T_JYH 003-2023 平邑金银花 药用.docx

学兔兔标准下载ICS 65.020.01CCS B 38T/JYH团体标准T/JYH 0032023平邑金银花药用Pingyi JinyinhuaMedicinal2023 - 08 - 18 发布2023 - 09 - 18 实施山东省金银花行业协会发 布学兔兔标准下载T/JYH 0032023目次前言 . II1范围 . 12规范性引用文件 . 13术语和定义 . 14技术要求 . 14.1 感官要求 . 14.2 鉴别 . 24.3 理化指标 . 24.4 污染物限量 . 24.5 农药残留限量 . 34.6 易混淆品检查 . 3附录 A（规范性）金银花中水分测定 . 4附录 B（规范性）酚酸类、断马钱子酸含量测定方法 . 6附录 C（规范性）木犀草苷含量测定方法 . 9附录 D（规范性）易混淆品检查 . 12I学兔兔标准下载T/JYH 0032023前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东省金银花行业协会提出并归口。本文件起草单位：山东中医药大学、山东医药技师学院、平邑县农业农村发展服务中心、山东农业大学、山东省中医药研究院、临沂大学、山东中平药业有限公司、山东省九间棚生态科技有限公司、平邑县卫生健康局、平邑县中医医院。本文件主要起草人：张芳、张永清、于晓、郭庆梅、付晓、王建华、林慧彬、李佳、张龙霏、郭绍芬、许丽丽、杨寒冰、张利、廉士东、满艳艳、赵洪霞、徐中利。II项    目要    求检验方法外观花蕾呈棒状，上粗下细，略弯曲，表面密被短柔毛；开放者花冠筒状，先端二唇形；花萼绿色，先端 5 裂，裂片有毛。无霉变，无虫蛀。取适量样品平摊于白色瓷盘内，在自然光下观察外观、色泽，嗅其气味，尝其味道，检查杂质。学兔兔标准下载T/JYH 0032023平邑金银花药用1范围本文件规定了药用平邑金银花的检验方法、检验规则及技术要求。本文件适用于平邑金银花药材生产、流通以及使用过程中的质量评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 17924 地理标志产品标准通用要求国家药典委员会中华人民共和国药典2020版3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1金银花 Jinyinhua为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花。夏初开放前采收，干燥。3.2平邑金银花 Pingyi Jinyinhua山东省平邑县境内生产的金银花。4技术要求4.1感官要求应符合表1规定。表1感官要求1项目指标检验方法水分，g/100g                                                          12.0中华人民共和国药典2020 版四部（通则 0832 第三法减压干燥法）,附录 A总灰分，g/100g                                                     10.0中华人民共和国药典2020 版四部（通则 2302）酸不溶性灰分，g/100g                                        3.0中华人民共和国药典2020 版四部（通则 2302）绿原酸，g/100g                                                     1.5附录 B绿原酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和 4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的总量，g/100g                            3.8断马钱子酸 g/100g                                               1.0木犀草苷，g/100g                                                 0.052附录 C项目指标检验方法二氧化硫残留量，mg/kg                            150中华人民共和国药典2020 版四部（通则 2331）Pb，g/100g                                                   5中国药典2020 年版（通则 2321）Cd, mg/kg                                                     1As，mg/kg                                                     2Hg，mg/kg                                                     0.2Cu，mg/kg                                                     20项    目要    求检验方法气味、滋味气清香，味淡、微苦。取适量样品平摊于白色瓷盘内，在自然光下观察外观、色泽，嗅其气味，尝其味道，检查杂质。色泽表面黄白色或绿白色（贮久色渐深）大小长 2 cm3 cm，上部直径约 3 mm，下部直径约 1.5 mm杂质偶见叶状苞片，无其他正常视力可见外来杂质。标兔兔学准下载T/JYH 0032023表 1感官要求（续）4.2鉴别显微鉴别、薄层色谱、特征图谱应符合中华人民共和国药典2020版一部“金银花”的规定。4.3理化指标应符合表2规定。表2理化指标4.4污染物限量应符合表3规定。表3污染物限量2学兔兔标准下载T/JYH 00320234.5农药残留限量按照中华人民共和国药典2020 年版四部（通则 2341 农药残留量测定法）测定，不得检出（不得过定量限）33 种禁限用农药。33 种禁用农药名录见 2020 年版四部（通则 0212）。4.6易混淆品检查不得显与对照品和对照药材相一致的斑点。方法见附录 D。3学兔兔标准下载T/JYH 0032023AA附  录A（规范性）金银花中水分测定A.1原理在正常压力下，水的沸点是 100 ，而在较低的压力下，水的沸点会降低，这使得水分更容易挥发出来。在减压干燥法中，被干燥物质被置于一个密闭的容器中，容器内的压力被降低到 2.67 KPa（20mm Hg），使得水分从物质中挥发出来，被五氧化二磷吸收，根据被测物质减失的重量计算水分含量。A.2试剂和材料试剂和材料包括：a)  五氧化二磷(P2O5)：分析纯；b)  无水氯化钙(CaCl2)：分析纯。A.3仪器和设备仪器和设备包括：a)  减压干燥器：直径 30cm；b)  循环水真空泵；c)  干燥管；d)  培养皿；e)  称量瓶；f)  小型粉碎机；g)  国家标准 R40/3 系列二号筛。A.4分析步骤A.4.1样品粉碎取样品用粉碎机粉碎，过二号筛，备用。A.4.2减压干燥器取直径 12 cm 左右的培养皿，加入五氧化二磷干燥剂适量，铺成 0.5 cm 1 cm 左右的厚度，放入减压干燥器中。A.4.3测定法取样品粉末（过二号筛）2 g4 g，混合均匀，分别取 0.5 g1 g，置已干燥并称重的称量瓶中，精密称定，打开瓶盖，放入减压干燥器中，抽气减压至 2.67 KPa（20 mmHg）以下，并持续抽气 30 min，4学兔兔标准下载T/JYH 0032023室温放置 24 h。在减压干燥器出口连接无水氯化钙干燥管，打开活塞，待内外压一致，关闭活塞，打开干燥器，盖上瓶盖，取出称量瓶迅速精密称定重量，计算供试品中的含水量。A.5结果计算样品中的水分含量 X1，数值以%表示，按式（1）计算：(1)式中：X1样品中水分含量（%）；Mi样品重量（g）；W干燥后样品与称量瓶的重量（g）；M称量瓶的重量（g）；两份平行样品的平均值作为最终测定结果，结果保留两位有效数字。A.6精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不大于0.4%。5学兔兔标准下载T/JYH 0032023BB附  录B（规范性）酚酸类、断马钱子酸含量测定方法B.1原理B.1.1在一定的线性范围内成分的量与检测器响应成正比，即 W=fA,在多指标质量评价时，假设某样品种含有i个组分，fi=Wi/Ai（i=1,2,SK）式中Ai为组分峰面积，Wi为组分浓度，选择其中一个组分S为内参物，建立组分S与其他组分K之间的相对校正因子Fs/k=fs/fk=Ws/Wk （ Ak/As）,由此可导出Wk。B.1.2以绿原酸为参照物，计算其与3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、 4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、断马钱子酸的相对保留时间和相对校正因子，根据相对保留时间确定其他待测组分色谱峰，利用相对校正因子计算4种成分的含量。B.1.3四种成分易溶于一定浓度的甲醇、乙醇等极性溶剂，样品中的 4种成分用一定体积 75%甲醇提取，将提取液过滤后进入高效液相仪，经反相色谱分离后，由紫外检测器检测，采用一标多测法计算 4种成分的含量。B.2试剂和材料试剂和材料包括：a)  磷酸(H3PO4)：色谱纯；b)  乙腈(CH3CN)：色谱纯；c)  甲醇(CH3OH)：色谱纯；d)  水(H2O)：GB 6682 一级水；e)  绿原酸标准品：纯度98%；f)  绿原酸标准品溶液(0.25 mg/mL)：取绿原酸标准品适量，置棕色量瓶中，加 75%甲醇制成每 mL含 0.25mg 的溶液，即得。B.3仪器和设备仪器和设备包括：a)  高效液相色谱仪：附紫外检测器；b)  超声波清洗器；c)  离心机；d)  小型粉碎机；e)  国家标准 R40/3 系列四号筛。B.4分析步骤B.4.1样品粉碎取样品用粉碎机粉碎，过四号筛，置干燥器中备用。B.4.2样品溶液制备6时间（min）流动相 A（%）流动相 B（%）0492842592888122526888512152636851536378582151837408218405782771823待测成分（峰）相对保留时间校正因子断马钱子酸1.1081.5493,5-O-二咖啡酰基奎宁酸2.8790.8654,5-O-二咖啡酰基奎宁酸3.2260.782绿原酸1.0001.000准标兔学兔下载T/JYH 0032023取样品粉末（过四号筛）约 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 75%甲醇 50 mL，称定重量，超声处理（功率 500 W,频率 40KHz)60 min，放冷，再称定重量，用 75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过 0.22 m 滤膜，进行液相色谱分析。（注：样品溶液临用前制备，10 h 内测试完成）。B.4.3液相色谱参考条件液相色谱参考条件为:a)  色谱柱：C18 柱，4.6 mm×250 mm，5 m；b)  流动相：以 0.3%磷酸溶液为流动相 A，乙腈为流动相 B，按表 B.1 中的规定进行梯度洗脱；表B.1梯度洗脱程序c)  流速：1.0  mL/min；d)  柱温：30；e)  检测波长：240 nm；f)  进样量：样品与对照品溶液各 5 µL；g)  色谱分析：取标准品溶液和样品溶液注入高效液相色谱仪中，以绿原酸对照品为参照，以其相应的峰为 S 峰，计算 3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、断马钱子酸的相对保留时间，相对保留时间应在规定值的±5%范围以内；以参照物 S 峰面积为对照，分别乘以校正因子（Fs/k ），计算 3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、断马钱子酸的含量。B.5结果计算B.5.1相对保留时间和相对峰面积按表B.2的规定。表B.2一标多测用相对保留时间与校正因子7兔学兔标准下载T/JYH 0032023B.5.2待测组分样品中的待测成分的含量 X，数值以 g/100g 表示，按式（2）计算：(2)式中：X样品中待测成分的含量（g/100g）As供试品溶液中参照物质色谱峰峰面积；CS供试品溶液中参照物质质量浓度（mg/mL）；Ak供试品溶液中待测组分色谱峰峰面积；W-样品的重量（g）F(s/k)相对校正因子。两份平行样品的平均值作为最终测定结果，结果保留两位有效数字。B.6精密度绿原酸、断马钱子酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 2.8%，2.8%，2.8%，4.5% 。B.7色谱图在上述色谱条件下的色谱图见图 B.1、图 B.2。图B.1混合对照品色谱图图B.2供试品色谱图8学兔兔标准下载T/JYH 0032023CC附  录C（规范性）木犀草苷含量测定方法C.1原理根据木犀草苷易溶于 70%乙醇的理化特性，样品中的木犀草苷用一定体积 70%乙醇提取。过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，由紫外检测器检测，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。C.2试剂和材料试剂和材料包括：a)  冰醋酸(CH3COOH)：色谱纯；b)  乙腈(CH3CN)：色谱纯；c)  乙醇(CH3CH2OH)：分析纯；d)  水(H2O)：GB 6682 一级水；e)  木犀草苷标准品：纯度98%；f)  木犀草苷标准品溶液(40g/mL)：取木犀草苷对照品适量，精密称定，加 70%乙醇制成每 mL 含40g 的溶液，即得。C.3仪器和设备仪器和设备包括：a)  高效液相色谱仪：附紫外检测器；b)  超声波清洗器；c)  离心机；d)  小型粉碎机；e)  国家标准 R40/3 系列四号筛。C.4分析步骤C.4.1样品粉碎取样品用粉碎机粉碎，过四号筛，置干燥器中备用。C.4.2样品溶液制备取样品粉末约 2.0 g ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%乙醇 50 mL，称定重量，超声处理（功率 250 W ，频率 35 kHz）60 min，放冷，再称定重量，用 70%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密移取续滤液 10 mL，回收溶剂至干，残渣用 70%乙醇溶解，转移至 5 mL 量瓶中，加 70%乙醇定容至刻度，过 0.22  m 滤膜后，即可进行液相色谱分析。C.4.3液相色谱参考条件9时间（min）流动相 A（%）流动相 B（%）0151020908015302080304020308070学兔兔标准下载T/JYH 0032023液相色谱参考条件为：a)  色谱柱：C18 柱，4.6 mm×250 mm，5 m。b)  流动相：以乙腈为流动相 A，0.5%冰醋酸溶液为流动相 B，按表 C.1 中的规定进行梯度洗脱。表C.1梯度洗脱程序c)  流速：1.0  mL/min。d)  柱温：室温。e)  检测波长：350 nm。f)  进样量：对照品溶液与供试品溶液各 10  L。g)  色谱分析：取标准品溶液和样品溶液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以样品峰面积进行定量。C.5结果计算样品中的待测成分的含量 X，数值以 g/100g 表示，按式（3）计算：(3)式中：X样品中木犀草苷的含量，单位为克每 100 克（g/100g）；Cs木犀草苷标准品的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）；Ai样品中木犀草苷的峰面积；As标准品中木犀草苷的峰面积；W样品质量，单位为克（g）。两份平行样品的平均值作为最终测定结果，结果保留两位有效数字。C.6精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 5.6%。C.7色谱图在上述色谱条件下的色谱图见图 C.1、图 C.2。10学兔兔标准下载T/JYH 0032023图C.1木犀草苷标准色谱图图C.2金银花样品色谱图11兔学兔标准下载T/JYH 0032023DD附  录D（规范性）易混淆品检查D.1原理根据山银花中富含三萜皂苷，而金银花中不含或少含三萜皂苷的性质，以山银花对照药材及灰毡毛忍冬皂苷乙、灰毡毛忍冬皂苷甲、川续断皂苷乙 3 种三萜皂苷对照品作对照，采用薄层色谱法进行鉴定，要求金银花样品不得显与对照品及对照药材相一致的斑点。D.2试剂和材料试剂和材料包括：a)  甲酸(HCOOH)：分析纯；b)  甲醇(CH3OH)：分析纯；c)  正丁醇(CH3CH2CH2CH2OH)：分析纯；d)  氨水(NH3.H2O)：分析纯；e)  浓硫酸(H2SO4)：分析纯；f)  乙醇(CH3CH2OH)：分析纯；g)  水(H2O)：GB 6682 一级水；h)  灰毡毛忍冬皂苷乙、灰毡毛忍冬皂苷甲和川续断皂苷乙标准品：纯度98%；i)  山银花对照药材：购于中国药品食品检定研究院；j)  氨试液：取浓氨水 400 mL,加水稀释到 1000 mL，即得；k)  灰毡毛忍冬皂苷乙、灰毡毛忍冬皂苷甲和川续断皂苷乙混合标准品溶液(1.0 mg/mL)：取灰毡毛忍冬皂苷乙、灰毡毛忍冬皂苷甲和川续断皂苷乙三种对照品适量，加甲醇制成每 1 ml 含三种对照品分别为 1.0mg 的混合标准品溶液；l)  山银花对照药材溶液：制备方法同 B.5.2 项样品溶液制备。D.3仪器和设备仪器和设备包括：a)  烘箱；b)  超声波清洗器；c)  薄层色谱展开缸；d)  水浴锅；e)  分液漏斗；f)  小型粉碎机；g)  国家标准 R40/3 系列四号筛。D.4分析步骤12学兔兔标准下载T/JYH 0032023D.4.1样品粉碎取样品用粉碎机粉碎，过四号筛，置干燥器中备用。D.4.2样品溶液制备取样品粉末约 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 10 mL，超声处理 10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水 10 mL 使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取 2 次，每次 10 mL，合并正丁醇液，用氨试液振摇提取 2 次，每次 20 mL，分取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇 2 mL 使溶解，作为供试品溶液。D.4.3薄层色谱参考条件薄层色谱参考条件为：a)  薄层板：硅胶 G 板，10 cm×20 cm；b)  展开剂：正丁醇-甲酸-水（4：1：5）混合物的上层溶液；c)  显色剂：10% 硫酸乙醇；d)  温度：5 35 ；e)  湿度：3075%RH；f)  点样量：2  L；g)  显色方法：喷以 10%硫酸乙醇溶液，105 加热至斑点显色清晰，置日光下检视。D.5结果判定供试品色谱中，不得显与对照药材和对照品相一致的斑点。D.6色谱图见图D.1。图D.1金银花易混淆品检查图谱注：18金银花市售药材；9金银花对照药材；10灰毡毛忍冬皂苷乙，灰毡毛忍冬皂苷甲和川续断皂苷乙对照品；11山银花对照药材。_13