(统考版)2023届高考生物一轮复习特训卷考点34微生物的培养与应用.docx

考点34微生物的培养与应用第一关辨析判别夯基固本1判断关于微生物培养技术相关叙述的正误(1)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质。()(2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上。()(3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害。()(4)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。()(5)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高时，就能在培养基表面形成单个菌落。()2判断关于微生物分离相关叙述的正误(1)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类。()(2)对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法。()(3)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源。()(4)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低。()(5)刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。()第二关大题精做规范准练题组一模拟题12022·安徽省黄山市联考蓝白斑筛选是基因工程中筛选重组目的基因常用的一种方法，表现为培养基上出现蓝白颜色的菌落，可以颜色为依据直接筛选重组菌。用于筛选的菌为­半乳糖苷酶缺陷型菌株，这种宿主菌中编码­半乳糖苷酶的部分缺失，不具有生物活性。用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌­半乳糖苷酶缺失部分补全的序列，在这段序列中还含有多个限制性酶切位点，便于插入目的基因。­半乳糖苷酶能够作用于一种无色化合物X­gal，使其变成蓝色物质。回答下列问题：(1)玻璃和金属材质的实验器材利用_方法灭菌。(2)培养基灭菌后，需要冷却到_左右时，才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要将平板倒扣，其原因是_。(3)为防止杂菌污染，培养基中要添加_。蓝白斑筛选能成功，是因为培养基中添加了_。(4)最终培养基出现的白色的菌落是()A目的基因和载体结合B只含目的基因C只含载体(5)若需要长期保存该菌种，可采用的方法是_。22022·内江六中考试2019年起，全国地级及以上城市全面启动生活垃圾分类工作，习近平总书记强调，实行垃圾分类，关系广大人民群众生活环境，关系节约使用资源，也是社会文明水平的一个重要体现。有机垃圾通过微生物处理的基本原理是利用微生物降解菌产生多种酶，对分类后的有机垃圾进行快速分解，其技术流程如下：(1)样品采集：样品取自某食堂的餐厨垃圾，原因是_。(2)分离纯化：上述流程中利用_(方法)进行菌株的分离纯化，接种后进行培养时，需将培养皿呈_状态放置。(3)鉴别培养：对餐厨垃圾组分进行分析发现，其中纤维素类含量较高。若对菌株的纤维素降解活性进行鉴别，需将分离纯化得到的各菌种，接种于加入_的培养基中，通过比较菌落的_来判断降解活性的高低。(4)现将各类有机物降解活性较高的3个菌株分别制成菌剂，测定其对餐厨垃圾的实际降解能力，其实验思路如下：配制培养基：将纤维素、淀粉、脂肪、蛋白质和水，按照餐厨垃圾的组分比例配制。将等量的3种菌剂，分别与等量的培养基在适宜的环境中进行混合培养。培养相同时间，测定_。(5)筛选出高效降解纤维素的菌株后，若需要长期保存，可采用_的方法。纤维素分解菌分解纤维素主要依赖产生的纤维素酶，该复合酶至少包括三种组分，即_。为测定纤维素酶降解纤维素的能力，需要先将该酶分离出来，常用_法分离，该方法是根据_来分离蛋白质的。32022·河南省安阳市调研一个由英国伦敦帝国学院和芬兰图尔库大学的科学家组成的研究小组，日前开发出一种通过大肠杆菌制造丙烷的新技术。科研人员欲对大肠杆菌进行研究和利用，首先要纯化大肠杆菌，请结合所学知识，回答下列问题：(1)纯化大肠杆菌首先需要制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，其步骤是计算、称量、溶化、灭菌、_。对培养基进行灭菌的方法是_，检验培养基是否有杂菌污染的最有效的方法是_。(2)可以估算出样品中大肠杆菌数量的接种方法是_，用该方法得到的结果一般比实际值_(填“偏大”或“偏小”)。(3)某实验小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是振荡培养能提高培养液中_的含量和营养物质的利用率。使用过的培养基及培养物必须经过_后才能丢弃，以防止培养物扩散。(4)如果要检测食品中是否含有大肠杆菌，需要在培养基中加入_(填物质)，以观察是否出现_(填颜色)的菌落。42022·广西北海市一模某研究小组发现类产碱假单胞菌对黄脊竹蝗有较强的感染力，并可引起其发病死亡，该小组成员以此展开实验探究。回答下列问题：(1)用来培养类产碱假单胞菌的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，在此培养基中，为微生物提供碳源的物质是_。培养基配制时，灭菌和调pH的先后顺序为_。对培养基进行灭菌所用的仪器是_。(2)在培养类产碱假单胞菌的过程中，培养皿应倒置培养，其原因是_。(3)进行实验时，若要频繁使用类产碱假单胞菌，可以采用_方法对其进行保存，这种方法的缺点是_。(4)研究发现：黄脊竹蝗幼虫在自然状态下感染类产碱假单胞菌后，于24小时后开始死亡，72小时达到死亡高峰，染病后出现行动迟缓，伴有轻微痉挛的现象。为验证此菌是蝗虫致死的原因，该研究小组成员从病死虫尸中提取并分离得到该菌，并用该菌_，观察到的现象是_。52022·金太阳大联考褐煤碳化程度低、易挥发、易自燃，易污染环境，不利于储存和远距离运输。利用微生物处理对褐煤进行气、液转化降解，形成清洁、经济有效的能源物质，对保护环境及油气安全供应有着重要意义。回答下列相关问题：(1)为了筛选到能高效降解褐煤的细菌，应选择的采集样本的场所为_；筛选时采用的培养基应该以_为唯一碳源，可用_法接种。(2)研究者利用营养肉汁琼脂培养基(如下)进行实验，拟从4种备选细菌中筛选出对某地褐煤降解效率高的菌种。蛋白胨氯化钠牛肉浸取物琼脂蒸馏水5.0g5.0g3.0g15.0g1.0LpH值调至7营养肉汁琼脂培养基中，蛋白胨的作用是_，琼脂的作用是_。完成筛选的实验思路：在适宜条件下分别培养等量的4种备选细菌，分别加入_，一段时间后_。62022·湘豫名校联考某研究人员筛选到能高效降解尿素的细菌，培养基成分如下表所示。请回答下列问题：KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素琼脂1.4g2.1g0.2g10g1g15g(1)依据培养基的功能，该培养基属于_，加入的琼脂的功能是_。(2)降解尿素的细菌中含有_酶，该酶能催化尿素分解形成_。(3)土壤中的巴氏芽孢杆菌能高效降解尿素。为了从土样中筛选出巴氏芽孢杆菌，需将土样置于选择培养液中培养24 h，目的是_。此研究过程中的摇床转速为200 r/min，推测培养巴氏芽孢杆菌过程中需要使用摇床的原因：_。(4)某湖水中含有巴氏芽孢杆菌。请写出准确测定湖水中巴氏芽孢杆菌数量的实验思路：_。题组二高考题72020·全国卷，37某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。回答下列问题：(1)实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用_的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是_。甲、乙培养基均属于_培养基。(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL，若要在每个平板上涂布100 L 稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释_倍。(3)在步骤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是_(答出1点即可)。(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤：_。(5)上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即_。82019·全国卷，37已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5 g/L)。号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(15 g/L)。号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(45 g/L)。回答下列问题。(1)在号培养基中，为微生物提供氮源的是_。、号培养基中为微生物提供碳源的有机物是_。(2)若将土壤悬浮液接种在号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会_，其原因是_。(3)号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是_。(4)假设从号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供_和_。92019·全国卷，37物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题。(1)要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是_。(2)在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图所示)。如果要得到目标菌，应该选择_菌落进一步纯化，选择的依据是_。(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即_。(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加_，三处滴加量相同。一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明_；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明_。102019·全国卷，37回答下列与细菌培养相关的问题。(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是_(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是_。硝化细菌在没有碳源的培养基上_(填“能够”或“不能”)生长，原因是_。(2)用平板培养细菌时一般需要将平板_(填“倒置”或“正置”)。(3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是_。(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过_处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。11全国卷将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：(1)M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制_的生长，加入了链霉素的培养基属于_培养基。(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有_(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有_(答出两点即可)。(3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是_，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_。(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133；乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是_。12全国卷在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_。在照射前，适量喷洒_，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过_(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_。考点34微生物的培养与应用第一关辨析判别夯基固本1（1）（2）×（3）（4）×（5）2（1）×（2）×（3）（4）×（5）×第二关大题精做规范准练1答案：（1）干热灭菌（2）50防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染（3）抗生素X­gal（4）A（5）甘油管藏法解析：（1）玻璃和金属材质的实验器材可用干热灭菌的方法进行灭菌。（2）培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要将平板倒扣，这样做可防止皿盖上的冷凝水落入培养基而造成污染。（3）为防止杂菌污染，培养基中要添加抗生素。半乳糖苷酶能够作用于一种无色化合物X­gal，使其变成蓝色物质，蓝白斑筛选能成功，是因为培养基中添加了X­gal。（4）由于用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌半乳糖苷酶缺失部分补全的序列，因此最终培养基中出现的白色的菌落是目的基因和载体结合的菌落，故选A。（5）若需要长期保存该菌种，可采用的方法是甘油管藏法。2答案：（1）餐厨垃圾中富含各类有机物，相应的分解菌含量丰富（2）稀释涂布平板法倒置（3）刚果红透明圈直径（或者透明圈直径与菌落直径比值）（4）各组培养基的减少量（或各组培养基的剩余量）（5）甘油管藏C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶凝胶色谱（分配色谱）相对分子质量的大小解析：（1）拟筛选出能高效降解有机物的耐高温菌株，餐厨垃圾中富含各类有机物，相应的分解菌含量丰富，因此样品应取自某食堂的餐厨垃圾。（2）稀释涂布平板法是单菌落的分离方法之一，分离纯化过程中需要利用稀释涂布平板法进行菌株的分离纯化；接种后放入恒温培养箱中进行培养时，需将培养皿呈倒置状态放置，以免造成污染。（3）刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，若对菌株的纤维素降解活性进行鉴别，需将分离纯化得到的各菌种，接种于加入刚果红的培养基中。通过比较菌落的透明圈直径（或者透明圈直径与菌落直径的比值），来判断降解活性的高低（直径越大，说明酶活性越高）。（4）现将各类有机物降解活性较高的3个菌株分别制成菌剂，测定其对餐厨垃圾实际降解能力，实验思路如下：含有碳元素且能被微生物生长繁殖所利用的一类营养物质统称为碳源，含有氮元素且能被微生物生长繁殖所利用的一类营养物质统称为氮源，餐厨垃圾的组分中提供碳源的是淀粉、纤维素、脂肪、蛋白质，提供氮源的是蛋白质。将等量的3种菌剂，分别与等量的培养基在适宜的环境中进行混合培养。每隔相同的时间测定各组培养基的减少量（或各组培养基的剩余量）。（5）筛选出高效降解纤维素的菌株后，若需要长期保存，可采用甘油管藏的方法。纤维素分解菌分解纤维素主要依赖产生的纤维素酶，该复合酶至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三种组分。为测定纤维素酶降解纤维素的能力，需要先将该酶分离出来，该酶的本质是蛋白质，常用凝胶色谱（分配色谱）法分离；该方法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的。3答案：（1）倒平板高压蒸汽灭菌法将未接种的培养基放在恒温箱中培养（2）稀释涂布平板法偏小（3）氧气灭菌处理（4）伊红、美蓝黑色解析：（1）纯化大肠杆菌首先需要制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，其步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，对培养基进行灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法。检验培养基有没有被杂菌污染，可选取未接种的培养基与接种样品的培养基同时在恒温箱中培养。如果在培养过程中未接种的培养基没有菌落生长，则说明培养基没有被杂菌污染；若未接种的培养基有菌落生长，则说明培养基被杂菌污染。（2）接种大肠杆菌的最常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法，其中可以估算出样品中大肠杆菌数量的是稀释涂布平板法。由于两个或多个细胞连在一起，在平板上观察到的是一个菌落，因而该方法得到的结果一般比实际值偏小。（3）在大肠杆菌的培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、溶氧量、酸碱度和渗透压等条件；由于大肠杆菌对人和动物有一定的不利影响，所以对培养基和培养物要灭菌处理后才能丢弃。（4）鉴定大肠杆菌要用伊红美蓝培养基，若出现黑色菌落，则说明食品中有大肠杆菌。4答案：（1）牛肉膏、蛋白胨先调pH，后灭菌高压蒸汽灭菌锅（2）防止皿盖上凝结的水珠滴落到培养基上造成污染（3）临时保藏保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异（4）感染生理状况良好的黄脊竹蝗幼虫感染后的幼虫出现行动迟缓，伴有轻微痉挛现象解析：（1）牛肉膏蛋白胨培养基中，为微生物提供碳源的是牛肉膏和蛋白胨；配制培养基需要先调节pH，再灭菌，以防止调节pH过程中引入杂菌；灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法，所以需要用到高压蒸汽灭菌锅。（2）为了防止皿盖上凝结的水珠滴落到培养基上造成污染，所以培养皿应倒置培养。（3）频繁使用类产碱假单胞菌，可以采用临时保藏的方法保存；该方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。（4）为证明类产碱假单胞菌是蝗虫致死的原因，需要从病死虫尸中提取并分离得到该菌，并用该菌感染生理状况良好的黄脊竹蝗幼虫，如果感染后的幼虫出现行动迟缓，伴有轻微痉挛现象，即可证明。5答案：（1）褐煤煤区褐煤平板划线（或稀释涂布平板）（2）为细菌生长提供氮源、碳源和维生素用作凝固剂适量且等量取自某地的褐煤（煤浆）分别测定褐煤（煤浆）的降解率解析：（1）褐煤煤区存在能高效降解褐煤的细菌的可能性较大，因而易于筛选到能高效降解褐煤的细菌；筛选时采用的培养基应该以褐煤为唯一碳源，微生物接种常用平板划线法或稀释涂布平板法。（2）营养肉汁琼脂培养基中，蛋白胨能为细菌生长提供氮源、碳源和维生素，琼脂的作用是用作凝固剂。筛选的实验思路：在适宜条件下分别培养等量的4种备选细菌，分别加入适量且等量取自某地的褐煤（煤浆），一段时间后分别测定褐煤（煤浆）的降解率。6答案：（1）选择培养基作为凝固剂（2）脲二氧化碳和氨（3）对巴氏芽孢杆菌扩大培养，使巴氏芽孢杆菌的浓度增加有利于巴氏芽孢杆菌与空气、培养液中的营养物质充分接触，从而得到更多的巴氏芽孢杆菌（4）取湖水稀释后，涂布在选择培养基中，对照组涂布等量无菌水，培养后计数解析：（1）按功能不同，培养基可分成两类，鉴别培养基和选择培养基，培养基中不加其他氮素，只把尿素作为唯一氮源，属于选择培养基，其目的是想从众多微生物中选出能分解尿素的目的菌。加入的琼脂的功能是作为凝固剂。（2）降解尿素的细菌中含有脲酶，该酶能催化尿素分解形成二氧化碳和氨。（3）将土样置于选择培养液中培养24 h，对巴氏芽孢杆菌扩大培养，可使培养液中的巴氏芽孢杆菌大量增殖；使用摇床，有利于巴氏芽孢杆菌与空气、培养液中的营养物质充分接触，从而得到更多的巴氏芽孢杆菌。（4）对湖水中的细菌进行准确计数，可取湖水稀释后，涂布在选择培养基中，对照组涂布等量无菌水，培养后计数。7答案：（1）高压蒸汽灭菌琼脂选择（2）104（3）S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长（4）取淤泥加入无菌水中，涂布（或稀释涂布）到乙培养基上，培养后计数（5）水、碳源、氮源和无机盐解析：（1）实验时，盛有水或培养基的摇瓶常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。题图中摇瓶M内装有液体培养基甲，培养皿中的培养基乙为固体培养基，相比甲需添加凝固剂Y（琼脂）。依据题干信息，甲、乙培养基均为以S（一种含有C、H、N的有机物）为唯一氮源和碳源的培养基，可抑制或阻止其他微生物繁殖，仅使能够降解和利用S的菌株生长和繁殖，故属于选择培养基。（2）若使平板上长出的菌落数不超过200个，则接种液中的菌体浓度至多为200个/0.1 mL2×103个/mL，已知摇瓶M中的细菌细胞数为2×107个/mL，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释104倍。（3）S作为一种营养物质，在培养基中浓度过高，可导致培养液渗透压升高，细菌细胞渗透失水，使其代谢速率下降；另一方面S作为污染物，其浓度过高可能抑制菌体生长、代谢和繁殖。（4）若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，需进行的实验步骤如下：称取一定质量（10 g）的淤泥溶于一定体积的（90 mL）无菌水中，制备土壤浸出液，经梯度稀释（对于细菌，一般选用104、105、106倍的稀释液）后，采用稀释涂布平板法接种于以S为唯一碳源和氮源的固体培养基（即乙培养基）中，每个稀释倍数下设置三组重复实验；在适宜条件下培养，待长出菌落且菌落数目达到稳定后，选取菌落数在30300的平板进行计数，统计并计算平均值。（5）在甲、乙两种培养基中，S既作为碳源，又作为氮源，同时培养基中还含有水、无机盐等营养物质。8答案：（1）牛肉膏、蛋白胨X（2）下降不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖（3）稀释涂布平板法（4）能量合成其他物质的原料解析：（1）在号培养基中，牛肉膏、蛋白胨可以为微生物提供氮源，、号培养基中为微生物提供碳源的是有机物X。（2）号培养基中碳源只有X，不能降解X的细菌会因缺乏碳源而不能增殖，使该类细菌的比例降低。（3）利用固体培养基对菌落进行计数时，需采用稀释涂布平板法进行接种。（4）在有氧条件下，丙酮酸可被分解为CO2和H2O，且释放能量，为该菌的生长提供能量和合成其他物质的原料。9答案：（1）W（2）乙乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W（3）将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源（4）缓冲液缓冲液不能降解W酶E与天然酶降解W的能力相近解析：（1）要从土壤中分离能降解W的细菌，培养基中应以W为唯一氮源。（2）乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W。（3）要判断甲、乙能否利用空气中的氮气作为氮源，应将甲、乙菌分别接种在无氮源的培养基上，观察细菌能否生长，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源，否则不能。（4）实验设计应遵循单一变量原则，C处应滴加等量不含酶的缓冲液。C处只滴加等量缓冲液，若C处没有出现透明圈，则说明缓冲液不能降解W，若A、B处形成的透明圈直径大小相近，则说明酶E与天然酶降解W的能力相近。10答案：（1）蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源（2）倒置（3）在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征（4）灭菌解析：（1）细菌培养时需要碳源、氮源、水和无机盐等，蛋白胨能同时提供碳源、氮源，葡萄糖可提供碳源，NaNO3不能提供碳源，可提供无机氮源。不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同，故制备培养基时需要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH。硝化细菌是自养型细菌，可以利用空气中的CO2作为碳源，故硝化细菌可在没有碳源的培养基上生长。（2）为防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染，用平板培养细菌时一般需将平板倒置。（3）在一定培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，如特定的形状、大小、颜色、隆起程度等，所以依据菌落的特征，可以初步区分不同种的微生物。（4）为防止污染环境，使用后的培养基丢弃前要都经过灭菌处理，以便杀死丢弃物中所有的微生物。11答案：（1）细菌选择（2）碳源、无机盐蛋白质、核酸（3）碘液淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈（4）乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差解析：（1）M培养基若用于真菌的筛选，则M培养基能满足真菌的生长，且能抑制其他微生物的生长，因此培养基中应加入链霉素以抑制细菌的生长，加入了链霉素的培养基属于选择培养基。（2）微生物生长需要多种营养物质，除氮源外，还需要碳源、无机盐、水以及特殊营养物质等。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有蛋白质和核酸。（3）筛选产淀粉酶的微生物时，可依据淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈，再根据透明圈来筛选产淀粉酶的微生物。（4）乙同学的结果不合理，因为其中1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差，不能简单地用其平均数作为最终结果。12答案：（1）可以（2）在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少（3）破坏DNA结构消毒液（4）氯气（5）未将锅内冷空气排尽解析：（1）能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。（2）煮沸消毒法，即在100 时煮沸56 min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢；巴氏消毒法却是在7075 时煮30 min或在80 时煮15 min，以杀死微生物，并且保证营养物质不被破坏，因此，与煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采用巴氏消毒法。巴氏消毒法或高温瞬时消毒法与煮沸消毒法相比，其优点是达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。（3）因紫外线能破坏DNA分子的结构，所以密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒。在照射前，适量喷洒消毒液，可强化消毒效果。（4）通常乙醇消毒用的是75%的酒精，由于酒精有气味，影响水质，不适宜消毒自来水；高锰酸钾本身有颜色，消毒后溶液呈紫红色，也无法使用；因此水厂供应的自来水通常是经过氯气消毒的。（5）采用高压蒸汽灭菌时，锅内的水加热煮沸，应将其中原有的冷空气彻底排除后才能将锅密闭。如果未将锅内冷空气排尽，则会出现压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度的现象。