(1.4)--免疫学实验兽医免疫学.ppt

双向琼脂扩散实验实验目的：目的：掌握双向掌握双向琼脂脂扩散散实验的操作方法和判定的操作方法和判定标准；准；学会学会鸡传染性法氏囊炎的染性法氏囊炎的诊断断 实验器材：器材：琼脂粉、平皿、生理脂粉、平皿、生理盐水、水、8%高渗高渗盐水、梅花打孔水、梅花打孔器、器、鸡传染性法氏囊炎病毒抗原、染性法氏囊炎病毒抗原、鸡传染性法氏囊炎病毒染性法氏囊炎病毒标准阳准阳性血清、性血清、鸡传染性法氏囊炎病毒染性法氏囊炎病毒标准阴性血清、准阴性血清、鸡待待检血清、微血清、微量移液器、吸量移液器、吸头、酒精灯、牙、酒精灯、牙签、湿盒、湿盒、37C温箱温箱 实验原理：原理：双向双向琼扩实验是沉淀反是沉淀反应的一种形式，是指可溶性的一种形式，是指可溶性抗原抗体在抗原抗体在1%琼脂凝胶脂凝胶内自由内自由扩散散，特异性的抗原抗体在两孔，特异性的抗原抗体在两孔之之间比例最合适的位置上相遇后，形成肉眼可比例最合适的位置上相遇后，形成肉眼可见的沉淀的沉淀线。试验方法1.琼扩板的制备：称取1.2g琼脂粉，加至100mL 8%的高渗盐水中，煮沸使之溶解。待溶解的琼脂温度降至55左右时倒入平皿，厚约3mm。（已制备）2.打孔：待凝固后，用梅花打孔器在琼脂凝胶上打孔，用牙签挑出孔内琼脂3.封底：将琼脂板底部在酒精灯火焰上轻轻拖过，至手背感觉微烫4.加样（以检测抗血清的效价为例）抗原加中心孔，待检血清做2倍比（1:2，1:4，1:8，1:16等）稀释后置周围孔。设标准阴阳性血清对照。（加样时，不要溢出小孔）5.孵育：加样完毕，静置10min，湿盒内37孵育，24-48h观察并记录结果结果判定果判定将将琼脂板置暗背景或脂板置暗背景或侧强光照射下光照射下观察。察。标准阳性血清与抗原孔准阳性血清与抗原孔之之间出出现一条清晰的白色沉淀一条清晰的白色沉淀线，标准阴性血清与抗原孔直接无准阴性血清与抗原孔直接无沉淀沉淀线，则实验成立。成立。以出以出现沉淀沉淀带的待的待检血清最高稀血清最高稀释倍数倍数为该血清的血清的琼扩效价。效价。