山药多糖对葡萄糖苷酶抑制实验设计汇编高等教育生物学论文会议文章.pdf

山药多糖提取物对葡 萄糖苷酶的抑制实验 一所需试剂（1）PBS缓冲液 称取8g NaCl、0.2g KC、l 1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸馏水中，用 HCl调节溶液的 pH 值至 6.8，最后加蒸馏水定容至 1L 称取 NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g,KH2PO4 0.24g，溶于 900ml 双蒸水中，用盐酸调 pH 值至 6.8，加水定容至 1L，常温保存备用。实际配制 500ML 即可。（2）3 mmol/L 谷胱甘肽溶液 谷胱甘肽分子量：307.32，称取 46.1mg谷胱甘肽定容至 50ml 蒸馏水中，即 为 3 mmol/L 谷胱甘肽溶液。（3）0.01 mol/L PNPG 溶液 4-硝基苯-D-吡喃葡萄糖苷分子量：301.25,称取150.6mg定容至 50ml蒸馏水 水中，即为 0.01 mol/L PNPG 溶液。（4）0.2 mol/L Na2CO3 溶液 Na2CO3分子量：105.99，称取 2.12g定容至 100ml,即为 0.2 mol/L Na2CO3 溶液 一实验流程 1】酶活性的测定 1.检测样配置 取 67 mmol/L 磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1.4 mL、3 mmol/L 谷胱甘肽溶液 40 L，0.01 mg/mL-葡萄糖苷酶溶液 60 L，37 保温 10 min 后，加 0.01 mol/L PNPG 溶液 100 L，摇匀，37 保温继续反应 10 min，加入 0.2 mol/L Na2CO3 溶液 800L 终止反应，于 400 nm 波长处测定吸光值.2.参比配置 取 67 mmol/L 磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1.4 mL、3 mmol/L 谷胱甘肽溶液 40 ，L 水 60 ，L 37 保温 10 min 后，加 0.01 mol/L PNPG 溶液 100 ，L摇匀，37 保温继续反应 10 min，加入 0.2 mol/L Na2CO3 溶液 800L 终止反应，于 400 nm 波长处测定吸光值.检测样吸光值为 参比吸光值为 2】多糖提取物抑制-葡萄糖苷酶活性的测定 1.待测样配置 A 配置浓度为 2 mg/mL 的多糖酸性水提取物 分别取溶液 20、40、60、80、100、150、200 L，于 10mL塑料试管中 各加入 67 mmol/L pH 6.8 的磷酸缓冲液至 1.4mL 定容至称取溶于双蒸水中用盐酸调值至加水定容至常温保存备用实际配制即可谷胱甘肽溶液谷胱甘肽分子量称取谷胱甘肽定容至蒸馏水中即为谷胱甘肽溶液溶液硝基苯吡喃葡萄糖苷分子量称取定容至蒸馏水水中即为溶液溶液分子量溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值参比配置取磷酸盐缓冲液谷胱甘肽溶液水保温后加溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值检测样吸光值为参比吸光值为多糖提取物抑制葡萄糖苷酶肽溶液葡萄糖苷酶溶液保温加溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值配置浓度为的多糖酸性氯化钠提取物分别取溶液于塑料试管中各加入的磷酸缓冲液至加谷胱甘肽溶液葡萄糖苷酶溶液保温加溶液摇匀保温继加 3 mmol/L 谷胱甘肽溶液 40 L 0.01 mg/mL-葡萄糖苷酶溶液 60 L，37 保温 10 min 加 0.01 mol/L PNPG 溶液 100 L，摇匀 37 保温继续反应 10 min 加入 0.2 mol/L Na2CO3 溶液 0.8 mL 终止反应 于波长 400 nm 处测定吸光值 B 配置浓度为 2 mg/mL 的多糖酸性氯化钠提取物 分别取溶液 20、40、60、80、100、150、200 ，L于 10mL塑料试管中 各加入 67 mmol/L pH 6.8 的磷酸缓冲液至 1.4mL 加 3 mmol/L 谷胱甘肽溶液 40 L 0.01 mg/mL-葡萄糖苷酶溶液 60 ，L 37 保温 10 min 加 0.01 mol/L PNPG 溶液 100 ，L摇匀 37 保温继续反应 10 min 加入 0.2 mol/L Na2CO3 溶液 0.8 mL 终止反应 于波长 400 nm 处测定吸光值 C 配置浓度为 2 mg/mL 的多糖中性水提取物 分别取溶液 20、40、60、80、100、150、200 ，L于 10mL塑料试管中 各加入 67 mmol/L pH 6.8 的磷酸缓冲液至 1.4mL 加 3 mmol/L 谷胱甘肽溶液 40 L 0.01 mg/mL-葡萄糖苷酶溶液 60 ，L 37 保温 10 min 定容至称取溶于双蒸水中用盐酸调值至加水定容至常温保存备用实际配制即可谷胱甘肽溶液谷胱甘肽分子量称取谷胱甘肽定容至蒸馏水中即为谷胱甘肽溶液溶液硝基苯吡喃葡萄糖苷分子量称取定容至蒸馏水水中即为溶液溶液分子量溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值参比配置取磷酸盐缓冲液谷胱甘肽溶液水保温后加溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值检测样吸光值为参比吸光值为多糖提取物抑制葡萄糖苷酶肽溶液葡萄糖苷酶溶液保温加溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值配置浓度为的多糖酸性氯化钠提取物分别取溶液于塑料试管中各加入的磷酸缓冲液至加谷胱甘肽溶液葡萄糖苷酶溶液保温加溶液摇匀保温继加 0.01 mol/L PNPG 溶液 100 ，L摇匀 37 保温继续反应 10 min 加入 0.2 mol/L Na2CO3 溶液 0.8 mL 终止反应 于波长 400 nm 处测定吸光值 2.空白样配置 取水 100 L 各加入 67 mmol/L pH 6.8 的磷酸缓冲液至 1.4mL 加 3 mmol/L 谷胱甘肽溶液 40 L 0.01 mg/mL-葡萄糖苷酶溶液 60 ，L 37 保温 10 min 加 0.01 mol/L PNPG 溶液 100 ，L摇匀 37 保温继续反应 10 min 加入 0.2 mol/L Na2CO3 溶液 0.8 mL 终止反应 于波长 400 nm 处测定吸光值 空白样吸光度 3.参比配置、分别取水 20、40、60、80、100、150、200 ，L于 10mL塑料试管中 各加入 67 mmol/L pH 6.8 的磷酸缓冲液至 1.4mL 加 3 mmol/L 谷胱甘肽溶液 40 L 0.01 mg/mL-葡萄糖苷酶溶液 60 ，L 37 保温 10 min 加 0.01 mol/L PNPG 溶液 100 ，L摇匀 37 保温继续反应 10 min 加入 0.2 mol/L Na2CO3 溶液 0.8 mL 终止反应 于波长 400 nm 处测定吸光值 定容至称取溶于双蒸水中用盐酸调值至加水定容至常温保存备用实际配制即可谷胱甘肽溶液谷胱甘肽分子量称取谷胱甘肽定容至蒸馏水中即为谷胱甘肽溶液溶液硝基苯吡喃葡萄糖苷分子量称取定容至蒸馏水水中即为溶液溶液分子量溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值参比配置取磷酸盐缓冲液谷胱甘肽溶液水保温后加溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值检测样吸光值为参比吸光值为多糖提取物抑制葡萄糖苷酶肽溶液葡萄糖苷酶溶液保温加溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值配置浓度为的多糖酸性氯化钠提取物分别取溶液于塑料试管中各加入的磷酸缓冲液至加谷胱甘肽溶液葡萄糖苷酶溶液保温加溶液摇匀保温继对-葡萄糖苷酶活抑制率计算公式如下：注：A 样品为加有样品反应后的吸光度；A 本底 为只加有样品的吸光度；A 空白 为不加 入样品反应后的吸光度。本底吸光度（磷酸缓冲液吸光度）酸性水提 编号 吸光值 抑制率 IC50 值 20 40 60 80 100 150 200 定容至称取溶于双蒸水中用盐酸调值至加水定容至常温保存备用实际配制即可谷胱甘肽溶液谷胱甘肽分子量称取谷胱甘肽定容至蒸馏水中即为谷胱甘肽溶液溶液硝基苯吡喃葡萄糖苷分子量称取定容至蒸馏水水中即为溶液溶液分子量溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值参比配置取磷酸盐缓冲液谷胱甘肽溶液水保温后加溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值检测样吸光值为参比吸光值为多糖提取物抑制葡萄糖苷酶肽溶液葡萄糖苷酶溶液保温加溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值配置浓度为的多糖酸性氯化钠提取物分别取溶液于塑料试管中各加入的磷酸缓冲液至加谷胱甘肽溶液葡萄糖苷酶溶液保温加溶液摇匀保温继酸性氯化钠提 编号 吸光值 抑制率 IC50 值 20 40 60 80 100 150 200 中性水提 编号 吸光值 抑制率 IC50 值 20 40 60 80 100 150 200 定容至称取溶于双蒸水中用盐酸调值至加水定容至常温保存备用实际配制即可谷胱甘肽溶液谷胱甘肽分子量称取谷胱甘肽定容至蒸馏水中即为谷胱甘肽溶液溶液硝基苯吡喃葡萄糖苷分子量称取定容至蒸馏水水中即为溶液溶液分子量溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值参比配置取磷酸盐缓冲液谷胱甘肽溶液水保温后加溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值检测样吸光值为参比吸光值为多糖提取物抑制葡萄糖苷酶肽溶液葡萄糖苷酶溶液保温加溶液摇匀保温继续反应加入溶液终止反应于波长处测定吸光值配置浓度为的多糖酸性氯化钠提取物分别取溶液于塑料试管中各加入的磷酸缓冲液至加谷胱甘肽溶液葡萄糖苷酶溶液保温加溶液摇匀保温继