T_GDATCM 0006-2023 柴胡（柴胡）煮散饮片.docx

学兔兔标准下载ICS 11.120.99CCS C273团体标准T/GDATCM 00062023柴胡（柴胡）煮散饮片Chaihu(Chaihu)zhusanyinpian2023-09-22 发布2023-12-22 实施广东省中药协会发布学兔兔标准下载T/GDATCM 00062023目次前 言 . III引言 . IV1 范围 . 12 规范性引用文件 . 13 术语和定义 . 14 规范性技术要素 . 1附录 A . 4附录 B . 5参 考 文 献 . 12I学兔标准兔下载学兔兔标准下载T/GDATCM 00062023前言本文件按照GB/T1.12020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由广东省中医院（广东省中医药科学院）提出。本文件由广东省中药协会归口。本文件起草单位：广东省中医院（广东省中医药科学院）、中山市中智药业集团有限公司。本文件主要起草人：廖保生、宫璐、苏贺、张丹纯、白俊其、张靖、丘小惠、徐文、黄娟、黄志海、陈炜璇、陈勇军。III学兔兔标准下载T/GDATCM 00062023引言柴胡为伞形科植物柴胡 Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡 Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根。具有疏散退热，疏肝解郁，升举阳气之功效。用于感冒发热，寒热往来，胸胁胀痛，月经不调，子宫脱垂，脱肛。产于我国东北、华北、西北、华东和华中各地，生长于向阳山坡路边、岸旁或草丛中。本文中柴胡（柴胡）煮散饮片为伞形科植物柴胡 Bupleurum chinense DC. 干燥根炮制成饮片后的加工品。传统煮散一般为捣碎至粗颗粒，宋代太平惠民和剂局方中规定，煮散剂服法上多注“为粗末”，然而并未详细规定其颗粒度大小。在充分参考历代煮散基本要求和现代煮散研究文献的基础上，特起草了柴胡(柴胡)煮散饮片标准。IV学兔兔标准下载T/GDATCM 00062023柴胡（柴胡）煮散饮片1  范围本文件规定了柴胡（柴胡）煮散饮片的检测标准。本文件适用于柴胡（柴胡）煮散饮片的质量控制。2  规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。（1）中华人民共和国药品管理法（2）中华人民共和国中医药法（3）中华人民共和国药典（4）国家药品标准工作手册（5）广东省中医药条例（6）GB/T6003.1 2012 试验筛 技术要求和检验（7）中药煮散饮片质量标准研究指导原则和技术要求（试行）3  术语和定义3.1 来源伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.干燥根炮制成饮片后的加工品。3.2 中药煮散饮片中药煮散饮片是将中药饮片按规定制成一定大小的颗粒状物，供调配或医院制剂使用。4  规范性技术要素【制法】  取柴胡，制成粒度为0.810.0mm的煮散饮片，即得。【性状】  本品呈不规则小块或颗粒形，粒径0.810.0mm，表面黄棕色至深棕色，气微，味苦。【鉴别】  （1）本品粉末灰棕色。木纤维较多，成束或散在，无色或淡黄色。直径817µm。导管主为网纹、双螺旋纹导管，偶见网状具缘纹孔导管。薄壁细胞单个散在或数个成群。呈长圆形、类长1兔学兔标准下载T/GDATCM 00062023方形或长条形，直径1446µm，长23168µm，壁稍厚，纹孔大小不一，有的甚大，横长排列，孔沟明显。（2）薄层色谱鉴别或 DNA 条形码鉴定薄层色谱鉴别  取本品粉末0.5g，加甲醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取北柴胡对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取柴胡皂苷a对照品、柴胡皂苷d对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2020年版通则0502）试验，吸取上述三种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（821）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。DNA 条形码鉴定模板 DNA 提取 取本品适量，研成细粉，用植物基因组提取试剂盒提取供试品模板 DNA 溶液，置-20保存备用。另取北柴胡对照药材适量，同法制成对照药材模板 DNA 溶液，置-20保存备用。PCR 反 应ITS2 条 形 码 通 用 引 物 ： ITS2F （ 5-ATGCGATACTTGGTGTGAAT -3 ） 和 ITS3R（5-GACGCTTCTCCAGACTACAAT -3）。PCR 反应体系：在200l离心管中进行，反应总体积为25l，反应体系包括2×Taq PCR Mix 12.5l，通用引物（10 mol/L）各1l，模板（基因组DNA0.1g）2l，无菌超纯水8.5l。将离心管置PCR仪，ITS2条形码PCR反应参数：94 预变性5分钟，循环反应40次（94 30秒，56  30秒，72  45秒），延伸（72 ）10分钟。另取无菌超纯水，同法上述PCR反应操作，作为空白对照。电泳检测  照琼脂糖凝胶电泳法（中国药典2020年版四部通则0541），凝胶浓度为1.5%，凝胶中加入核酸凝胶染色剂GelRed；供试品、对照药材与空白对照PCR反应溶液的上样量分别为5l，DNA分子量标记上样量为2l（0.5g/l）。电泳结束后，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外透射仪上检视。供试品及对照药材凝胶电泳图谱中，在约500bp同一位置处应有一条DNA条带，空白对照无条带。测序  在紫外光灯下迅速切取500bp处目的条带所在位置的凝胶，采用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒进行纯化。以PCR扩增引物作为测序引物，使用DNA测序仪对目的条带进行双向测序。中药材DNA条形码序列获得 对双向测序峰图应用有序列拼接功能的专业软件进行序列拼接，去除引物区，并使序列方向与PCR扩展正向引物方向一致。结果判定  将获得的序列与北柴胡基原植物柴胡B. chinense的ITS2条形码标准序列比对，应在变异范围内。柴胡的ITS2序列比对后长度为233bp，有23个变异位点，分别为10位点T-C变异，17位点T-C变异，31位点A-T变异，33位点A-G变异，39位点T-C变异，41位点G-T变异，49位点T-C变异，57位点A-T-C-G变异，58位点C-G变异，62位点A-T-C-G变异，63位点A-T变异，64位点G-T变异，107位点C-G变异，108位点A-T-C-G变异，118位点G-T变异，131位点T-C变异，143位点G-A变异，147位点A-T-C-G变异，157位点G-T变异，162位点A-C变异，183位点C-G变异，193位点A-C变异，228位点G-A变异。柴胡B. chinense的ITS2标准序列特征如下（图1，扫描二维码可读取核酸序列）：2兔学兔标准下载T/GDATCM 00062023图 1 柴胡（柴胡）煮散饮片 ITS2 标准序列特征图【检查】粒度  照粒度检查法（附录 A）测定，不能通过 10.0mm 筛（GB/T6003.1 2012 R20）的不得过 2.0%，能通过 800µm 筛（GB/T6003.1 2012 R20）的不得过 5.0%。水分  不得过10.0%（中国药典2020年版通则0832第二法）。总灰分  不得过8.0%（中国药典2020年版通则2302）。酸不溶性灰分  不得过3.0%（中国药典2020年版通则2302）。【浸出物】 照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（中国药典2020年版通则2201）测定，用乙醇作溶剂，不得少于12.0%。【含量测定】  照高效液相色谱法（中国药典2020年版通则0512）测定。色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为210nm。理论板数按柴胡皂苷a峰计算应不低于10000。时间（分钟）  流动相A（%） 流动相B（%）0502590751050559010对照品溶液的制备  取柴胡皂苷a对照品、柴胡皂苷d对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柴胡皂苷a 0.4mg、柴胡皂苷d 0.5mg的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备  取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25ml，密塞，30水温超声处理（功率200W，频率40kHz）30分钟，滤过，用甲醇20ml分2次洗涤容器及药渣，洗液与滤液合并，回收溶剂至干。残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法  分别精密吸取对照品溶液20l与供试品溶液1020l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含柴胡皂苷a（C42H68O13）和柴胡皂苷d（C42H68O13）的总量不得少于0.40%。【性味与归经】  辛、苦，微寒。归肝、胆、肺经。【功能与主治】疏散退热，疏肝解郁，升举阳气。用于感冒发热，寒热往来，胸胁胀痛，月经不调，子宫脱垂，脱肛。【用法与用量】  310g，遵医嘱酌情加减。【贮藏】  密闭，置通风干燥处，防蛀。3学兔兔标准下载T/GDATCM 00062023附录 A（资料性）粒度检查法称取煮散饮片供试品 100g，精密称定，照粒度及粒度分布测定法（中国药典 2020 年版通则 0982第二法）测定，置最上层 10.0mm 筛（GB/T6003.1 2012 R20）上，下层 800µm 筛（GB/T6003.1 2012 R20），最下层配有密合的接收容器，筛上加盖，保持水平状态过筛，左右往返，边筛动边拍打 3 分钟。分别取不能通过 10.0mm 筛和能通过 800µm 筛的颗粒及粉末，称定重量，分别计算所占比例。4学兔兔标准下载T/GDATCM 00062023附录 B（资料性）研究性资料别名  地熏、茈胡、山菜、茹草、柴草1“神农本草经： 茈胡，今出近道，状如前胡而强。长安及河内阈有之。此茈胡，疗伤寒第一用。”本草备要：“柴胡，外感生用，内伤升气酒炒用根，中行下降用梢，有汗咳者蜜水炒。”药性论：“主时疾内外热不解。”本草纲目：“治阳气下陷，平肝、胆、三焦、包络相火，及头痛、眩晕，目昏、赤痛障翳，耳聋鸣，诸疟，及肥气寒热，妇人热入血室，经水不调”本草正义：“柴胡主治，止有二层；一为邪实，则为外邪之在半表半里者，引而出之，使达于表而外邪自散；一为正虚，则为清气之陷于阳分者，举而升之，返其宅而中气自振。”本草从新：“主宣畅气血，散结调经， 治伤寒邪热，痰热结实，心下烦热，诸症寒热，头眩呕吐，目赤，胸痞胁痛，口苦耳聋。”【来源】  中国药典2020 年版一部收载的柴胡为伞形科植物柴胡 Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡 Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根。本煮散饮片所使用的柴胡原料为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根。即习称“北柴胡”者。【原植物】多年生草本，高 5085cm。主根较粗大，棕褐色，质坚硬。茎单一或数茎，表面有细纵槽纹，实心，上部多回分枝，微作之字形曲折。基生叶倒披针形或狭椭圆形，长 47cm，宽 68mm，顶端渐尖，基部收缩成柄，早枯落；茎中部叶倒披针形或广线状披针形，长 412cm，宽 618mm，有时达 3cm，顶端渐尖或急尖，有短芒尖头，基部收缩成叶鞘抱茎，叶表面鲜绿色，背面淡绿色，常有白霜；茎顶部叶同形，但更小。复伞形花序很多，花序梗细，常水平伸出，形成疏松的圆锥状；总苞片23，或无，甚小，狭披针形，长 15mm，宽 0.51mm，3 脉，很少 1 或 5 脉；伞辐 38，纤细，不等长，长 13cm；小总苞片 5，披针形，长 33.5 mm，宽 0.61mm，顶端尖锐，3 脉，向叶背凸出；小伞直径 46mm，花 510；花柄长 1mm；花直径 1.21.8mm；花瓣鲜黄色，上部向内折，中肋隆起，小舌片矩圆形，顶端 2 浅裂；花柱基深黄色，宽于子房。果广椭圆形，棕色，两侧略扁，长约3mm，宽约 2mm，棱狭翼状，淡棕色。花期 9 月，果期 10 月。产于我国东北、华北、西北、华东和华中各地，生长于向阳山坡路边、岸旁或草丛中。【采收加工】秋季待地上部分枯萎后，选晴天，先割去地上茎叶，再挖出根，洗净泥土，晒干或5060烘干。【制法】 传统煮散一般为捣碎至粗颗粒，宋代太平惠民和剂局方中规定，煮散剂服法上多注“为粗末”，然而并未详细规定其颗粒度大小。在充分参考历代煮散基本要求和现代煮散饮片研究文献的基础上，比较了煮散饮片与原饮片的煎煮得率差异，实验设计与结果如下：取柴胡原饮片，制成柴胡（柴胡）煮散饮片。称取柴胡原饮片及煮散饮片各 100g，平行 3 次，采用中药标准汤剂煎煮法进行提取，分别加 7 倍量水浸泡 30min，煮沸后保持 30min，滤过；滤渣加 6 倍量水煎煮 30min，合并滤液，减压浓缩至 800ml5下准标兔学兔载T/GDATCM 00062023药液。精密量取药液 100ml，蒸干，得干浸膏，称重，计算出膏率。精密吸取上述原饮片和煮散饮片提取溶液 100ml，药液冷却，边搅拌边加入 95%乙醇，使溶液成70%浓度，静置 12 小时。过滤分离出上清液，蒸干。以干燥品计算饮片中水煎后醇溶物的含量。结果与原饮片比较如表 1 所示，制成煮散饮片的出膏率提升了 36.39%，醇溶率提升了 69.12%。为减少中药煮散饮片临方炮制的损耗，提升药材综合利用率，在满足医院临床调剂自动化、标准化的前提下，在中药煮散饮片质量标准研究指导原则和技术要求（试行）的规格范围内，设定本煮散饮片炮制规格为粒径 0.810.0mm。表 1 原饮片及其煮散饮片出膏率和醇溶率结果比较项目样品规格MeanRSD提升比例出膏率原饮片8.70%5.39%36.39%煮散饮片11.86%7.37%醇溶率原饮片2.41%7.76%69.12%煮散饮片4.07%17.06%【性状】  本品呈不规则小块或颗粒形，表面黄棕色至深棕色，气微，味苦。柴胡（柴胡）煮散饮片  根据样品实物描述，见图 1。图 1 柴胡（柴胡）煮散饮片实物图【成分】根含挥发油、戊酸（pentanoic acid)、已酸（hexanoic acid)、庚酸（heptanoic acid)、辛酸（octanoic acid)、壬酸（nonanoic acid)、2-壬酸（nonanoic acid)、-辛内酯（-octalactone)、-癸内酯（-decalactone)、丁香油酚（eugenol)、-十一烷酸内酯（-undecalactone)、百里香酚（thymol)、玛索依内酯（messoia lactone)、已酸香苯醛酯（vanillin acetate)、柠檬烯（limonene)、月桂烯（myrcene)、右旋香荆芥酮（carvacrone)、胡薄荷酮（pulegone)、桃金娘醇（myrtenol)、-松油醇（-terpineol)、芳樟醇（linalool)、正十三烷（n-tridecane)、-荜澄匣油烯（-cubebene)、柴胡皂苷（saikosaponin)a、d。【鉴别】（1）本品粉末显微特征鉴别（OLYMPUS 显微成像系统 CX-40），见图 2。6兔兔标学准下载T/GDATCM 00062023木纤维导管导管薄壁细胞图 2 柴胡（柴胡）煮散饮片粉末显微特征图（2）以中国药典 2020 版一部柴胡项下薄层色谱鉴别方法进行鉴别。见图 3。溶剂前沿T:25RH：69%123456789101.对照品； 2.20200501； 3.20200502； 4.20200503； 5.20200504；6.20200505 ；7.20200506； 8.20200507； 9.20200508；10.对照药材图 3 柴胡（柴胡）煮散饮片薄层色谱图结果表明，柴胡（柴胡）煮散饮片供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（3）DNA 条形码鉴定试验过程参照中国药典2020 版四部 9107“中药材 DNA 条形码分子鉴7下准标兔学兔载T/GDATCM 00062023定法指导原则”。试验条件如正文。扩增得到的序列采用隐马尔科夫模型（Hidden Markov model, HMM）进行注释，得到 ITS2 序列。本标准通过搜集多产地多批次柴胡样本，进行多次平行试验，构建了可靠的柴胡 ITS2 条形码标准序列，同时表明了方法适用性良好。柴胡 B. chinense 标准序列构建。在全国柴胡典型分布区收集柴胡（柴胡）基原植物样本 5 份、对照药材 2 份、药材样本 67 份，共 74 份样本进行柴胡（柴胡）标准序列构建（表 1），基原植物样本经中国医学科学院药用植物研究所植物分类专家林余霖研究员鉴定。试验共获得柴胡（柴胡）ITS2 序列73 条，进行多序列比对分析。柴胡 B. chinense 的 ITS2 变异位点情况如正文，共鉴定 30 种单倍型序列（图 4），其中主导单倍型序列（单倍型序列 1）即为标准序列。表 1 柴胡（柴胡）样本信息样本类型来源编号批次数四川省江油市敬元乡、四川省广基原植物元市青川县马公乡、陕西省商洛市商周区孝义镇、吉林省通化市CH35-39                                 5东昌区对照药材中国食品药品检定研究院FDC332、120992-2015092AY551293、CH19-21、CH23-25、CH29、CH31、CH46-48、DQ285448-52 、 EU001334 、 FHYL354 、 FHZ47-48 、药材吉林通化、广西玉林中药港、安徽亳州药市、神威药业FJ561306-09 、 GQ434690 、 GU570615 、 HAP00315 、HM114229-33、HQ687912-17、JN800307-19、JQ794892-93、67JQ794900-01、JQ794905、JQ794907-08、JQ966121-22、JQ966125-26、S0413、S0502、S0655、S0727柴胡 2 种基原 ITS2 序列比对分析。在全国柴胡典型分布区收集柴胡（狭叶柴胡）基原植物样本20 份，经中国医学科学院药用植物研究所植物分类专家林余霖研究员鉴定。试验共获得柴胡（狭叶柴胡）ITS2 序列 20 条，进行多序列比对分析，构建标准序列。狭叶柴胡 B. scorzonerifolium ITS2 序列比对后长度为 233bp，有 8 个变异位点，分别为 5 位点 A-T 变异，31 位点 G-A 变异，41 位点 G-A 变异，57 位点 A-G 变异，106 位点 C-T 变异，184 位点 T-C 变异，194 位点 T-A 变异，228 位点 G-C 变异，共鉴定 4 种单倍型序列（图 4），主导单倍型序列见图 4。将柴胡 2 种基原的所有 ITS2 单倍型序列一起进行多序列比对分析（图 4），发现 9、141、195 位点可将柴胡（ATT）和狭叶柴胡（TGG）区分开。表 2 柴胡（狭叶柴胡）样本信息样本类型来源编号批次数基原植物黑龙江省绥化市明水县通达镇永久村、黑龙江省绥化市明水县通达镇引龙河村、黑龙江省大庆市林甸县花园乡七心屯村、黑龙江省肇东市四方山农场、内蒙古呼和浩特武川县二道凹村8CH41-45、DQ285465、EU001347、GU570604、GU570616 、GU570620、 GU570623 、HAP00316、HM114235、 HM114236、 HQ687958、 HQ687959、HQ687960、 JF718838、 JQ794896、 JQ79491320兔学兔标准下载T/GDATCM 00062023图 4 柴胡 2 个基原所有单倍型序列比对图供试品 DNA 条形码鉴定。试验获得柴胡（柴胡）煮散饮片供试品 ITS2 序列 16 条，与柴胡 B. chinense标准序列比对相一致（图 5）。1020304050607080. . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . |Bupleurum chinenseCGTA A A GCA T TGCCCC TCCGCA GC TCGC TCA A A GCGA GTCGT TGC TGT TCGGGGGGA CGGA A A GTGA CC TCCCGTGCC TC20201101-1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201101-2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201102-1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201102-2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201103-1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201103-2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201104-1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201104-2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201105-1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201105-2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201106-1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201106-2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201107-1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201107-2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201108-1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201108-2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .90100110120130140150160. . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . |Bupleurum chinenseGTCGTGCGGC TGGT T TA A A A GA GA GTCA CCGGA GA TCGGA A A A CGCA A CA T TGGTGGA A GTCGT TA CGCA CC TC T TGCCA20201101-1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20201101-2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .