DB12_T 1067-2021 淡水小球藻生产技术规程.docx

ICS 65.020.99CCS B 3912天津市地方标准DB12/T 10672021淡水小球藻生产技术规程Technical regulations for production of freshwater Chlorella sp.2021 - 08 - 16 发布2021 - 09 - 16 实施天津市市场监督管理委员会发 布DB12/T 10672021前言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由天津市农业农村委员会提出并归口。本文件起草单位：天津市农业科学院。本文件主要起草人：张峰峰、谢凤行、周可、赵琼、李瑞环、赵玉洁、孙海波、王姝、张越、高晶琳、张新建。IDB12/T 10672021淡水小球藻生产技术规程1范围本文件规定了淡水小球藻（Chlorella sp.）培养的环境、设备、水、培养方法、采收及注意事项。本文件适用于淡水小球藻生产。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 5749生活饮用水卫生标准SL 733内陆水域浮游植物监测技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1原藻种the original microalgae species由单藻落分离纯化，并在固体斜面培养基上繁殖保存的藻种。3.2液体藻种the liquid microalgae species原藻种在固体平板培养基上活化，挑取单藻落接种至装有灭菌液体培养基的透明容器中，光照培养的藻种。4生产用水和设施设备4.1生产用水生产用水应符合地表水环境质量标准GB 5749中水质要求。4.2设施设备4.2.1藻种保藏室放置冰箱、冰柜，保存原藻种的房间。4.2.2藻种培养室进行培养基的配制和藻种的保种、培养及检查等操作的房间。配有分光光度计、电子天平（精度为0.01 g）、光学显微镜（1000×）、照度计（精度为0.1 lx）超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、恒温光照培养箱等。4.2.3规模生产车间1小球藻细胞密度1×10   cells/mL，其他藻类密度0.1，即为合格藻种。DB12/T 10672021进行藻液规模培养。配有光照设备和不同容量的透明发酵容器等。5生产技术流程5.1生产流程生产流程应按附录A执行。5.2藻种质量用于培养的藻种应有藻种鉴定报告或藻株来源相关信息。规模生产之前需检测藻种的细胞密度和纯度，不能有其他藻污染，藻细胞密度1×107 cells/mL，利用平板涂布法或计数框计数法测定藻细胞密度，计数框计数法应按SL 733中6.4的规定执行。5.3培养基小球藻液体培养基配方见附录B。保种固体培养基和计数培养基为在液体培养基中加入20 g/L琼脂粉。5.4灭菌消毒保种斜面培养基，生产液体藻种培养基以及计数培养基采用高压蒸汽灭菌，灭菌条件为110 115 ，0.1 MPa0.15 MPa，灭菌10 min15 min。规模培养容器用10 mg/L20 mg/L高锰酸钾溶液或有效氯浓度为0.10.3次氯酸钠溶液浸泡12h24 h。消毒后，用清水洗净。检查无杂藻杂物后，加水和培养基。也可加入水和培养基后进行高压蒸汽灭菌，灭菌条件为110 115 ，0.1 MPa0.15 MPa，灭菌10 min15 min。5.5液体藻种培养5.5.1容器容器为200 mL500 mL透明玻璃瓶，可高压蒸汽灭菌。5.5.2培养条件从斜面培养基接种原藻种到液体培养基中，光照强度3 000 lx5 000 lx，光照周期14L:10D，培养温度20 25 ，静置培养7 d10 d。5.5.3质量检测配制计数培养基，利用平板涂布法测定小球藻细胞密度及纯度。75.6规模培养5.6.1容器³³容器容积控制在0.2 m 2 m ，高度100 cm。选用透光性强的塑料桶、塑料袋、玻璃缸等适合的培养容器。5.6.2接种量按培养体积的10%20%接种液体藻种。2利用平板涂布法测定小球藻细胞密度，藻细胞密度1×10  cells/mL，其他藻类密度1%即为合格。DB12/T 106720215.6.3光照光照强度4 000 lx20 000 lx。5.6.4温度温度为15 30 ，最适培养温度为20 25 。5.6.5培养方式规模培养应适当补充空气，充气量应大于培养容积的1%。5.6.6培养周期最适培养条件下，一个培养周期为7 d10 d。5.7生长监测每天采样监测，用计数框计数法或光密度法计算藻细胞密度，观察污染情况。5.8污染控制在培养的生产过程中，应注意避免污染，定期检查藻细胞的生长状况，如发现有黄化、黑化、浮游动物或其他藻类污染，应终止培养，清洗消毒，重新接种。5.9质量检测75.10后处理藻液培养完毕，直接分装。6生产记录6.1生产、加工过程记录应记载藻种来源、培养日期、培养时间、灌装日期、藻液颜色、藻细胞密度、温度等。6.2培养基采购、使用记录应记载培养基进货日期、名称、规格、批号、数量、供货商、索证情况、保质期限、验收人记录、培养基使用量等。6.3记录保存生产记录应保存不少于2年。7储存分装后的藻液应贮存在通风、干燥、清洁的仓库，仓库内无有害气体、易燃易爆物品及有腐蚀性的化学物品，远离热源。3DB12/T 10672021A                    A附录A（规范性）淡水小球藻生产流程图淡水小球藻生产流程见图A.1图A.1 淡水小球藻生产流程4DB12/T 10672021B                    B附录B（资料性）淡水小球藻培养基淡水小球藻培养基配方如下：NaNO31.5 g；K2HPO40.04 g；··MgSO4 7H2O 0.075 g；CaCl2 7H2O 0.036 g；Na2CO30.02 g；柠檬酸0.006 g；柠檬酸铁铵0.006 g；EDTA0.001 g；微量元素溶液 A5  1 mL；氨苄青霉素 (终浓度)  50 g/mL；蒸馏水/自来水1 L。其中，微量元素溶液 A5 配方：H3BO32.86g；····MnCl2 4H2O 1.81g；ZnSO4 7H2O 0.222g；Na2MoO40.39g；CuSO4 5H2O 0.079g；Co(NO3)2 6H2O0.049g；蒸馏水1L。5