生化检验中的定标医学心理学检验医学医学心理学基础医学.pdf

精心整理 定标的意义：定标就是要找出一个参考点，就是一个 K 值（或 F 值）。它是由仪器与试剂共同确定下来。当我们测定一个标本时，无论是手工或全自动生化分析仪，测出来的值只是一个吸光度，这个吸光度对我们没有什么意义，我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性，那就要乘上一个 K 值，计算出来的结果对我们就有意义了。K 值就是我们通过定标找出来的。一般来说测定 K 值的最低要求是用标准品和试剂空白来测定，经过仪器测定出这两个吸光度，即标准品的吸光度和试剂空白的吸光度。K=标准浓度/(A 标准A 试剂空白)PS：A 表示吸光度 标准液的浓度我们是知道的，这两个吸光度可以由仪器测出，这样就得出一个 K 值。任何标本，用其吸光度乘以 K 值就得到了其浓度值。因此，K 值具有非常决定性的意义，可以决定标本的准确性。K 值的决定因素：我们看看 K 值会受到什么影响呢？第一，标准液的浓度一定要准确（标准液最好与标本一样是以血清为基质的）。第二，标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。吸光度受仪器、试剂的影响，如果仪器稳定，试剂也稳定，那 K 值就稳定。仪器和试剂是影响 K 值的主要因素。如何确定 K 值是准确的？一般我们用质控血清来检查，最好是两种水平的质控来检查，如果质控结果很好，可以说 K 值是准确的，用这个 K 值计算出来病人的结果也是准确的，所以 K 值非常关键。K 值的真面目：K 值实际上代表了斜率，截距代表试剂空白，试剂空白每天都在变化，所以 K 值的稳定性由仪器与试剂决定，如果仪器与试剂都十分稳定，那 K 值也很稳定。多长时间定一次标合适？这要看您试剂的稳定性，质控结果不好，有些项目做试剂空白可以解决，有些项目要做两点定标。酶的项目如何确定 K 值：一是计算出来的理论 K 值；K=(TV1000)/(SVL)精心整理 二是用有酶项目的定标液得出 K 值（K=标准浓度/(A 标准A 试剂空白)）：目前各公司可以提供多项目的定标液，不仅有底物类的项目，也有酶类的项目。生化检验中的各种空白概念 时间:2009-5-8 9:54:09,点击:?61 对所谓试剂空白样本空白水空白杯空白等空白名词,有些同行可能感到困惑.特此汇集了一下各种言论(包括本论坛高手们发表的一些意见)并结合自己的理解,总结如下,希望大家指正和补充:空白概念区别要点:*空白=只含*的空白（只含*的吸光度）1、试剂空白：?由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度，所以从理论上说，所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除，试剂本身的吸光度就是试剂空白。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把样本换成蒸馏水来测量。?在传统手工方法中,每次测定都要做至少三个管:测定管、标准管、空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水，测出来也就是试剂空白。因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异，所以要求每次都要测定试剂空白，称为实时试剂空白。?在全自动分析仪上，大体上是模拟手工操作。但许多全自动分析仪为追求速度，在设计上采用一些折中方法来测定试剂空白。以日立全系列生化仪为例。该系列分析仪是做不了实时试剂空白，因为它们全是先加入样本后加试剂，为了折中，只好在定标时做一个试剂空白，保存起来，需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。这种做法，对于比较稳定的试剂来讲，对结果影响不大。?通俗的讲，日立的仪器工作流程中首先是将标本加入到比色杯中，然后依次加入 R1试剂、R2试剂，所以试剂空白在每个测定项目曲线中是无法看到的。但是 7170 从 CALIBRATION 中是可以看到的，S1ABS就是代表试剂空白吸光度，在 CALIBRATION 画面里的下方找到 ReactionMonitor（反应监察），其中 STD(1)就是代表试剂空白反应曲线.为了减小误差，日立仪器会连续做两次测定，所以你看到 FIRST和 SECOND 两条，计算时是取他们的平均值。做试剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定，积极采取措施纠正。对于日立的这种试剂空白测定很多仪器都采用这种方法，也叫做试剂空白校准。?总的说来，自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度，该吸光度是通过校准确立的。2、样本空白：?由于溶血、脂血、黄疸等情况，会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的测量，即样本空白，可以去除这方面的影响。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。自动生化仪上，很难界定样本空白。消除样本空白有关的大约有如下几点:?a).在双试剂测定时，加入试剂 1 和样品后的吸光度可一定程度上扣除样本空白，所以有单试剂不能扣除样本空白的说法。?b).现在优质的试剂的抗干扰能力都比较强，比如有些双试剂，R1加入后先和样本孵育一段时间，将血红蛋白、脂肪、胆红素等反应掉，再加入 R2开始测定反应。在一定范围内都可以消除样本空白。标本时无论是手工或全自动生化分析仪测出来的值只是一个吸光度这个吸光度对我们没有什么意义我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性那就要乘上一个值计算出来的结果对我们就有意义了值就是我们通过定标找出来的空白的吸光度标准浓度标准试剂空白表示吸光度标准液的浓度我们是知道的这两个吸光度可以由仪器测出这样就得出一个值任何标本用其吸光度乘以值就得到了其浓度值因此值具有非常决定性的意义可以决定标本的准确性值的决定液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确吸光度受仪器试剂的影响如果仪器稳定试剂也稳定那值就稳定仪器和试剂是影响值的主要因素如何确定值是准确的一般我们用质控血来检查最好是两种水平的质控来检查如果质控结果很好精心整理?c).现代全自动生化仪大多采用双波长测定.双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征，选择两个波长和，使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等，而使待测物质在两波长处的吸光系数有显着差别。以两波长分别测定分析溶液的吸光度，以两个吸光度值之差(A)计算。这也可以扣除一部分样本空白.?d).有些仪器,例如日立系列,有专门的“血清信息”功能的设置。做法都是单独占用一个空白通道来计算，这也叫做样品空白校准。3、水空白：?比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意义主要是对光路系统进行检查和校正，如光源，比色杯等，同时在计算中起到消除“杯差”的作用。日立 7060 中的 CellBlank（杯空白）测定的就是水空白。标本时无论是手工或全自动生化分析仪测出来的值只是一个吸光度这个吸光度对我们没有什么意义我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性那就要乘上一个值计算出来的结果对我们就有意义了值就是我们通过定标找出来的空白的吸光度标准浓度标准试剂空白表示吸光度标准液的浓度我们是知道的这两个吸光度可以由仪器测出这样就得出一个值任何标本用其吸光度乘以值就得到了其浓度值因此值具有非常决定性的意义可以决定标本的准确性值的决定液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确吸光度受仪器试剂的影响如果仪器稳定试剂也稳定那值就稳定仪器和试剂是影响值的主要因素如何确定值是准确的一般我们用质控血来检查最好是两种水平的质控来检查如果质控结果很好