(统考版)2023届高考生物一轮复习专题13课堂互动探究案1基因工程.docx

课堂互动探究案1基因工程考点一基因工程的概念及操作工具任务驱动·探究突破任务1对基因工程概念的理解基因工程的别名基因拼接技术或_技术操作环境_操作对象基因操作水平_水平原理_基本过程剪切_表达结果人类需要的_或生物类型供体提供_受体表达目的基因本质目的基因在_体内的表达优点可_生物的遗传性状任务2对DNA重组技术中基本工具的理解(1)限制性核酸内切酶(简称：_) 来源：主要从_中分离作用：割断两个核苷酸之间的_作用特点：专一性，即限制酶可识别_结果错位切：产生两个相同的_平切：形成_特别提醒正确认识限制酶限制酶是一类酶，而不是一种酶。将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生四个黏性末端或平末端。 不同DNA分子用同一种限制酶切割，产生的末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的末端一般不相同。 限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便进行检测。 限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。(2)DNA连接酶常用类型E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源_T4噬菌体功能连接黏性末端连接黏性末端和平末端结果都缝合_，如图(3)载体种类：_、噬菌体的衍生物、动植物病毒等。质粒的特点能自我复制有一个至多个_有特殊的_任务3下图为限制酶和DNA连接酶的关系，据图回答(1)限制酶和DNA连接酶的作用部位相同吗？_。(2)DNA连接酶起作用时是否需要模板？_。特别提醒选择限制酶的注意事项(1)根据目的基因两端的限制酶切点来确定所用限制酶的种类应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择Pst。不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择Sma。为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用Pst 和EcoR 两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。(2)根据质粒的特点来确定限制酶的种类所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。质粒作为载体必须具备标记基因等，所以选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶Sma 会破坏标记基因。如果所选酶的切点不只一个，则切割重组后可能会丢失某些片段，若丢失的片段含复制原点，则切割重组后的片段进入受体细胞后将不能自主复制。任务4与DNA有关的酶的比较名称作用部位作用底物作用结果限制酶_DNA将DNA切成两个或多个片段DNA连接酶_DNA片段将两个DNA片段连接为一个DNA分子DNA聚合酶磷酸二酯键_将单个脱氧核苷酸依次连接到DNA单链末端DNA (水解)酶_DNA将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸解旋酶碱基对之间的氢键_将双链DNA分子局部解旋为单链，形成两条长链RNA聚合酶_核糖核苷酸将单个核糖核苷酸依次连接到RNA单链末端任务5探究载体所具条件的意义条件意义稳定并能自我复制_有一个至多个限制酶的切割位点_具有特殊的标记基因_特别提醒基因载体与膜载体的区别基因工程中的载体是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞内，它能在宿主细胞内稳定存在，并可对目的基因进行大量复制；膜载体是蛋白质，与细胞膜的选择透过性有关。考向分类·对点落实考向一 基因工程操作工具的基础考查1.北京卷，5用Xho和Sal 两种限制性核酸内切酶分别处理同一DNA片段，酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是()A.图1中两种酶识别的核苷酸序列不同B图2中酶切产物可用于构建重组DNAC泳道中是用Sal处理得到的酶切产物D图中被酶切的DNA片段是单链DNA2经典模拟如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是()A BC D32022·江苏省东台中学高三检测“工欲善其事，必先利其器”。限制酶、DNA连接酶的发现为DNA切割、连接功能基因的获得以及表达载体的构建创造了条件，下列关于限制酶和DNA连接酶的叙述，正确的是()A两者都是从原核生物中分离纯化出来的B两者的催化都会导致磷酸二酯键数目的改变C限制酶都能在特定位点切割产生黏性末端DT4DNA连接酶只能连接双链DNA片段互补的黏性末端4经典模拟近年诞生的 CRISPR/Cas9基因编辑技术可进行基因定点编辑。 CRISPR/Cas9系统主要包括Cas9(核酸内切酶)和向导RNA，其原理是由向导RNA引导Cas9到一个特定的基因位点进行切割(上述过程见下图)。下列相关叙述，正确的是()ACRISPR/Cas9的组成物质是在核糖体上合成的B.向导RNA的合成需要逆转录酶的参与C基因的定点编辑过程只涉及碱基AU，GC的互补配对D切割后形成的每个DNA片段均含有两个游离的磷酸基团考向二 基因工程操作工具的综合考查5.2022·湖北高三模拟大米铁含量极低，科研人员通过基因工程、植物组织培养等现代生物技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。下图为培育转基因水稻过程示意图，其中为过程，EcoR、Hind 、BamH为限制酶。(1)该转基因水稻培育过程中选取目的基因用到的限制酶是_。这么操作的优点是_。(回答3点)(2)PCR是获取大量目的基因的一种方法，反应体系的成分中有两种引物，对两种引物的设计要求之一是：两种引物之间不能碱基互补配对，试分析原因_；下图展示了用PCR技术从DNA分子中获取铁合蛋白基因的过程，A、B、C、D是四种引物，选择图中的_引物通过PCR三次循环就可将铁合蛋白基因分离出来。(3)图中过程，属于_技术，制备的培养基是由无机营养成分、有机营养成分、_四部分组成。6全国卷，40图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR、BamH和Sau3A三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图(b)为某种表达载体的示意图(载体上的EcoR、Sau3A的切点是唯一的)。图(b)根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)经BamH酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被_酶切后的产物连接，理由是_。(2)若某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图(c)所示，这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有_，不能表达的原因是_。(3)DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有_和_，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是_。7全国卷，40植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。回答下列问题：(1)理论上，基因组文库含有生物的_基因；而cDNA文库中含有生物的_基因。(2)若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中_出所需的耐旱基因。(3)将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物_的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的_，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的_是否得到提高。(4)假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为31时，则可推测该耐旱基因整合到了_(填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”)。8经典高考根据基因工程的有关知识，回答下列问题。(1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有_和_。(2)质粒运载体用EcoR切割后产生的片段如下：AATTCG GCTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoR切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是_。(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即_DNA连接酶和_DNA连接酶。(4)反转录的模板是_，产物是_。若要在体外获得大量反转录产物，常采用_技术。(5)基因工程中除质粒外，_和_也可作为运载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_。考点二基因工程的基本操作程序及应用(国考5年7考)(全国卷：2021全国甲卷；2020全国卷；2019全国卷；2018全国卷；2017全国卷、)任务驱动·探究突破任务1结合抗虫棉的培育过程图填空(1)从图中可以看出，目的基因是_，使用的载体是_，将目的基因表达载体导入受体细胞的方法是_。(2)请写出两种检测目的基因是否表达的方法：_。任务2观察基因工程的操作过程，分析每一步骤的操作程序(1)目的基因的获取从_中获取利用_技术扩增通过化学方法人工合成(2)基因表达载体的构建组成目的基因_终止子_(3) 将目的基因导入受体细胞方法植物：_、基因枪法、_动物：_技术微生物：感受态细胞法(4)目的基因的检测与鉴定利用_技术检测目的基因的有无利用_技术检测目的基因的转录利用_技术检测目的基因的翻译利用_的鉴定检测重组性状的表达易错提醒基因工程操作的四个易错点(1)目的基因的插入位点不是随意的，基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入启动子与终止子之间的部位。(2)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象。(3)农杆菌转化法原理：农杆菌易感染双子叶或裸子植物的细胞，并将其Ti质粒上的T­DNA转移并整合到受体细胞染色体DNA上。(4)启动子起始密码子，终止子终止密码子启动子和终止子位于DNA片段上，分别控制转录过程的启动和终止；起始密码子和终止密码子位于mRNA上，分别控制翻译过程的启动和终止。任务3目的基因的检测和鉴定任务4完善基因工程的应用技术名称应用植物基因工程培育抗虫转基因植物、抗病转基因植物和_转基因植物，利用转基因改良植物的品质动物基因工程提高动物生长速度，改善畜产品的品质，用转基因动物生产_，用转基因动物作_的供体基因治疗把_导入病人体内，使其表达产物发挥作用，从而治疗疾病，分为体内基因治疗和体外基因治疗任务5探究基因治疗与基因诊断的不同点原理操作过程进展基因治疗_利用_导入有基因缺陷的细胞中，以表达出正常性状来治疗临床实验基因诊断_制作特定_与病人样品DNA混合，分析杂交带情况临床应用任务6研析深化教材，析因推理归纳，提升学科素养(1)用箭头及简要的文字简述基因组文库和部分基因文库的构建过程。_。(2)为什么不同生物的基因可以拼接起来？_。(3)为什么一种生物的基因可以在另一种生物的细胞内表达？_。考向分类·对点落实考向一 对基因工程操作程序的考查1.2022·山东省高三检测为使玉米获得抗除草剂性状， 需进行如图所示的操作。报告基因的产物能催化无色物质K呈现蓝色。转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化的愈伤组织也可能在选择培养基上生长。下列叙述不正确的是()A筛选1需要用含有氨苄青霉素的培养基筛选出成功导入表达载体的农杆菌B筛选2需要用无色物质K处理愈伤组织并筛选出呈现蓝色的组织C为使除草剂抗性基因G在农杆菌中高效表达，需要把目的基因片段插入到表达载体的复制原点和启动子之间D为从个体水平上检测图中玉米植株A是否具有抗除草剂性状，可采用的方法是用相应除草剂喷洒待测玉米植株2经典模拟如图表示用化学方法合成目的基因的过程。据图分析，下列叙述正确的是()A过程需要DNA连接酶B过程需要限制性核酸内切酶C目的基因的碱基序列是已知的D若某质粒能与目的基因重组，则该质粒和目的基因的碱基序列相同考向二 对基因工程的综合考查3.2022·重庆市江津中学高三模拟黄萎病是危害棉花种植的常见疾病，科学家通过基因工程技术将抗黄萎病基因葡萄糖氧化酶基因(GO)导入棉花，获得抗黄萎病棉花。已知TDNA上的基因在农杆菌中不表达，在植物细胞中可以表达，请将转基因棉花培育步骤补充完整：(1)构建上图所示重组Ti质粒，用_处理农杆菌，使重组Ti质粒进入农杆菌中，将农杆菌接种到含_的LB液体培养基中振荡培养。培养适宜时间后，离心，去除上清液，加入适量MS液体培养基，可通过测定菌液在600 nm波长处的OD值来确定农杆菌密度是否适宜。(2)切取经_培养的棉花幼苗的下胚轴，直接转入菌液中侵染510 min后，倒出菌液，用灭菌滤纸吸取下胚轴表面多余菌液，将下胚轴放入愈伤组织诱导培养基中培养2天。2天后，向培养基中加入适量_和青霉素，其目的是筛选出转化成功的棉花细胞和_。(3)将所得愈伤组织接种到适宜培养基中培养，诱导形成胚状体，在适宜人工条件下继续发育成棉花幼苗。利用_技术检测棉花细胞是否合成_，选出抗黄萎病棉花。通过_可以从个体水平上鉴定该棉花对黄萎病的抗性。4全国卷，40某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH酶切后，与用BamH酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：(1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_(答出两点即可)，而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是_；并且_和_的细胞也是不能区分的，其原因是_。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有_的固体培养基。(3)基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自_。52022·山东潍坊市高三三模番茄果实后熟问题是影响番茄生产、加工和运输的难题。ACC合成酶是番茄细胞合成乙烯的关键酶，科学家利用反义基因技术培育出了耐储存、利于长途运输的番茄新品种，具体做法是采用农杆菌转化法将携带有反义ACC合成酶基因的重组质粒M导入番茄栽培品种中，经过卡那霉素筛选后，获得番茄新品种。反义基因是指人工合成出一段与某种基因碱基序列相同的DNA。经过人为操作使之在转录生成mRNA时，模板链与原基因不同。(1)农杆菌转化法适用的植物种类是_；重组质粒M中的抗性基因是_。(2)有同学提出若要提取番茄中控制ACC合成酶的基因，只能利用成熟的番茄组织。你认为他的说法是否有道理，作出判断的依据是_。(3)ACC合成酶基因在番茄细胞中表达的过程发生在细胞内的_中；反义ACC合成酶基因转录启动后，检测发现番茄果实中乙烯含量显著降低，推测其机理最可能是_。考向三 基因工程的应用6.全国卷HIV属于逆转录病毒，是艾滋病的病原体。回答下列问题：(1)用基因工程方法制备HIV的某蛋白(目的蛋白)时，可先提取HIV中的_，以其作为模板，在_的作用下合成_，获取该目的蛋白的基因，构建重组表达载体，随后导入受体细胞。(2)从受体细胞中分离纯化出目的蛋白，该蛋白作为抗原注入机体后，刺激机体产生的可与此蛋白结合的相应分泌蛋白是_，该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV，检测的原理是_。(3)已知某种菌导致的肺炎在健康人群中罕见，但是在艾滋病患者中却多发。引起这种现象的根本原因是HIV主要感染和破坏了患者的部分_细胞，降低了患者免疫系统的防卫功能。(4)人的免疫系统有_癌细胞的功能。艾滋病患者由于免疫功能缺陷，易发生恶性肿瘤。7天津卷，7人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径：(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_合成总cDNA，然后以cDNA为模板，使用PCR技术扩增HSA基因。下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向。(2)启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是_(填写字母，单选)。A.人血细胞启动子B水稻胚乳细胞启动子C大肠杆菌启动子 D农杆菌启动子(3)利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是_。(4)人体合成的初始HSA多肽，需要经过生物膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。与途径相比，选择途径获取rHSA的优势是_。(5)为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与_的生物学功能一致。考点三蛋白质工程、转基因技术的安全性及生物武器(国考5年未考)任务驱动·探究突破任务1完善蛋白质工程概念的相关填空蛋白质工程具体内容别称第二代基因工程目标生产_的一种新的蛋白质原理由于基因决定蛋白质，因此要对蛋白质结构进行改造，必须从_入手手段_，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质关键技术_结果改造了现有蛋白质或制造出_任务2完善蛋白质工程的操作过程从预期的_出发设计预期的_推测应有的_找到相对应的_(基因)基因表达产生所需要的蛋白质。任务3完善转基因技术安全性的相关内容(1)安全性问题_安全：滞后效应、_、营养成分改变等。生物安全：对_的影响等。环境安全：对_的影响等。(2)理性看待转基因技术需要正确的社会舆论导向：_，不能因噎废食。制定_，最大程度保证转基因技术和产品的安全性。名师提醒转基因生物存在安全性问题的原因(1)目前对基因的结构、调控机制及基因间的相互作用了解有限。(2)目的基因往往是异种生物的基因。(3)外源基因插入宿主细胞基因组的部位往往是随机的。任务4完善生物武器的相关内容(1)生物武器的种类(连线)(2)生物武器的特点致病力强、_；污染面广、危害时间长；难以防治；具有一定的_；受_影响大。任务5蛋白质工程与基因工程的区别和联系项目蛋白质工程基因工程区别过程预期蛋白质的_设计预期的蛋白质_推测应有的氨基酸_推测相对应的脱氧核苷酸_合成DNA表达出蛋白质_的获取_的构建将目的基因导入_目的基因的_实质定向改造或生产人类所需要的蛋白质定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类型或生物产品结果生产自然界中没有的蛋白质生产自然界中已有的蛋白质联系蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程，因为对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质，都必须通过_来实现任务6填写蛋白质工程流程图中各字母所代表的含义 A._，B._，C._，D._，E._。考向分类·对点落实考向一 对蛋白质工程的考查1.2022·宁夏石嘴山三中高三月考目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等。采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是() 推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计蓝色荧光蛋白基因的合成表达出蓝色荧光蛋白A BC D22022·广西调研科学家利用PCR定点突变技术可改造Rubisco酶基因，从而提高了光合作用过程中Rubisco酶对CO2的亲和力，进而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：(1)PCR过程所依据的原理是_，该过程需要加入的酶是_。利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成_。(2)该技术不直接改造Rubisco酶，而是通过对Rubisco酶基因进行改造，从而实现对Rubisco酶的改造，其原因是_。和传统基因工程技术相比较，定点突变技术最突出的优点是_，PCR定点突变技术属于_的范畴。(3)可利用定点突变的DNA来构建基因表达载体，常用_将基因表达载体导入植物细胞，将该细胞经植物组织培养后培育成幼苗，从细胞水平分析所依据的原理是_。3全国卷已知生物体内有一种蛋白质(P)，该蛋白质是一种转运蛋白，由305个氨基酸组成。如果将P分子中158位的丝氨酸变成亮氨酸，240位的谷氨酰胺变成苯丙氨酸，改变后的蛋白质(P1)不但保留P的功能，而且具有酶的催化活性。回答下列问题：(1)从上述资料可知，若要改变蛋白质的功能，可以考虑对蛋白质的_进行改造。(2)以P基因序列为基础，获得P1基因的途径有修饰_基因或合成_基因。所获得的基因表达时是遵循中心法则的，中心法则的全部内容包括_的复制；以及遗传信息在不同分子之间的流动，即：_。(3)蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过_和_进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质，之后还需要对蛋白质的生物_进行鉴定。考向二 对转基因技术安全性的考查4.重庆卷生物技术安全性和伦理问题是社会关注的热点。下列叙述，错误的是()A应严格选择转基因植物的目的基因，避免产生对人类有害的物质B当今社会的普遍观点是禁止克隆人的实验，但不反对治疗性克隆C反对设计试管婴儿的原因之一是有人滥用此技术选择性设计婴儿D生物武器是用微生物、毒素、干扰素及重组致病菌等来形成杀伤力5经典高考下列关于转基因生物安全性的叙述中，错误的是()A.我国已经对转基因食品和转基因农产品强制实施了产品标识制度B国际上大多数国家都在转基因食品标签上警示性注明可能的危害C开展风险评估、预警跟踪和风险管理是保障转基因生物安全的前提D目前对转基因生物安全性的争论主要集中在食用安全性和环境安全性上6病毒疫苗的研制是现代生物技术应用最广泛的领域，现在研发的第二、三代病毒疫苗都基于DNA重组技术而建立。请分析并回答下列问题：(1)第二代疫苗是以编码病毒抗原蛋白的RNA为模板，经_酶的作用而获得目的基因，再利用_这些工具酶来构建重组质粒。形成的重组质粒与经过_处理的大肠杆菌细胞混合可转化大肠杆菌，再扩增大肠杆菌以获得大量的抗原蛋白。(2)在构建好的重组质粒中，引导目的基因表达的序列是_，它是_的识别和结合位点。(3)第三代疫苗即“DNA疫苗”，是将编码某种抗原蛋白的DNA注射到动物体内，该DNA可在生物体内_出相应的抗原蛋白。(4)目前对于基因工程产品安全性的争论越来越激烈，转基因生物的安全性主要体现在_、_、_三个方面。网络建构提升长句应答必备1限制酶具有特异性，即一种限制酶只能识别特定的核苷酸序列，并在特定的位点上切割DNA分子。2DNA连接酶的作用部位是磷酸二酯键。3质粒是常用的载体，它是一种小型的双链环状DNA分子，具有一个至多个限制酶切割位点及标记基因。4获取目的基因常用的方法有从基因文库中获取目的基因、利用PCR获取和扩增目的基因、人工合成目的基因。5基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。6目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法；导入动物细胞常用显微注射法，导入微生物细胞常用感受态细胞法。翻阅教材品原味12021·全国卷甲PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，医生进行了相关操作：分析PCR扩增结果；从病人组织样本中提取DNA；利用PCR扩增DNA片段；采集病人组织样本。回答下列问题：(1)若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是_(用数字序号表示)。(2)操作中使用的酶是_。PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、_三步，其中复性的结果是_。(3)为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物应该能与_特异性结合。(4)PCR(多聚酶链式反应)技术是指_。该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等方面。(高考VS教材)小题号相关教材原文教材页码(2) 人教选修3P10(3) 人教选修3P10(4) 人教选修3P102.2021·全国乙卷用DNA重组技术可以赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人类需要的生物产品。在此过程中需要使用多种工具酶，其中4种限制性核酸内切酶的切割位点如图所示。回答下列问题：(1)常用的DNA连接酶有E·coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶。图中_酶切割后的DNA片段可以用E·coli DNA连接酶连接。图中_酶切割后的DNA片段可以用T4 DNA连接酶连接。(2)DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是_。(3)DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征。如质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能_；质粒DNA分子上有_，便于外源DNA插入；质粒DNA分子上有标记基因(如某种抗生素抗性基因)，利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞