 10-15ml 展层剂，然后让滤纸分别在该侧开头层析。5、完毕层析：等到展层剂上升到距离滤纸上端3cm 左右，就拿出滤纸，用铅笔划线描出液体的上边界，然后用电吹风吹干。6、茚三酮显色：把滤纸放在桌面上，整张纸用滴管滴加满茚三酮溶液，再用热风吹干，直到有结果消灭。7、计算RF 值：用铅笔描出每个氨基酸的区域，测量距离计算甘氨酸和脯氨酸的Rf 值。每个组需将该滤纸夹在组长的试验报告中，并注明是第几组五、结果计算1、用铅笔将层析结果轮廓和中心点描出来，计算各种氨基酸的Rf 值。2、分析混合样品中未知氨基酸的组分。六、作业题1、假设开放剂高于点样线，对最终的层析结果有何影响？2、点样时，样品浓度太高或斑点之间间距过小，对最终的层析结果有何影响？试验四 牛奶中酪蛋白的制备一、目的意义1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。2、把握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。二、试验原理牛的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100mL。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混 合物，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的 pH 调至 4.7 时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。三、仪器与试剂1、试剂(1) 95%乙醇；(2) 无水乙醚；(3) 0.2mol/L pH4.7 醋酸醋酸钠缓冲液：先配A 液与B 液，A 液：0.2mol/L 醋酸钠溶液，称NaAC·3H2O 54.44g，定容至 2023mL；B 液：0.2mol/L 醋酸溶液，称纯醋酸含量大于 99.8%12.0g 定容至 1000mL； 取 A 液 1770mL，B 液 1230mL 混合即得pH4.7 的醋酸醋酸钠缓冲液 3000mL。(4) 乙醇乙醚混合液：乙醇:乙醚=1:1V/V。(5) 10%醋酸溶液2、仪器：颖牛奶；台式离心机、抽滤装置、周密pH 试纸、恒温水浴锅、烧杯、温度计、50ml 大离心管。四、操作方法1、酪蛋白的粗提20mL 牛奶加热至 40，在搅拌下渐渐参加预热至 40试验前水浴锅提前预热到 43、 pH4.7 的醋酸缓冲液 20mL，比照周密pH 试纸用 10%醋酸溶液调pH 至 4.7肉眼可见絮状物质假设牛奶与缓冲液混合后，絮状沉淀消灭不充分，需要参加较多的醋酸溶液，否则离心后没 有分层。将上述悬浮液冷却至室温。离心 10 分钟3000r/min。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 2、酪蛋白的纯化(1) 参加 40ml 蒸馏水搅拌洗涤沉淀，直接抽滤事先检查真空泵是否已加满水。(2) 在沉淀中参加 30mL 乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤留意不要沾壁。用乙醇乙醚混合液洗沉淀1 次不要更换滤纸，最终用乙醚洗沉淀 1 次，抽干。(3) 将沉淀摊开在枯燥滤纸上，电炉上烘干，得酪蛋白纯品。(4) 准确称重，计算含量和得率。五、结果计算X m100V式中：X酪蛋白含量，g/100 mL 牛乳； V量取牛奶的体积，mL； m收获酪蛋白的质量，g。六、留意事项1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调整牛奶液的等电点肯定要准确。最好用酸度计测定。2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，最好在通风橱内操作。3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不是纯洁牛奶，所以计算时应按产品的相应指标计算。七、作业题1、试验中，分别参加乙醇、乙醚洗涤沉淀的作用是什么？2、试验中，你觉得影响最终酪蛋白纯度和得率的因素可能会有哪些？请简洁分析试验五 酵母 RNA 的提取一、目的意义把握稀碱法提取RNA 的原理和方法，学会抽滤操作。二、试验原理酵母细胞富含核酸，且核酸主要是 RNA，含量为干菌体的 2.67%10.0%，而 DNA 含量较少，仅为 0.03%0.516%。为此提取RNA 多以酵母为原料。工业上制备RNA 多项选择用低本钱、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法。这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制 备单核苷酸的原料，其工艺比较简洁。稀碱法是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA 或调pH2.5 利用等电点沉淀。提取的RNA 有不同程度的降解。浓盐法是用高浓度盐溶液处理，同时加热，以转变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。三、仪器与试剂1、试剂 0.2%氢氧化钠溶液； 酸性乙醇溶液：30mL 乙醇加 0.3mL HCl； 95%乙醇； 乙醚；2、仪器：酵母粉、量筒、抽滤瓶、布氏漏斗、台式离心机、天公平。四、操作方法1、研磨：称取 3g 干酵母粉于研钵中假设是 10 个组，称取 30 克，大研钵中磨，再分装给各个组，参加30mL 10 个组，是 300 mL0.2%NaOH 溶液中，参加少量石英砂，研磨均匀 10min。2、沸水提取：将酵母匀浆转入100mL 小烧杯中沸水浴提前翻开水浴锅，加热到95 度 加热 20 分钟，不断搅拌。冷却后移到离心管，4000r/min 离心 10 分钟后，沉淀弃去，将上清液移到小烧杯中，渐渐倾入 20mL 酸性乙醇，边加边搅。静置 10min。3、离心：待RNA 完全沉淀，移到离心管，4000r/min 离心 5 分钟。4、洗涤、抽滤：弃去上清液，参加30ml 95%乙醇洗涤沉淀并搅拌后，转移至布氏漏斗抽滤，继而再用 20ml 无水乙醚洗涤，洗涤时可用细玻璃棒留神搅动沉淀。沉淀在空气中枯燥。5、称重计算：称量所得RNA 粗品的重量。五、结果计算X m100V式中：XRNA 粗品含量，g/100g 酵母；V酵母的质量，g；m收获 RNA粗品的质量，g。六、作业题1、RNA 的含量测定还有其它方法吗？试举例简洁说明2、沸水浴的作用是什么？试验六 糖的呈色反响和定性鉴定一Fehling 试验一、目的意义了解鉴定复原糖的方法及其原理。二、试验原理费林试剂是含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。硫酸铜与碱溶液混合加热，则生成黑色的氧化铜沉淀。假设同时有复原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。为了防止铜离子和碱反响生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，Fehling 试剂中参加酒石酸钾钠，它与 Cu2形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子，该反响是可逆的。平衡后溶液内保持肯定浓度的氢氧化铜。费林试剂是一种弱的氧化剂，它不与酮和芳香醛发生反响。 三、仪器与试剂1、试剂甲：称取 34.5g 硫酸铜溶于 500mL 蒸馏水中。2、试剂乙：称取 125g NaOH 137g 酒石酸钾钠溶于 500mL 蒸馏水中，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。临用前，将试剂甲和试剂乙等量混合成Fehling 试剂。3、1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液先配好。四、操作方法取试管，编号，各参加Fehling 试剂 1mL。摇匀后，分别参加4 滴待测糖溶液，置沸水浴中加热 23min，取出冷却，观看沉淀和颜色变化。二Benedict 试验班氏试验一、目的意义了解鉴定复原糖的方法及其原理。二、试验原理Benedict 试剂是 Fehling 试剂的改进。Benedict 试剂利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂，其碱性较 Fehling 试剂弱，灵敏度高，干扰因素少。三、仪器与试剂1、Benedict 试剂班氏试剂：将 170g 柠檬酸钠和 100g 无水碳酸钠溶于 800mL 水中；另将17g 硫酸铜溶于 100mL 热水中。将硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠碳酸钠溶液中，边加边搅，最终定容至 1000mL。该试剂可长期使用。2、1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。四、操作方法取试管，编号，分别参加 2mL Benedict 试剂和 4 滴待测糖溶液，沸水浴中加热 5 分钟， 取出后冷却，观看各管中的颜色变化。五、作业题：1、除这两个试验方法外，还有其它何种方法鉴别复原糖和非复原糖？请简述试验七 淀粉的提取和性质试验一、目的意义1、生疏淀粉与碘的呈色反响。2、了解淀粉的提取方法和水解条件及产物。二、试验原理1、淀粉的提取淀粉是一种重要的多糖，是一种相对分子量很大的自然高分子化合物，广泛分布于植物 界，谷类、果实、种子、块茎中含量丰富。工业用的淀粉主要从玉米、甘薯、马铃薯中制取。淀粉是一种白色粉末，不溶于冷水，在热水里淀粉颗粒会膨胀，有一局部淀粉溶解在水里， 另一局部悬浮在水里，形成胶状淀粉糊。2、淀粉与碘的显色反响直链淀粉遇碘呈蓝色，支链淀粉遇碘呈紫红色，糊精遇碘呈蓝紫、紫、橙等颜色。这些 显色反响的灵敏度很高，可用作鉴别淀粉的定量和定性的方法，也可用它来分析碘的含量。 淀粉和碘的显色反响除了吸附缘由外，主要是由于生成包合物的原因。直链淀粉是由 -葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体，每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外。碘分子跟这些羟基作用，使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。碘跟淀粉的这种作用叫做包合作用，生成物叫做包合物。淀粉跟碘生成的包合物的颜色，跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。在肯定的聚合度 或相对分子质量范围内，随聚合度或相对分子质量的增加，包合物的颜色的变化由无色、橙 色、淡红、紫色到蓝色。例如，直链淀粉的聚合度是200980 或相对分子质量范围是 32 000160 000 时，包合物的颜色是蓝色。分支很多的支链淀粉，在支链上的直链平均聚合度 2028，这样形成的包合物是紫色的。糊精的聚合度更低，显棕红色、红色、淡红色等。表 21 淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色葡萄糖单位的聚合度3.87.412.918.320.229.334.7 以上包合物的颜色无色淡红红棕红紫色蓝紫色蓝色淀粉跟碘生成的包合物不稳定，易被乙醇、氢氧化钠和热等作用，使颜色褪去，而只在pH = 4 时最稳定，所以它的显色反响在微酸性溶液里最明显。3、淀粉的水解淀粉进入人体后，一局部淀粉受唾液中淀粉酶的催化作用，发生水解反响，生成麦芽糖； 余下的淀粉在小肠里胰脏分泌出的淀粉酶的作用下，连续进展水解，生成麦芽糖。麦芽糖在肠液中麦芽糖酶催化下，水解为人体可吸取的葡萄糖，供人体组织的养分需要。反响过程为：C HO m(C HO )nCHOC HO612561051222116126三、仪器与试剂1、试剂淀粉糊精麦芽糖葡萄糖(1) 乙醇、0.1淀粉液1mL1%淀粉溶液加 5 mL 蒸馏水、10NaOH 溶液、20H SO 溶24液、10Na CO 溶液。23(2) 2%碘液：将碘化钾 20g 及碘 10g 溶于 100mL 水中。使用前稀释 10 倍。(3) 班氏Benedict试剂：见糖的呈色反响试验。2、仪器：生马铃薯、组织捣碎机、纱布、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、试管夹、量筒、烧杯、白瓷板、试管。四、操作方法1、淀粉的提取演示，试验不再做生马铃薯去皮，切碎，称取 50g，加少量水，捣碎匀浆，用四层纱布过滤，除去粗颗粒， 滤液中淀粉很快沉淀，然后用水屡次洗涤淀粉，再抽滤后滤饼放在外表上风干即可。2、淀粉与碘的反响(1) 取少量自制淀粉于白瓷板孔内，加碘液两滴，观看颜色。(2) 取试管一支，参加 0.1的淀粉液 6mL，碘液两滴，摇匀，观看颜色变化。另取试管两支，将前述淀粉液均分为三等份并编号做如下试验：1 号管在酒精灯上加热，观看颜色变化。然后冷却，又观看颜色变化。2 号管参加 10NaOH 溶液几滴，观看颜色变化3 号管参加乙醇 4mL，观看颜色变化。记载上述试验过程和结果，并解释现象。3、淀粉的水解(1) 在试管 1 中参加少量淀粉和 4mL 水，在试管 2 中参加 0.5g 淀粉和 4mL 20%的硫酸溶液。分别加热试管煮沸 34min。(2) 把试管 2 中的一局部溶液倒入试管 3 中，留作下一步试验用。(3) 向试管 1 和试管 2 中参加几滴碘溶液，观看现象。(4) 向试管 3 中滴入 20% Na 2CO3 溶液，中和溶液中的硫酸，把溶液调呈弱碱性，使溶液的 pH 值约为 910直到 CO2 气泡冒完为止。再参加 2mL 班氏试剂，加热煮沸后观看现象。记载上述试验过程和结果，并解释现象。六、作业题：1、在加热的过程中，为什么碘与淀粉会呈现不同的颜色反响？试验八 油脂氧化酸败的定性检验及定量测定一、目的意义1、进一步把握油脂氧化酸败的机理。2、学会油脂氧化酸败的定性检验及酸值测定的操作技术。二、试验原理油脂氧化酸败的过程是极简单的化学变化过程，对食品质量影响很大。酸败的油脂中某些分解产物对人体有害，例如环氧丙醛。过氧化物是油脂自动氧化的主要初级产物，过氧化物可进一步分解，生成低级的醛、酮和羧酸，通过油脂中过氧化物、醛类的检出，可定性推断油脂是否已发生酸败。环氧丙醛在酸败的油脂中不呈游离状态，而是成为缩醛。在盐酸作用下，环氧丙醛渐渐 释出，释出的游离环氧丙醛与间苯三酚发生缩合反响，生成红色的分散物环氧丙醛-间苯三酚分散物，由红色分散物的生成可推断油脂已发生酸败。酸值是评定油品酸败程度的指标之一，它是指中和1g 油脂中游离脂肪酸所消耗的氢氧化钾的质量(mg)。油脂中游离的脂肪酸与氢氧化钾发生中和反响，从氢氧化钾标准溶液消耗量计算出油脂的酸值。反响如下：RCOOHKOH RCOOKH2O三、仪器与试剂1、试剂 0.1间苯三酚乙醚溶液； 浓盐酸； 中性乙醚乙醇混合液(体积比为 21)，临用前用 0.1 mol/L 氢氧化钾溶液中和至酚酞指示剂呈中性； 酚酞指示剂：1乙醇溶液； 0.1000mol/L 氢氧化钾标准溶液； 花生油(颖与不颖样品各 1 种)。2、仪器：恒温水浴、锥形瓶、试管及试管架、量筒、25mL 比色管、滴定管、容量瓶。四、操作方法 油脂氧化酸败的定性检验1、间苯三酚乙醚溶液法克莱斯氏环氧丙醛反响取试样 2mL 于试管中，参加浓盐酸 2mL，用橡皮塞塞好管口，猛烈振荡10s 左右，再加0.1间苯三酚乙醚溶液 2mL,加塞猛烈振荡 10s 左右，使酸层分别。观看下层溶液颜色。结果表示：下层呈桃红色或红色表示油脂已酸败，下层呈浅粉红色或黄色表示未酸败。 油脂酸值的测定周密称取 3g 试样置于锥形瓶中，参加 30mL 中性乙醚乙醇混合液，摇匀使油脂溶解必要时可置热水中，温热使其溶解，冷至室温。参加酚酞指示剂23 滴，用0.1mol/L 氢氧化钾标准溶液滴定至初现微红色，且 30 秒内不褪色为终点。登记消耗0.1mol/L 氢氧化钾溶液的用量。五、结果计算V ´ C ´ 56.11X =m式中：X试样的酸值以氢氧化钾计，mg/g； V试样消耗氢氧化钾标准溶液体积，mL； C氢氧化钾标准溶液实际浓度，mol/L； m试样质量，g；56.11与 1.0mL 氢氧化钾标准溶液相当的氢氧化钾毫克数。六、留意事项1、间苯三酚乙醚法试验、酸值测定，切忌明火。2、酸值测定中，如油样色泽深，可削减试样用量或适当增加混合溶剂的用量；如因色深推断终点困难，可改换指示剂，用碱性蓝6B、百里酚酞做指示剂或用酚酞试纸作外指示。3、测定蓖蔴油酸度时，只用中性乙醇而不用混合溶剂。4、光线会促进空气对试剂的氧化，应留意避光存放试剂；试验九 维生素 C 的定量测定一、目的意义把握 2，6二氯靛酚法测定维生素C 的原理和方法。二、试验原理维生素C 又称抗坏血酸，复原型抗坏血酸能复原染料2，6二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6二氯靛酚钠离子呈红色，被复原后变为无色。三、仪器与试剂1、试剂(1) 2%草酸溶液；(2) 0.001N 2，6二氯靛酚钠溶液：称取碳酸氢钠52mg 溶解在 200mL 热蒸馏水中，然后称取2，6二氯靛酚 50mg 溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至250mL，过滤至棕色瓶内， 保存在冰箱中。每次使用前，用标准抗坏血酸标定其滴定度。2、仪器：匀浆机、小锥形瓶、酸式滴定管、研钵、容量瓶、移液管、小离心管等。四、操作方法1、样液的制备及滴定称取 100g 青椒匀浆，取x/8，x 代表匀浆体积数，约为 50；8 代表组数mL 青椒匀浆液移入 50mL 容量瓶中，用 2%草酸溶液定容摇匀。每次量取 20mL 提取液放入锥形瓶内，用 2， 6二氯酚靛酚钠溶液进展滴定呈现淡粉红色，并在1530 秒内不褪色，滴定过程必需快速， 不要超过 2 分钟。平行试验进展 2 次，记录消耗 2，6二氯酚靛酚钠溶液的用量。2、滴定滴定管装入，滴定至提取液，另取 10mL 2%草酸按上法作空白比照试验，记录消耗2，6二氯酚靛酚钠溶液的用量。五、结果计算M=(VA-VB) ×C×0.088×100/D×W式中：M100g 样品中含抗坏血酸的质量，mg；VA滴定样品管时所用去染料体积数，mL； VB滴定时空白管时所用去染料体积数，mL； C提取液总毫升数，mL；D滴定时所取的样品的提取液毫升数，mL； W被检样品的重量，g；0.0880.001N 2，6二氯酚靛酚钠溶液 1mL 相当于 0.088mgVC。试验十 酶的特性试验一、目的意义1、加深对酶所具有特性的生疏。2、了解淀粉酶、过氧化物酶的作用二、试验原理淀粉和蔗糖缺乏自由醛基，故无复原性。在淀粉酶的作用下，淀粉很简洁水解生成麦芽糖。麦芽糖是复原性糖，可使班氏试剂中二价铜离子复原成一价亚铜，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。但淀粉酶不能催化蔗糖水解生成具有复原性的葡萄糖或果糖，而蔗糖本身不具有复原性，故不能与班氏试剂产生砖红色沉淀。过氧化物酶能催化过氧化物释放出生氧以氧化某些酚类和胺类物质，例如可氧化溶于水中的焦性没食子酸生成不溶于水的焦性没食子橙橙红色。三、仪器与试剂1、试剂(1) 1%蔗糖溶液；(2) 1%淀粉溶液需颖配制：称取可溶性淀粉1g，加 5mL 蒸馏水，调成糊状，再参加80以上蒸馏水使其溶解，最终定容至 100mL。(3) 唾液淀粉酶溶液：用水漱口两次可安排一个学生用矿泉水请洗涤口腔，取得，口腔含水做咀嚼运动，促进唾液分泌，收集后用两层纱布过滤，取滤液 5mL 用蒸馏水稀释 10 倍， 混匀备用；(4) 煮沸淀粉酶溶液：取 10mL 淀粉酶溶液，在沸水中煮沸 20 分钟使淀粉酶变性失活。(5) 班氏Benedict试剂；缓冲液0.2mol/L 磷酸氢二钠mL0.1mol/L 柠檬酸mLpH6.87.722.28(6) 缓冲液A 0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液：称取 35.62g 磷酸氢二钠溶于 1000mL 蒸馏水中； 缓冲液B 0.1mol/L 柠檬酸溶液：称取 19.21g 无水柠檬酸溶于 1000mL 蒸馏水中；(7) 1%焦性没食子酸水溶液：称取 1g 焦性没食子酸，用少量蒸馏水溶解，然后定容至 100mL。(8) 2%过氧化氢溶液。(9) 白菜梗提取液：称取白菜梗约 5g，切成细块，置于研钵中加蒸馏水约15mL，研磨成浆， 经纱布过滤后滤液备用。2、仪器试管及试管架、滴管、水浴锅、天平、试管、漏斗、滴管、剪刀等。四、操作方法1、淀粉酶的专一性取 3 支试管编号，按下表操作。管号pH6.8 缓冲液滴1%淀粉溶液滴1%蔗糖溶液滴唾液淀粉酶溶液滴煮沸淀粉酶溶液滴12010050220100053200250混匀后置于 37水浴保温 10 分钟，然后向各管中参加班氏试剂 20 滴，放入沸水中煮沸， 观看并分析结果。2、过氧化物酶作用试验取 4 支试管编号，按下表操作。管号1%焦性没食子酸mL2%过氧化氢溶液mL蒸馏水mL白菜梗提取液mL煮沸的白菜梗提取液mL122200220020322020422002摇匀后观看并记录各管颜色变化。五、留意事项1、 操作过程中严格防止试剂污染。2、 严格依据挨次加试剂。