微生物实验-细菌培养、接种省名师优质课赛课获奖课件市赛课一等奖课件.ppt

第二次试验课第1页内内 容容1.细菌培养法（菌培养法（录象）象）2.基基础培养基制培养基制备（讲解示教）解示教）3.细菌接种法（一份菌接种法（一份/组）讲解解4.人体、物品中人体、物品中细菌菌检验（一份（一份/组）讲解解5.飞沫、空气中沫、空气中细菌菌检验（一份（一份/桌）桌）讲解解6.观察察细菌代菌代谢产物（物（讲解）解）7.第一次第一次试验汇报评讲第2页基基础培养基制培养基制备去筋膜黄牛肉去筋膜黄牛肉绞碎碎500g加入加入1000ml蒸蒸馏水水直接煮沸直接煮沸2小小时调整酸碱度至整酸碱度至pH 7.6过滤，补足失水足失水重新校正重新校正pH一次一次分装，高分装，高压灭菌，菌，15磅（磅（121.3）1520分分钟检菌如无菌如无细菌生菌生长（液体透明）即可（液体透明）即可应用用脱脂脱脂纱布布过滤，按百分比加入，按百分比加入1蛋白蛋白胨、0.5%NaCl，0.1%K2HPO4加加热溶解溶解补足水至足水至1000ml4浸泡浸泡过夜煮沸半小夜煮沸半小时第3页人体、物品中细菌检验人体、物品中细菌检验手衣发钱材料：普通平板材料：普通平板 （1份份/组）盖上，标识盖上，标识 ,置置 3737，18-24h18-24h后观察后观察。第4页飞沫、空气中细菌检验飞沫、空气中细菌检验材料：血平板材料：血平板（1份份/组）距口1520cm用力咳嗽三次置空气中（避日光照射）30分钟飞 沫沫空空 气气盖上，标识盖上，标识 ,置置 3737，18-24h18-24h后观察。后观察。第5页结果果观察察血平板血平板表皮葡萄球菌在血表皮葡萄球菌在血琼脂平板培养基上脂平板培养基上形成不溶血菌落。形成不溶血菌落。甲型溶血性甲型溶血性链球菌形球菌形成成溶血溶血现象也称象也称为甲型溶血甲型溶血现象或草象或草绿色溶血色溶血现象，属于不象，属于不完全溶血。完全溶血。金黄色葡萄球菌形成金黄色葡萄球菌形成溶血溶血现象也称象也称为乙型乙型溶血溶血现象，属于完全象，属于完全溶血。溶血。第6页细菌培养接种法菌培养接种法平板划平板划线法法菌种：混合菌液菌种：混合菌液材料：普通平板材料：普通平板用具：接种用具：接种环方法：分区划方法：分区划线1区区2区区3区区4区区原始区域第7页半固体培养基斜面培养基 细菌培养接种法细菌培养接种法-斜面接种、液体接种、半固体斜面接种、液体接种、半固体菌种：大肠杆菌或葡萄球菌斜面材料：斜面、液体、半固体培养基用具：接种环、接种针液体培养基第8页结果果观察察普通平板普通平板普通普通琼脂平板培养基上，大脂平板培养基上，大肠埃希菌形成菌苔和菌落生埃希菌形成菌苔和菌落生长现象。象。注意：大小、颜色、透明度、凸起度、表面干燥或湿润、光滑或粗糙、边缘是否整齐及血平板上溶血情况。第9页结果果观察察液体培养基液体培养基第10页结果果观察察斜面培养基斜面培养基琼脂斜面培养基上大肠埃希菌形成菌苔生长现象菌苔菌苔（mossy）指细菌生长繁殖后，在培养基 表面形成一层培养物第11页结果果观察察半固体培养基半固体培养基1、扩散生长：含有动力细菌,可见培养物扩散和培养基变混浊。即有鞭毛细菌：由穿刺线向外扩散生长（羽毛状或云雾状）2、原位生长：没有动力细菌，可见培养物没有扩散，培养基依然澄清。即即无鞭毛细菌：沿穿刺线生长 2 1 1 2第12页细菌代谢产物观察细菌代谢产物观察 细菌酶不一样，对营养物质分解能力不一样，产生代谢产物也不一样。常见：糖发酵试验吲哚（indol）试验甲基红（methyl red）试验VP（Voges-Proskauer）试验枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验尿素酶试验 硫化氢试验第13页糖糖发酵酵试验不一样细菌分解糖类能力和代谢产物不一样。第14页 甲基甲基红（methyl red）试验M -甲基红（methyl red）试验葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 甲基红 -葡萄糖丙酮酸 甲基红 +第15页吲哚（indol）试验I-吲哚（indol）试验色氨酸色氨酸吲哚玫瑰玫瑰吲哚 对二甲基氨基苯甲二甲基氨基苯甲醛 第16页枸枸橼酸酸盐利用利用试验C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验利用枸橼酸盐生长 +不能利用 -第17页 硫化硫化氢试验硫化氢试验（醋酸铅培养基）一些细菌分解含硫氨基酸，生成H2S，H2S遇铁盐（如硫化亚铁、醋酸铅等），则形成黑褐色硫化铁（铅）沉淀物，而呈黑色为（）。第18页 尿素尿素酶试验 产生氨使培养基变碱，指示剂显红色，为阳性。如：变形杆菌为阳性。第19页IMViC试验I-吲哚（indol）试验M -甲基甲基红（methyl red）试验V -VP（Voges-Proskauer）试验C -枸枸橼酸酸盐利用利用（citrate utilization）试验IMViC试验 I M Vi C试验 大大肠埃希菌埃希菌 +-产气杆菌气杆菌 -+IMViC试验：是是吲哚、甲基、甲基红、V-P以及枸以及枸橼酸酸盐利用利用试验四者合称。四者合称。惯用于用于肠道杆菌判定道杆菌判定。第20页试验小结试验小结1、三类培养基液体培养基用于增菌；均匀混浊、沉淀、表面生长 半固体培养基观察动力；保留菌种（6个 月）；穿刺线，扩散生长 固体培养基分离纯化；保留菌种（1个月）菌落、菌苔2、IMViC试验第21页第三次第三次试验课内容内容1、热力力对细菌和芽胞菌和芽胞杀菌作用菌作用2、紫外、紫外线杀菌作用菌作用3、惯用化学消毒用化学消毒剂杀菌作用和抗生素敏感菌作用和抗生素敏感试验4、耐、耐药性性变异；异；5、细菌鞭毛菌鞭毛变异；异；6、高、高压灭菌器使用；菌器使用；7、细菌判定程序；菌判定程序；8、全自、全自动微生物分析微生物分析仪基本原理及基本原理及简单操作步操作步骤第22页