血清乳酸脱氢酶DGKC方法测定.docx
血清乳酸脱氢酶DGKC推荐方法测定1 .实验原理德国临床化学学会(DGKC)推荐的连续监测法。LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD还原为NADH, NADH的生成速率与标本中乳酸 脱氢酶的活力成正比。L-乳酸 + NAD'丙酮酸 + NADU + 11+LDH2 . 标本：3 . 1病人准备：无特殊。4 . 2类型：血清，肝素或EDTA血浆。5 .标本存放：3天内的活性损失：28保存：8%； 1525保存：2%o6 .标本运输：常温条件下保存运输。7 .标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。8 .实验材料6. 1试剂 申能LDH测定试剂盒( 141 3207170 1 试齐1 ( 6X64ml),试齐I2 ( 6X 16ml)6. 1. 1试剂组成试齐I1 ( R1)：N-甲基-右旋糖酎缓冲液325mmol/LL-乳酸50mmol/L试剂2 ( R2)：NAD+10mmol/L6. 1.2试剂准备 试剂为即用式。6. 1. 3试剂稳定性与贮存：试剂保存于28,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰 冻。6. 1.4变质指示 当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时， 表明试剂已变质，不能继续使用。6. 1. 5注意事项 试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘 膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品 使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参 见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6 . 3质控品 具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪8 .操作步骤8. 1项目基本参数：参见AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件8 . 2仪器操作步骤：参见AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与n质控做为未知标本进行分 析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内 质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以TruCal U复合校准品LDH校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行LDH活力检测，可以直接使用 A/min均值乘以计算因子得到结果,但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算LDH活力的计算因子见下表: A/minX 因子二 LDH 活力U/L底物起始的反应（37 ）样品起始的反应（37 ）340 nm 10080334 nm10275365 nm1876512.参考值范围成人：儿童：1 3。天31天 1年13岁46岁79岁1012 岁1315岁1618岁U/L女性135215145765190420165 395135345140280120260100 275105 2308095825015000男性135 225125 735170 450155 345155345145 300120 325 120290105 235参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实 验室应建立自己的参考值。13 .临床意义口口：乳酸脱氢酶（LDH）由五种不同的同工酶组成，催化L-乳酸与丙酮酸的 相互转换。LDH存在于人体所有组织的细胞质中，在肝、心和骨骼肌中含量较高，在红细 胞、胰腺、肾和胃中含量较低。在多种病理情况下出现LDH活力的升高，如心肌梗死、癌 症、肝脏疾病、血液疾病或肌肉疾病。由于LDH缺乏器官特异性，因此在鉴别诊断时，有 必要作LDH同工酶和其它酶类的测定，如碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨 基转移酶。14 .操作性能14. 1 线性范围：5-1200U/Lo14. 2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000批内精密度小于3%, 总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内 精密度n = 20X(U/L)S(U/L)CV(%)批间 精密度 n = 20X(U/L)S(U/L)CV (%)样品11782. 001. 12样品11701. 620. 95样品21872. 121. 14样品21762. 481. 41样品35662. 270. 40样品35663. 610. 6414.3方法学比较：本公司的试剂盒（y）与IFCC参考方法（x）,同时对79个样品进行LDH 检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y = 0. 97x + 5. 9U/L； r =0.997。14. 4灵敏度：本试剂的检测限为5U/L。14. 5病人结果可报告范围：5-1200U/Lo15 .超出范围结果处理 本法对LDH活力检测的最大 A/min在340、334nm为0.15,在 365nm为0. 08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+9稀释，重 新测定，结果乘以10。16 .病危报警值的处理17 .方法局限性17 . 1本法对LDH活力检测的最大 A/min在340、334nm为0.15,在365nm为0.08。当样 品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以10。18 . 2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度41704|in）ol/L,胆红素浓度4684|iniol/L,甘油三酯 浓度W 22. 6mniol/L时没有观察到干扰。血红蛋白浓度20. 5g/L会影响检测结果。19 .补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。20 .参考文献1. Thomas L, edi tor. Clinical laboratory diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.8994.2. Moss DW, Henderson AR. Digestive enzymes of pancreatic origin. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3，d ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721.3. Deutsche Gesellschaft fur Klinische Chemi e. （German Society for Clinical Chemistry）. Recommendat ion for the determi nat ion of the catalyt i c concentrat ion of 1actate dehydrogenase at 37 . Eur J Clin Chem Clin Biochem 1993;31:8979.20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定 执行。
