DB62∕T 4805-2023 家畜冷冻精液生产技术规程(甘肃省).pdf

ICS 65.020.30CCS B 43B62甘 肃 省 地 方 标 准DB62/T 48052023家畜冷冻精液生产技术规程Technical code of practice for frozen semen production of livestock2023-09-20 发布2023-10-20 实施甘肃省市场监督管理局 发布DB62/T 48052023*I-1刖 B本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。本文件由甘肃省畜牧业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：庆阳市农业科学研究院、正宁县畜牧兽医站。本文件主要起草人：施海娜、梁万鹏、梁永虎、苏涛龙、耿智广、李世恩、刘雨田、朱正生、张金 霞、徐振飞、宋敏、赵凤妮、李菲菲。本文件由庆阳市农业科学研究院负责解释。IDB62/T 48052023家畜冷冻精液生产技术规程1范围本文件规定了家畜冷冻精液生产的种公畜要求、精液采集、精液处理和存储运输等方面的技术要求。本文件适用于牛、羊、马、驴等家畜冷冻精液的生产，其它可参照执行。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。NY/T 1234牛冷冻精液生产技术规范NY/T3186羊冷冻精液生产技术规程NY/T 3796马和驴冷冻精液3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4种公畜要求4.1种公畜的要求：牛按照NY/T 1234的规定执行，山羊按照NY/T 3186的规定执行，马和驴按照 NY/T 3796的规定执行。4.2体型外貌和生产性能符合品种特性且具备特级、一级标准，无疫病。5采精准备5.1 器械准备采精器械（采精外壳、内胆、一次性过滤采精袋、不锈钢保温集精杯、集精管）、离心机、移液器（量程BL、20|iL、5mL）、精液冷冻架、磁力搅拌器、水浴锅、高压灭菌锅、干燥箱、冷藏冷冻箱、长柄镶子、生物显微镜、恒温电热板、液氮罐、家畜用密度仪、精液质量分析系统、立式平衡柜、灌装 打印一体机、程序冷冻仪、生物安全柜。5.2 试剂耗材准备稀释剂、蒸镭水、凡士林、生理盐水、液氮、过滤采精袋、烧杯（100mL、200mL）.量筒（10mL、50mL）、量杯（100mL.200mL）、细管（0.25mL/剂、0.5mL/剂）、指型管、镶子、剪刀、水银温度 计、保温瓶、无菌纱布、无菌纱布袋、载玻片、盖玻片、滤纸、玻璃棒、喷壶、毛巾、标签纸、记号笔、细绳。1DB62/T 480520235.3 冷冻稀释液配置将冷冻稀释剂按要求稀释，用磁力搅拌器搅拌混匀，置于37.5。（3水浴锅中备用。5.4 种公畜调教5.4.1 种公畜采精前应用诱导的方法使其具有充分的性欲。5.4.2利用发情母畜或假台畜对种公畜进行调教，使其建立条件反射。5.5假阴道的安装牛、山羊假阴道包括假阴道外壳、内胆、乳胶三角漏斗、集精管，马、驴的假阴道包括假阴道外壳、内胆、集精杯、保温套和一次性过滤采精袋。假阴道用75%的酒精棉球擦拭消毒，无消毒剂残留后注人 38.5。（339.5。（3左右温水约500mL,假阴道内胆壁温度保持在38.5。（339.5。口充入气体使假阴道内胆壁 呈三角形后拧紧充气阀门。并用消毒纱布将假阴道包裹好，放置于42.5。（3的恒温箱内备用。6精液采集6.1 采精场所应保持安静、清洁卫生，地面防滑，并有护栏等安全保护设施。6.2 种公畜体表应清洁卫生，刷洗干净外阴部位，如阴毛过长时应适度修剪。包皮确需冲洗的，冲洗 干净30mm后才可进行采精操作。6.3 将采精用具有规则地摆放在操作台上，盛装润滑剂的烧杯每次使用前用水煮沸消毒后置于37.5兆 水浴锅内待用。6.4 采精前将假阴道从恒温箱中取出，在假阴道内胆前端三分之一处均匀涂抹少量润滑剂（凡士林与 液体石蜡1:1）,牛、山羊假阴道后端套入乳胶三角漏斗并固定好，在漏斗的后端安装上集精管，集精 管可套装有35t温水的平底塑料瓶并套上保温套。马、驴的假阴道后端安装集精杯并套好保温套。6.5采精结束后应及时清扫冲洗干净场地。7精液处理7.1 精液预处理马、驴的鲜精需用4层医用纱布过滤，记录采精量后将集精管置于37.5 C的水浴锅中（牛、山羊不 需此步骤）。7.2 鲜精品质正常精液色泽呈乳（灰）白色或淡黄色，有轻微的腥味。7.3 鲜精评定要求7.3.1镜检采用家畜密度仪或显微镜进行精液品质评定。7.3.2鲜精活力（牛0.7、山羊N0.65、马20.6、驴0.65）,冷冻后活力（牛三0.4、山羊三0.35、马力0.35、驴N0.35）,且冷冻后每剂有效精子数（马、驴：0.5mL/剂15.0对07,牛、山羊：0.25mL/剂 三5.0 x106）为合格者，精子畸形率W0.15。7.4 离心2DB62/T 48052023马、驴：按1:1的比例向原精液中加入稀释液进行预稀释，放置lOmin,将吸管放入离心管底部，注 入2mL的离心垫，按lOOOrpm离心20mhi（不使用离心垫，则按600rpm800rpm,离心lOmin）,去掉上 清液，去除离心垫。牛、山羊精液不需要离心。7.5 稀释马、驴参照附录A进行稀释量计算，牛、山羊按照原精液量的10倍稀释，稀释液沿杯壁缓慢加入精 液中，轻轻摇匀后将盛精液的烧杯放入37.5P水浴锅中水浴10mm。7.6 稀释后镜检稀释后的精液按照7.3的要求和方法进行镜检，活力合格者进行灌装。7.7 精液灌装、打印及平衡将稀释并检测合格的精液，少量生产者采用人工吸入细管，批量生产者采用灌装打印一体机进行灌 装、打印。打印封装好的细管平铺于精液冷冻架，再将精液冷冻架置于立式平衡柜进行平衡，平衡时间 为 2.5h 3.0h。7.8 平衡后镜检平衡后的精液按照7.3的要求和方法进行镜检，活力合格者进行冷冻。7.9 精液冷冻7.9.1简易冷冻法将冷冻架放在泡沫箱内，在箱内倒入一定量的液氮，液氮面低于冷冻架2cm,将平衡后经检测合格 的精液细管排列到保温箱中的冷冻架上，让温度从4。（3降到-80。时间必须控制在2mm,随后缓慢降温，在-110空-130笛的温度下熏蒸冷冻8mm10mm,最后将精液细管全部浸入液氮中（应符合附录B的要 求、适用于科研院所地方优良品种保护、小型养殖企业良种快速扩繁）。7.9.2批量程序化冷冻法批量冷冻生产使用程序冷冻仪，牛按照NY/T 1234的规定执行，山羊按照NY/T3186的规定执行，马 和驴按照NY/T 3796的规定执行。8解冻后镜检8.1取一支细管冻精快速浸入37.5。（3水浴锅中并轻轻晃动，待溶解后立即取出，用吸水纸或纱布擦干 水珠，剪去超声波封口端，滴10皿精液于载玻片上进行镜检。8.2马、驴、山羊冻精活力0.35为合格，牛冻精活力0.4为合格（镜检程序见7.3）。9标记标明品种、供体号、生产单位和生产日期，以汉语拼音缩写标明种公畜品种、耳号及生产日期，例：ZSN 05 2023 06 01（译为：早胜牛5号2023年06月01日生产）。10存储和运输DB62/T 48052023将制成的冻精装入指型管中，指型管装入经标识的无菌纱袋，最后浸入液氮罐中保存。储存、运输 时随时查看罐内液氮量并及时添加，确保冻精纱布袋始终浸入液氮面以下。在进行长距离运输过程中，液氮罐口密封牢固，严防液氮罐颠倒。搬运液氮罐时要轻拿轻放，避免液氮罐发生碰撞。4DB62/T 48052023附录A（资料性）不同活力精液稀释量计算方法对于0.5mL细管，实际每支细管有0.4mL左右精液，要求每支细管的有效精子为0.50亿个，则不同冷 冻后精子活力的目标密度如表A.1所示。表A.1稀释量计算冻后活力每支精子数（0.50亿/冻后活力）每mL精子数（每支精子数/剂量0.40）0.301.704.200.351.403.600.401.303.100.451.102.800.501.002.50注：示例：冻后活力为0.3时，冷冻稀释液添加量=原精密度x采精量mL/4.20亿5DB62/T 48052023附录B（规范性）简易熏蒸法示例图图B.1为简易熏蒸法示例图。移动吊架可以控制冷冻架与泡沫箱内液氮的距离,从而控制冻精温度。图B.1简易熏蒸法6