发酵现象实验报告3篇.docx
发酵现象实验报告3篇 一、试验目的 1.测定并绘制生长曲线、底物消耗曲线和产物形成曲线 2.了解发酵过程中葡萄糖的利用、菌体生长和产物生成的相互关系 3.初步学会菌体生长、底物消耗和产物生成有关发酵参数的求解 二、试验仪器及试剂 菌种：酿酒酵母 仪器：锥形瓶（250ml）、移液管、pH计、生物传感仪、分析天平 药品：酵母膏、胰蛋白胨、葡萄糖、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、苯甲酸钠、EDTA钠、氯化钠 三、试验原理 酵母菌是兼性厌氧型真菌，喜爱含糖的环境， 有氧时将葡萄糖分解成CO和水，无氧时将葡萄糖分解成酒精和二氧化碳，同时都释放出能量 生物传感器由生物识别元件和信号转换器组成，能够选择性地对样品中的待测物发出相应，通过生物识别系统和电化学或其他传感器把待测物质的浓度转为电信号，依据电信号的大小定量测出待测物质的浓度。生物传感器是应用生物活性材料（如酶、蛋白质、DNA、抗体、抗原、生物膜等）与物理或化学换能器有机结合的一门穿插学科，是进展生物技术必不行少的一种先进的检测方法与监控方法，也是物质在分子水平的快速、微量分析方法 四、 试验步骤 1.种子培育基（YEPD，g/L）：称取酵母膏10g、胰蛋白胨20g、葡萄糖20g，加蒸馏水溶解，调整pH 5.0左右，并定容至1000ml。 2.发酵培育基（g/L）：称取酵母膏10g，胰蛋白胨20g，葡萄糖100g加蒸馏水溶解，调整pH 至5.0左右，定容至1000ml，分装10个锥形瓶（250ml）封口121，30min灭菌。 3.种子培育：将活化好的种子培育液，用移液管移去10ml接种于灭菌YEPD液体培育基中， 于30、120 r/min全温摇瓶柜中培育24 h左右，观看种子液的色泽、气味与形态等根本状况。 4.发酵方法：将培育好的种子液按8-12%的接种比例，接种于发酵培育基中，置于30 、120 r/min全温摇瓶柜中培育96 h。 5.过程取样：发酵培育基接种发酵后，每隔8小时取样，移取45ml菌液至离心试管中3800r/min离心，上清液取出分析，菌泥放置烘箱烘干，分析菌体生物量、剩余葡萄糖浓度与酒精生成量，并以此为根底数据计算参数 6.生物量的测定：取等量的两份发酵液，一份由烘干法测得菌体干重（DCW），另一份稀释成肯定的浓度于630 nm下测定吸光值（OD值），得到标准曲线为DCW=3.87×OD（R=0.996）。再以一样方法测得样品的OD值，按标准曲线计算出菌体干重。 7.复原糖的”测定与乙醇的测定：使用生物传感仪测定糖类和酒精的含量 五、 数据分析 发酵现象试验报告2 探究酵母菌在无氧条件下发酵作用产生二氧化碳和酒精。 试验仪器及用品： 1.试验仪器：带胶塞和胶管的锥形瓶、小气球、Y形管、大烧杯、温度计、试管、比色板、小烧杯、玻璃棒。 2.试验用品:白糖（100g）、一小包干酵母（约30g）、澄清的石灰水、酒精、橙色的重铬酸钾溶液。（检测酒精的试剂。0.5ml的浓硫酸溶有0.1g重铬酸钾，体积分数为9597，在酸性条件下与酒精发生化学反响由橙色变为灰绿色） 试验装置及说明： 澄清的石灰水可以检测气体中有二氧化碳，重铬酸钾溶液遇到酒精由橙色变为灰绿色。 试验操作： 1.将（100ml）40温水倒入锥形瓶，再用汤匙将一大勺糖及适量干酵母加进来，搅拌匀称后，将锥形瓶放在大烧杯中水浴保温温度保持在3040 左右。（先让酵母菌进展有氧呼吸，是酵母菌快速生殖，并把葡萄糖分解成二氧化碳和水。） 2.观看到酵母菌培育液有气泡产生，塞上橡胶塞（这样做既可以避开气体散失，影响后面试验效果，也为酒精的产生供应保障）。过一段时间后就可看到干瘪的气球渐渐膨胀起来了。（酵母菌的无氧呼吸） 3.将夹子翻开，挤压气球，使瓶内产生的气体缓缓通过胶管导入试管内的澄清石灰水中，石灰水变浑浊了(检测气体中有二氧化碳。原理：二氧化碳遇石灰水，石灰水变浑浊)。 4.将重铬酸钾试剂分别滴在比色板的凹槽内，并分别标注1号、2号（作对比）、3号。在3号试剂上滴1滴酒精，在1号试剂上滴1滴酵母菌发酵液。发觉1号和3号都由橙色变成了灰绿色。 试验创新点及意义： 通过上述试验，让我们对酵母菌“发酵现象”所需要的原料、 条件及产生的物质都有了较直观的感受，比拟简单理解课本上阐述的“酵母菌可以把葡萄糖转化为酒精和二氧化碳”等有关内容，而且印象深刻。使我们养成很好的节省意识。 试验现象： 1.闻到了发酵后特别的甜酒的芳香气味。 2.详见【试验操作4】 3.澄清的石灰水变浑浊 发酵现象试验报告3 一、试验目的 （1）把握摇床发酵法制备糖化酶的工艺流程及操作方法 （2）了解利用黑曲霉菌菌种发酵时的生长条件及留意事项 （3）娴熟把握试验过程中的无菌操作和培育条件的选择 二、试验仪器及试剂 菌种：黑曲霉 仪器：锥形瓶（500ml)、移液管、恒温水浴锅、秒表、50mL比色管、牛皮纸、纱布（8层）、pH计。 药品：三水乙酸钠、冰醋酸、硫代硫酸钠、碘、氢氧化钠、硫酸、可溶性淀粉、玉米粉、豆饼粉、麸皮 三、试验原理 摇瓶发酵是试验室常用的通风发酵方法，通过将装有液体发酵培育基的摇瓶放在摇床上振荡培育，以满意微生物生长、生殖及产生很多代谢产物对氧的需求。它是试验室筛选好气性菌种，以及摸索种子培育工艺与发酵工艺的常用方法。 葡萄糖淀粉酶（EC3.2.1.3）系统名为淀粉-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶，俗称糖化酶，是国内产量最大的酶品种。糖化酶对淀粉分子的作用是从非复原末端切开-1,4键，也能切开-1,3键和-1,6键，产生葡萄糖。 糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非复原末端开头，分解-1,4-葡萄糖苷键生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有醛基，能被次碘酸钠氧化，过量的次碘酸钠酸化后析出碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定，计算酶活力。 四、试验步骤 1.培育步骤 1.1种子培育基制备及灭菌 将新奇土豆去皮切块，称取200300 g土豆块放入500 mL烧杯中，参加肯定量水，在电炉上煮沸至土豆块熟透，用120目纱布过滤，滤渣反复用肯定量水清洗、过滤2次，合并各次滤液且定容至1000 mL即得土豆汁。取肯定体积的土豆汁，在其中参加5%的蔗糖，溶解摇匀并调pH至5.5，即得种子培育基。将适量种子培育基倒入锥形瓶（250ml），用纱布塞塞住管口，并用牛皮纸包扎，置灭菌锅中，于121下灭菌30min。待灭菌完毕，冷却取出。 1.2发酵培育基制备及灭菌 取6只500mL摇瓶，分别按装液量100、200、300mL配制培育基（玉米粉6%、豆饼粉2%、麸皮1%），加水后略微摇动，使原料潮湿，浸入水中。用8层纱布包扎瓶口，再加牛皮纸包扎。置灭菌锅中，于121下灭菌30min。 1.3发酵培育基接种：将已生长好的菌种，在无菌条件下，根据10%的接量（8%-12%）接种到发酵培育基上。 1.4发酵培育基发酵：将摇瓶固定在摇床上，培育温度为31，转速为120r/min，培育时间96h。显微镜观看菌丝形态，用试纸测发酵液pH，测定酶活力。摇瓶培育时观看各种摇瓶机的构造。 2.糖化酶活力测定 2.1待测酶液的制备： 准确吸取液体酶1.00mL，先用少量的乙酸缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研，将上清液当心倾入容量瓶中。沉渣局部再参加少量缓冲液，最终全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度（估量酶活力在100250u/mL范围内），摇匀。通过4层纱布过滤，滤液供测定用。 2.2酶活力测定： 于甲、乙两支50mL比色管中，分别参加可溶性淀粉溶液25mL及缓冲液5mL，摇匀后，于40恒温水浴中预热5min。在甲管（样品）中参加待测酶液2mL，立即摇匀，在此温度下精确反响30min，立即各参加氢氧化钠溶液0.2mL，摇匀，将两管取出快速冷却，并于乙管（空白）中补加待测酶液2mL。吸取上述反响液与空白液各5mL，分别置于碘量瓶中，精确参加碘溶液10mL，再加氢氧化钠溶液15mL，摇匀塞紧，于暗处反响15min。取出，加硫酸溶液2mL，马上用硫代硫酸钠标准液滴定，直至蓝色刚好消逝为其终点。 2.3酶活力计算： 样品酶活力（u/g或u/mL）=579.9×(A-B)c×n式中：A与B分别为空白、样品消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；c为硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L；n为稀释倍数。 五、数据分析 比拟不同装液量下的菌体形态特征、酶活力，将结果填入下表： 装液量/mL 指标 酶活力 pH 菌体特征 100 420u/mL 4.2 200 510u/mL 4.1 300 570u/mL 3.8 消失球状的白色的菌丝团，瓶壁上消失黑丝的孢子和菌丝 六、结论 1.不同的装液量对酶活力的影响是随着装液量的增加呈现上升的趋势，但是酶活力变化不大，并且酶活力不高，与其他组数据相比接种量跟酶活力关 2.菌体特征在锥形瓶的瓶壁上消失白色的菌丝，在培育基中也消失了丝球 3.菌种新陈代谢的旺盛二氧化碳的释放增加，使pH值渐渐下降，最终使培育基的pH下降至3.8左右。
