Agilent1260液相色谱仪器操作规程.docx

Agilent1260 液相色谱仪器操作规程一.生产厂家：美国 Agilent 二.到货日期：2023 年 1 月三.附件：电脑、打印机四.使用范围：用于三聚氰胺，维生素 A、D、E,-胡萝卜素，牛磺酸，山梨酸、苯甲酸，乳糖、蔗糖等的检测五.工作环境：温度 1530，湿度 20%80% 六.操作步骤:1. 开机前预备：1.1. 翻开仪器室的空调。1.2. 配制流淌相按国标,预备好蒸馏水、乙腈和甲醇。2. 开机：2.1. 翻开 1260 液相色谱仪器的进样器、泵、柱温箱和检测器的电源。2.2. 翻开计算机。2.3. 翻开“仪器 1 联机”图标，各模块完成自检。2.4. 点击“翻开”图标，进入化学工作站。3. 设置运行模块和方法3.1. 进样器自动进样器3.1.1. 设置进样量，在“进样器”的模块中，点击鼠标右键，在“方法” 中，依据国标，检测不同物质，设定不同的进样量。反相：最大进样量 为 100ul，抽取速度一般设定 200ul/min。正相：最大进样量为 500ul，抽取速度一般设定 200500ul/min。3.1.2. 设置进样器停顿时间，在“进样器”的模块中，点击鼠标右键，在“方法”中，如标样的出峰时间为 7 分钟，停顿时间可以设置为 8 分钟以上。3.2. 泵四元泵或单泵3.2.1. 泵的流速：在“泵”的模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，依据国标要求，如设置 1.00ml/min。3.2.2. 假设是四元泵，可选择溶剂瓶，输入需要使用的各溶液的比例，如 B 蒸馏水 90%，C 乙腈 10%，点击“确认”。3.2.3. 在“泵”的模块中点击鼠标右键，点击“掌握”，选择“泵”翻开，确认。3.2.4. 设置泵停顿时间：在“泵”的模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，一般选择“与进样器全都/无限制”。3.2.5. 压力限值：最小值一般设 0bar，最大值一般设 100bar。3.3.柱温箱3.3.1. 设置柱温箱的温度：在“柱温箱”模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，左边依据国标要求可设置，比方 35 度，一般右边设置同左边。3.3.2. 色谱柱选择：依据国标，不同的检测工程，选择不同的色谱柱，反相一般为 C18 柱,正相为 SIL 柱，并安装好，拧紧，不渗漏。3.3.3. 在“柱温箱”模块中，点击鼠标右键，点击“掌握”，选择柱温箱翻开，确认。3.3.4. 设置柱温箱停顿时间：在“柱温箱”的模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，一般选择“与泵/进样器全都”。3.4. 检测器VWD 紫外、DAD 二级阵列、RID 示差3.4.1. 设置波长：在“检测器”模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，依据不同检测要求，设置不同波长。3.4.1.1. 检测三聚氰胺，如使用 VWD 检测器，检测波长设置为 240nm，峰宽一般选择0.1 分钟2 秒响应时间。3.4.1.2. 检测维生素 A，如使用 DAD 检测器，检测波长设置为 325nm，带宽4nm；参比波长设置为 800nm，带宽 100nm；峰宽一般选择0.1 分钟2 秒响应时间。3.4.1.3. 检测维生素 D，需要使用正相净化，检测波长设置为 264nm。3.4.1.4. 检测糖类，则使用 RID 检测器。3.4.2. 在“检测器”模块中，点击鼠标右键，点击“掌握”，翻开检测器的灯，点击“确认”。3.4.3. 设置检测器停顿时间：在“检测器”的模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，一般选择“与泵/进样器全都”。3.4.4. 以上模块设置好后，从“方法”菜单中，选中“方法另存为”，输入方法名，点击“确认”，以后可以直接调用。4. 设置序列和运行：4.1. 从“视图”菜单中，选中“首选项”，添加“序列”、“方法”和“数据”的保存路径，点击“确认”。4.2. 从“序列”菜单中，选中“序列参数”，选择数据文件路径和输入子名目名称，这样数据就会自动保存在指定的文件夹中，便利归档和查找。4.3. 从“序列”菜单中，选中“序列表”，在样品盘中依次放置好样品，如依据 1.2.3对应样品瓶位置，依次添加，命名样品名称和批号，选择“方法”，点击“确认”。4.4. 从“运行掌握”菜单中，选择“运行序列”，仪器会自动进样并保存图谱。5. 标准曲线:5.1 依据国标，检测不同物质，需要配制不同系列浓度的标样。5.2 依据相应的模块和方法，设置序列表，从“运行掌握”菜单中，点击“运行序列”，仪器自动进样。5.3 待全部的标样进样完成后，在“仪器 1 脱机”中点击“文件”菜单，选择“调用信号”，从相应的保存路径选中相应的图谱。从“校正”菜单中，第一个浓度标样的图谱，点击“建校正表”，后面四个浓度标样的图谱，选择“添加级别”，得到标准曲线，在校正表的化合物中输入“所检测物质的名称”，点击校正表中确实认。标准曲线可以每天做，也可以保存后调用，每天使用其中一个浓度的标样进展确认。6. 打印报告：6.1 翻开“仪器 1 脱机”图标，点击“文件”，选中“调用信号”，从相应的保存路径，选中相应图谱。6.2 从“报告”菜单中选中“设定报告”，在定量中选择“百分比法”或“外标法”等，基于“峰面积”或“峰高”；在报告格式中，可选择“简短报告”。6.3 从“校正”菜单中选中“校正设置”，输入报告中结果的含量单位，如ug/ml 等。6.4 积分：一般软件会自动积分，并依据标准曲线自动计算样液中所检测物质的浓度；假设自动积分不能完成时，可点击“划基线”，进展手动积分，并保存图谱。6.5 点击“放大镜”图标，观看图谱。6.6 然后可打印报告。7.关机7.1 关机前，用相应的溶剂充分冲洗系统。7.1.1 假设使用含离子对试剂或磷酸盐等缓冲液作为流淌相流淌相使用完毕后需要冷藏或者每天配制，由于天气热时，流淌相简洁长菌，样品分析完成后，必需用 10%乙腈或 10%甲醇水溶液来清洗液相色谱仪器 30 分钟，再用纯甲醇或乙腈清洗 30 分钟，然后关机。7.1.2 假设使用纯甲醇作为流淌相，可直接关机。7.2 点击“关闭”图标，退出化学工作站。7.3 关闭计算机。7.4 关闭 1260 液相色谱仪器的进样器、泵、柱温箱和检测器的电源。8.意外状况处理：在检测过程中遇到突然停电，应马上关闭打印机、显示器、计算机和液相色谱仪器各部件电源开关，等电源来时再行翻开，建议安装稳压电源。七.维护规程1.每日维护1.1. 每日上机使用的试剂，在使用前必需过滤，上机用试剂须购置 HPLC 级。上机用试剂在使用前，需要超声 20 分钟以上，特别是不带在线脱气装置的液相色谱仪器，假设试剂不超声，会引起基线和压力不稳，无法完成检测。1.2. 每日使用离子对试剂等缓冲液作为流淌相的管路，必需用 10%乙腈或 10% 甲醇水溶液清洗 30 分钟以上。1.3. 色谱柱的保养：样品处理完，必需用尼龙相针式滤器进展过滤，方可进样，这样可保护色谱柱，延长其使用寿命。1.4. 整个系统清洗：反相色谱仪器每天用纯的甲醇或乙腈清洗 1 小时以上； 正相色谱仪器每天用正己烷清洗 1 小时以上。1.5. RID 检测器的耐受压力最高只有 5bar，所以假设要串联其他检测器时， 务必将 RID 检测器放在最终。1.6. 反相切换正相：可不接色谱柱，用异丙醇冲洗 30 分钟。1.7. 泵头清洗：每次使用完离子对试剂缓冲液后，需用 10%异丙醇清洗 10 分钟。把清洗泵头的软导管右侧，放入 10%异丙醇内，在“泵”模块中，点击鼠标右键，在“掌握”中翻开“泵密封垫清洗组件”，设置清洗时间 10 分钟，进展清洗。1.8. 仪器故障：仪器消灭小故障可参照说明书修理，说明书未提及的故障问题准时与 Agilent 公司修理部联系。2. 每周维护：自动进样针上方有一个内角螺丝，每周检查与固定，假设此内角螺丝松动，易导致与其连接的定量环的损坏与漏液。3. 每季维护3.1. 定期检查排液阀的滤芯：拧开排液阀，以 10%乙腈或 10%甲醇水溶液作为流淌相，流速 5ml/min，假设压力大于 10bar，则马上更换滤芯。3.2. 定期清洗溶剂过滤头：用 35%硝酸浸泡 1 小时，然后用蒸馏水浸泡和冲洗溶剂过滤头，不要使用超声波清洗。3.3. 色谱柱的更换：色谱柱使用一段时间后，假设峰形塌陷、分叉或拖尾时， 需要准时更换。4. 每年维护：4.1 溶剂过滤头的更换：溶剂过滤头每季定期清洗之后，觉察比较脏或黑， 可考虑更换。4.2 氘灯的更换：假设氘灯点不着，或者噪音和漂移干扰分析，应当更换灯，长寿命氘灯的工作时间一般在 2023 小时以上。4.2.安排安捷伦工程师进展预防保养工作。八.期间核查规程1. 期间核查周期：两次检定期间至少进展一次。2. 所需标准物质：依据国标所示的检测物质和检测方法。3. 周密度：使用同一浓度的标准溶液，重复测定 6 次以上，获得的相对平均偏差，要求不得超过 5%。3.1 平均值：单次测定结果之和除以测定次数。3.2 平均偏差：单次测定结果与平均值之差值确实定值之和除以测定次数。3.3 相对平均偏差：平均偏差除以平均值。4. 检出限：依据安捷伦化学工作站手册中 11.评价系统适用性噪声测定，国际纯粹与应用化学联合会IUPAC1997 年通过、1998 年发表的分析术语纲要IUPAC Compendium of Analytical Nomenclature30中规定，以信噪比 3：1 所对应被测物质的浓度确定仪器的检出限，要求小于所对应国标方法的检出限，S：信号峰高，N：噪声。5. 结果推断5.1. 外观及根本功能应保持正常，但不影响整台仪器的总判。5.2. 检出限、周密度指标中有一项不合格，则判定为不合格。