微生物标本的选择、采集和运送.pptx

微生物标本微生物标本的的选择选择、采集和运采集和运送送实验室的数据为诊断和治疗提供了至关重要的信息，医务人员需要了解实验室对微生物标本采集和送检的要求，从而保证 提供合格标本。实验室人员需要了解医生的需求，提供准确、有意义、且和临床相关的结果，给予技术上的支持。”“感染性疾病的诊治需要以正确的病原学检测结果作为指导,而获得正确的病原学结果的前提是标本的正确选择正确选择、采采集集和和运运送送。前前言言标本采集、标本采集、运送运送及及 处理的总原处理的总原则则常见微生物标本常见微生物标本的的 选择、选择、采集、采集、运运送送目目 录录CONTENTS0102标本采集、标本采集、运送运送及及 处理的总原处理的总原则则(3)将采集到的标本存放在合适的标本容器标本容器中进行运送；注：合适的标本容器将有助于致病微生物的存活，并可防治泄漏造成生物危害。(4)将标本迅速迅速送到微生物实验室，或者确保标本被适当保存，保存的温度和时间不会使可疑病原微生物死亡。标本采集者应注意以下几点要求：(1)选择正确的部位部位采集标本；(2)使用正确的方法方法和工工具具采集标本；一、如何获得一、如何获得合合格的标本格的标本5.WS/T 489-2016 尿路感染临床微生物实验室诊断 6.WS/T 348-2011 尿液标本的收集及处理指南 7.WS/T 662-2020 临床体液检验技术要求8.WS/T 498-2017 细菌性腹泻临床实验室诊断操作指南 9.WS/T 487-2017 侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南国家规范：1.WS/T 640-2018 临床微生物学检验标本的采集和转运 2.WS/T 503-2017 临床微生物实验室血培养操作规范 3.WS/T 661-2020 静脉血标本采集指南4.WS/T 499-2017 下呼吸道感染细菌培养操作指南二、主要参考的二、主要参考的文献和指南文献和指南国内指南：中华预防医学会医院感染控制分会,临床微生物标本采集和送检指南二、主要参考的二、主要参考的文献和指南文献和指南国际指南：美国微生物学会2012年出版A Guide to SpecimenManagement in ClinicalMicrobiology (临床微生物标本送 检指南)J.Michal Miller 著马小军 翻译二、主要参考的二、主要参考的文献和指南文献和指南g)标本采集方法；h)标本的体积或质量；i)转运时限、贮存条件；j)标本的标识方法；k)重复检验频率；l)生物安全防护信息；m)需要获得的临床资料。a)检验项目；b)检验方法；c)适应症；d)标本采集部位；e)标本类型；f)标本采集、转运所需要的装置/容实验室应制定所在机构的临床微生物学检验标本采集手册，该手册提供的信息包括 (但不限于)下列内容：三、标本采集三、标本采集手手册册参考WS/T 640-2018 临床微生物学检验标本的采集和转运器和转运培养基；选择标本类型须考虑感染症状、患者免疫状态、患者疾病严重程度及接受有创检查的风险、流行病学、可疑病原体的特性和播散能力和受累器官及感染部位等多方面因素。注：采集一份具有疾病代表性的标本看似简单，但其实每天都有不合格标本送到实验室。这 些标本中得到的实验数据常常会误导临床医生，给出错误的诊断，采取错误的治疗。基本原则基本原则：实验室标本采集手册应详细描述感染性疾病病原体检验的标本类型和临床适 应症，病原体应包括 (但不限于)病毒、细菌和真菌。问题问题1.1.如何选如何选择具有代表性的标本择具有代表性的标本u 指代不明确，应注明解剖部位，如阴道分泌物、(眼科)结膜囊分泌物等。u 分泌物不适合用来做培养，混有复杂的共生菌群。u 分泌物不适合作为伤口的标本。因为其采集伤口的表面，而不是感染进展的前缘。u 指代不明确，应注导管头来自的部位及导管类型;u 不同的导管头培养方式有差异，甚至有的导管头没有培养意义，如导尿管尖端。u 伤口标本应区分是表浅伤口、深部伤口或外科手术伤口。u 伤口标本：活检标本和抽吸物(脓液、渗出液)优于拭子标本。常见的标本采常见的标本采集集错误错误导管头标本导管头标本：分泌物标本分泌物标本：u 所有的痰标本在某种程度上都被口腔的正常菌群所污染。u 检验技师虽可以使用显微镜计数上皮细胞判断是否为合格的痰标本，但从痰标本分离到的细菌是否是真正的致病菌仍值得怀疑。u 痰液并不是不是诊断细菌性肺炎的最佳标本。u 血培养、支气管灌洗液或气管抽吸液可提供更可信的病原学信息。常见的标本采常见的标本采集集错误错误痰标本痰标本：u 除血液标本，不推荐同一患者24小时内送检多份标本。u 一般来说，对于口咽部和伤口的标本，同一患者1天送检两次或三次标本，与1天送检一份合格标本的临床价值是一样的。u 重复送检不仅给患者带来经济负担，同时也浪费大量实验室资源。一患者一患者)的相同类型的多份标的相同类型的多份标本本常见的标本采常见的标本采集集错误错误24小时内送小时内送检检(来自来自同同i)标本采集部位；j)检验项目；k)标本采集日期和时间；l)采集标本所用的特殊方法 (适用时)；mm)临床诊断和主要临床表临床诊断和主要临床表现现；n)特殊培养要求或可疑病原体 (适用时)；o)患者是否应用抗微生物药物及具体种类；p)患者和检验申请者的联系电话 (适用时)。a)患者姓名；b)患者性别；c)患者年龄或出生日期；d)患者唯一性标识，如病历号；e)就诊病区和病房；f)检验申请者姓名；g)检验申请者科室；h)标本类型；标本采集应依据检验项目申请，实验室应建立临床微生物学检验的申请程序。检验申请单提供的信息包括 (但不限于)下列内容：四、检验申请四、检验申请单单参考WS/T 640-2018 临床微生物学检验标本的采集和转运抗酸染色、分枝杆菌培养和分枝 杆菌核酸检验革兰染色和厌氧培养革兰染色、弱抗酸染色和培养10%KOH压片、真菌培养和抗原检验。另可乳酸酚棉兰染色或荧光染色等其实针对不同不同部位的标本，以及怀疑某种特定感染时采取的培养和检测手段是不经不经相同的。五、细菌学和真菌学检验项目的选择五、细菌学和真菌学检验项目的选择：a)无菌体液标本、组织标本、痰标本、支气管肺 泡灌洗液、尿液标本和脓液标本:b)怀疑隐球菌感染的脑脊液标本：e)怀疑诺卡菌感染的标本：f)怀疑侵袭性真菌感染的标本：c)怀疑分枝杆菌感染的标本：d)怀疑厌氧菌感染的标本：涂片染色镜检和培养墨汁染色、隐球菌荚膜多糖抗原检 验和隐球菌培养参考WS/T 640-2018 临床微生物学检验标本的采集和转运c)c)特殊的气体和温度环境要求。特殊的气体和温度环境要求。如：脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌等需要CO2环境，弯曲菌 和幽门螺杆菌培养需要微需氧环境；怀疑二相真菌感染，宜同时选择25及37两个温 度进行培养。d d)特定感染宜进行厌氧培养。特定感染宜进行厌氧培养。如：肝脓肿等封闭脓肿、腹膜炎、腹腔感染和糖尿病足感 染等。厌氧菌感染的特征：局部有气体产生为重要指征之一；发生在黏膜附近的感染；深部外伤，如枪伤、人或动物咬伤后的继发感染；分泌物有恶臭或暗红血色或在紫外光下发出红色荧光，或脓汁中有硫磺颗粒等。实验室发布的标本采集手册宜对特殊菌的培养要求给予明确说明，以保 证医护人员对采集的标本进行明确标识。a a)延长培养时间，延长培养时间，如：血液标本怀疑巴尔通体、布鲁菌、弗朗西斯菌等引起的感染，呼 吸道标本怀疑诺卡菌引起的感染等；b b)选择专用培养基。选择专用培养基。如：血液中怀疑分枝杆菌感染宜选择专用的分枝杆菌培养瓶；六、检验申请单中特殊培养要求六、检验申请单中特殊培养要求：a)患者姓名、患者唯一性标识；b)标本采集日期和时间；c)检验项目；d)标本类型；e)急查标本相应的标识 (适用时)。标签宜由放入冰箱后仍能粘牢的材料制成。标签贴在容器上，而非容器盖上。标签上提供的信息至少包括 (但不限于)下列内容：七、标本七、标本标标识识参考WS/T 640-2018 临床微生物学检验标本的采集和转运p 对环境敏感的微生物应立即处理。如淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、和流感嗜血杆菌。它 们对低温敏感，不能不能冷藏。p 不能不能冷藏的标本：脊髓液、生殖道标本、眼及内耳标本。p 把临床标本从一个实验室运送到另一个实验室，不论运输距离远近，都必须对标本的包 装和标签的说明进行严格要求。p 采集的标本最好在2 2小时小时内及时送到实验室。如果有延迟，需要按照特殊说明进行储存。p 一般来说，细菌培养的标本保存不能不能超过2424小时小时。p 需要进行厌氧培养厌氧培养的标本，其的运输方式取决于标本量的多少。特别小量小量的标本需要在 采集后15-3015-30分钟分钟内运送。活检组织可以在25厌氧运输环境下储存20-24小时。参考WS/T 640-2018 临床微生物学检验标本的采集和转运八、八、标本的运送标本的运送20n 血液 所有病房n 脑脊液 所有病房n 气管分泌物 所有病房n 眼标本 (眼内炎)所有病房n 心包液 所有病房n 羊水 所有病房n 下呼吸道标本 来自ICUn 手术标本 来自ICUn 关节液 诊断为化脓性关节炎1.紧急标本紧急标本代表患者有潜在的威威胁胁生命生命的疾病，需要立即得到处理。初步培养结果或0 0.5 5-1 1小时小时内得 到的初步信息需反馈给申请医生。需 要紧急处理的标本：标本到达实验室后应尽快处理。为优化标本处理进程，实验室应该有按照优先次序处理标本 的方法。一般来说，标本可分为：紧急标本、常规标本、选择性标本。九、样本优先九、样本优先性性参考临床微生物标本送检指南J.Michal Miller212.常规标本常规标本的患者没有潜在威胁生命的疾病，但他们可能罹患重要的感染性疾病，需要临床确诊或预防性观察。常规标 本包括：不分诊断或病房不分诊断或病房不分诊断或病房不分诊断或病房如果诊断为脓毒症来自ICU来自产科/妇科/外科手术且 咽喉标本 胸水 烧伤标本 眼标本 尿液、导管 任何尿液 女性生殖道标本九、样本优先九、样本优先性性 手术标本 下呼吸道标本 腹水来自手术室诊断为肺炎 诊断为腹膜炎参考临床微生物标本送检指南J.Michal Miller诊断为败血症或败血症性流产3.选择性标本选做标本也像其他标本一样经过专业和审慎的处理，但其结果比紧急诊断结果需要更多更多的验证。除了以上所列紧急或常规标本外，其他标本都是选做性标本。九、样本优先九、样本优先性性参考临床微生物标本送检指南J.Michal Miller实验室应建立标本接受的程序手册，制拒收标本标准：定标本被接受的标准，以及退检的机制。标本拒收标准旨在保证实验室结果的正确性和实验室人员的安全。2.标本类型和申请检验项目不符。3.容器破损的标本，容器表面严重污染的标本，或未使用正确容器采集的标本4.质量评估不合格的标本，如受到口咽部污染的标本，受到外界明显污染的标本，标本量不足的标本。5.同一天同一申请目的，送检两份标本。6.不符合培养要求的标本，如需厌氧培养的标本采取需氧培养的运输方式。7.采集部位、转运容器以及转运条件不符合要求，宜重新采集标本。参考WS/T 640-2018 临床微生物学检验标本的采集和转运实验室应拒收质量不合格不合格的标本。因为这样的标本被检测，将可能得到错误的结果，从而导致临床医生给出不正确的诊断和治疗。十、十、临床标本拒收标临床标本拒收标准准1.标本标记错误或无患者姓名的标本。常见微生物标本常见微生物标本的的 选择、选择、采集、采集、运运送送7.支气管镜标本 (支气管毛刷、支气管肺泡灌洗液)8.痰8.1 咳痰8.2 诱导痰8.3 气管吸引物9.鼻咽拭子10.口咽拭子1 1.粪便12.直肠拭子和肛拭子13.子宫劲内或宫颈标本14.男性泌尿生殖道标本15.眼科标本16.耳标本17.皮肤、结缔组织及伤口标本1.血液2.脑脊液3.腹腔标本3.1 腹水3.2 腹膜透析液4.胸水5.组织标本5.1 外科手术采集的组织标本5.2 经支气管镜肺活检的组织标本5.3 CT引导下经皮穿刺肺活检组织标本5.4 心律植入装置感染标本 (囊袋组织、赘生物、起搏器)5.5 关节假体周围感染标本 (关节假体、关 节液及假体周围组织)6.尿液标本6.1 导尿管尿液标本6.2 中段尿液6.3 耻骨上膀胱穿刺尿液6.4 婴幼儿尿液的收集标本标本类类型型26美国微生物学会A Guide to Specimen Management in Clinical Microbiology (临床微生 物标本送检指南)，J.Michal Miller著，马小军 翻译标本标本类类型型271.血流感染和心血管系统感染2.中枢神经系统感染3.眼部感染4.头颈部的软组织感染5.上呼吸道的细菌和真菌感染6.下呼吸道感染7.胃肠道感染8.腹腔内感染9.骨和关节感染10.泌尿道感染11.生殖系统感染12.皮肤和软组织感染13.虫媒传播感染14.病毒综合症15.血液和组织的寄生虫感染标本标本类类型型I.血标本的选择、采集和运送II.脑脊液标本的选择、采集和运送III.下呼吸道标本的选择、采集和运送IV.尿液标本的选择、采集和运送V.粪便标本的选择、采集和运送VI.皮肤软组织标本的选择、采集和运送常见微生物标常见微生物标本本(二)导管相关血流感染(三)感染性心内膜炎(一)血流感染一、一、血液血液标标本本1.1.采血指征采血指征可疑感染患者出现以下任一任一指征时，可考虑采集血培养：a)体温38 或 38)、头痛、脑膜刺激征、脑神经异常征象、烦躁不安。p年龄1岁的婴儿，排除其他原因，至少存在以下症状之一：发热 (肛 温38)、体温过低 (肛温5ml)无菌容器，室温，2小时真真菌菌念念珠菌属，珠菌属，其它他真菌其它他真菌Calcofluor染色真菌培养CSF无菌容器，室温，2小时参考 2018年美国感染性疾病微生物学实验室诊断应用指南缩写：AFB：抗酸杆菌，CSF：脑脊液表表9.9.中枢神经系统分流术感染的实验室诊中枢神经系统分流术感染的实验室诊断断(二)气管镜标本(三)气管吸出物(一)痰标本三、下呼吸道三、下呼吸道标标本本2.2.采集要采集要求求p争取首剂抗菌药物治疗使用前及更换抗菌药物前采集。p只要有可能得到合格的痰标本，应马上采集、送检。p宜在医护人员直视下留取合格痰标本。p送检痰标本后3天内不主张再次送检。1.1.采集指采集指征征p 咳嗽、脓性痰，伴有发热，影像学检查出现新的或扩大的浸润影；p气道开放患者，出现脓痰或血性痰；p考虑下呼吸道感染患者采集痰液标本，同时送血培养标本。(一一)痰标痰标本本参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会3.3.采集方采集方法法p准备无菌杯 (螺口、有盖、密封)、清水。p 向患者提供口头及书面采样指导，以保证患者充分理解口腔清洁、深咳、避免 口咽部菌群污染的意义和方法。p患者用清水漱口2-3次，有假牙者应先取下假牙；再用力咳嗽咳出深部痰液。p将痰液咳入无菌杯内。p盖好并拧紧杯盖，尽快送达实验室。4.4.检验申请检验申请单单p 申请单除基本信息外，还应注明临床症状临床症状、是否已使用抗菌药物等信息。p标识是普通培养、抗酸杆菌涂片、或真菌培养。p一定要注明标本采集时间。参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会(一一)痰标痰标本本5.5.标本运标本运送送p标本采集后室温2h内送达实验室。未及时送检 可导致肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌的 自溶现象。p不能及时送达或待处理标本应置于4 冰箱保存 (疑为肺炎链球菌和流感嗜血杆菌等苛养菌 不在此列)，以免杂菌生长。但不能超过24h。(一一)痰标痰标本本参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会6.6.标标p显p鳞p 白p或本拒本拒收收微镜下细胞学检查：标本受口咽部菌群污染。合格痰标本要求如下：状上皮细胞 10个/低倍视野细胞25个/低倍视野白细胞与鳞状上皮细胞的数量比值2.5。(一一)痰标痰标本本图片参考实用临床微生物学检验与图谱气管镜可采集到感染部位高质量的标本，均由呼吸科医师或经培训医师采集。其诊断下呼吸道感染的特异性可达82%-91%，诊断价值远高于痰标本。支气管肺泡灌洗液支气管肺泡灌洗液 (bronchoalceolarbronchoalceolar lavagelavage,BALBAL)利用纤维支气管镜向小支气管和肺泡中注入无菌生理盐水灌洗，在40mL-80mL回收的灌洗液中包含约1mL支气管末梢和肺泡中的分泌物；弃去前段可能污染的部分，收集其余部分后立即送。保护毛刷标本保护毛刷标本 (ProtectedProtected specimenspecimen brushbrush,PSBPSB)将纤维支气管镜插入亚段支气管可疑感染部位,经支气管镜刷检孔推出双层套管中的毛刷(远 端填塞聚乙二醇)，刷取脓性分泌物，采样后将毛刷回收入双层套管并退出纤维支气管镜，用无 菌剪刀剪断毛刷，置于含1mL生理盐水的无菌容器中(仅供需氧培养)，快速送检。(二二)气管气管镜标本镜标本经支气管镜肺活检术经支气管镜肺活检术 (transbronchialtransbronchial lunglung biopsybiopsy，TBLB)TBLB)在X线透视监视下施行，行活检。经纤支镜的活检孔插入活检钳，将活检钳送到预定的外周肺病灶进参考WS/T 499-2017 下呼吸道感染细菌培养操作指南检标本类标本类型型适合诊断的病原适合诊断的病原体体推荐试推荐试验验支气管灌洗支气管灌洗液液(BS)只用于诊断由严格致病菌引起的肺炎，如结核分枝杆菌、军团菌属、内源性 真菌1.用选择性培养基分离培养分枝杆菌、真菌 2.并做真菌涂片和抗酸染色 3.直接荧光抗体法 (DFA)检测军团菌和肺抱子菌保护毛刷标保护毛刷标本本(PSB)只用于诊断细菌性肺炎1.定量细菌培养2.革兰染色支气管肺泡灌洗支气管肺泡灌洗液液 (BAL)b适用于检测条件致病菌引起的肺部感 染的所有试验1.定量细菌培养2.分枝杆菌培养和抗酸染色3.真菌培养和染色4.直接荧光抗体法检测病毒5.直接荧光抗体法检测肺抱子菌a BAL适用于诊断适用于诊断:机械通气相关肺炎、机械通气相关肺炎、免疫低下患者肺炎、免疫低下患者肺炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重慢性阻塞性肺疾病急性加重 (AECOPD)、ICU病病 房重症患者、房重症患者、经抗菌药物治疗未获改善者、经抗菌药物治疗未获改善者、艾滋病患者、艾滋病患者、痰检阴性、痰检阴性、疑似肺结核或支气管结核者等。疑似肺结核或支气管结核者等。b BS来自主气道，来自主气道，从外观上无法与从外观上无法与BAL区别，区别，含有上呼吸道污含有上呼吸道污染菌。染菌。参考WS/T 499-2017 下呼吸道感染细菌培养操作指南表B B.1纤维支气管镜采集的标本适合诊断的病原体和检验项目p标本留取在吸痰杯内。3.3.标本运标本运送送p 标本采集后需尽快送到实验室，不能超过2h。p 对可疑性呼吸道传染病 (SARS、肺炭疽、肺鼠疫等)的患者标本，在采集、运送或保存过程中应注意生物安全保护。1.1.采集指采集指征征p有气管插管或气管切开的患者，可通过吸痰管从气道吸取标本。2.2.采集方采集方法法p将一次性无菌吸痰管推进呼吸道直至遇到阻力后开始抽吸(三三)气管气管吸出物吸出物类型类型/免疫状免疫状态态最常见病原最常见病原菌菌少见病原少见病原菌菌社区获得性社区获得性 (典型典型)肺肺炎炎肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌金黄色葡萄球菌、卡他莫拉菌、脑 膜炎奈瑟菌社区获得性非典型肺社区获得性非典型肺炎炎肺炎支原体、呼吸道病毒、流感病毒、肺炎衣原 体、军团菌属沙眼衣原体、结核分枝杆菌、真菌 等吸入性肺吸入性肺炎炎厌氧菌、金黄色葡萄球菌、需氧革兰阴性杆菌医院获得性肺医院获得性肺炎炎革兰阴性杆菌 (肠杆菌属/克雷伯菌属/不动杆菌 属/假单胞菌属)、金黄色葡萄球菌、厌氧菌、社区 获得性肺炎的典型菌军团菌，肺炎链球菌血液播散性肺血液播散性肺炎炎金黄色葡萄球菌、链球菌需氧革兰阴性杆菌免疫抑制宿主条件致病免疫抑制宿主条件致病菌菌 感染性肺感染性肺炎炎社区获得性肺炎典型菌、奴卡菌属、念珠菌属、条 件致病真菌、曲霉菌环境暴露引起的肺环境暴露引起的肺炎炎结核分枝杆菌、军团菌属、双相真菌、曲霉属、肺 炎支原体、肺炎衣原体鼻疽假单胞菌、假鼻疽假单胞菌、鼠疫耶尔森菌、贝纳柯克斯体、图 拉热弗朗西斯菌急性气管急性气管炎炎病毒，百日咳博德特菌，肺炎支原体和肺炎衣原 体表A A.1下呼吸道感染的主要类型及主要病原体参考WS/T 499-2017 下呼吸道感染细菌培养操作指南(二)导尿管采集尿液(三)耻骨上膀胱穿刺(一)清洁中断尿四、尿液四、尿液标标本本1.1.采集指采集指征征p患者出现尿频、尿急、尿痛、血尿、肾区疼痛等症状，p 同时可能伴有寒颤、高热、白细胞计数升高，怀疑存在泌尿系统感染；p或尿常规结果提示泌尿系统感染；p或留置导尿管患者出现发热，应考虑送检尿液标本。p无症状的患者不建议常规进行尿培养检测。泌尿系统感染可分为单纯性尿路感染、复杂性尿路感染及尿脓毒血症，诊断主要通过采集尿液标本进行微生物学检测。其病原菌是大肠埃希菌；其他致病微生物还包括其他细菌、假丝酵母等。四、尿液标四、尿液标本本参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会p 分开两腿；p 用肥皂水清洗尿道口部位；p 手持采样杯外侧，避免接触杯口边缘。p 先将少量尿液排入便池，然后用采样杯采集半杯尿液；p 将盖子盖好、旋紧；p 检查杯盖是否密封，避免溢洒。参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会清洁的中段尿标本，是泌尿系感染诊断的主要标本；中段尿标本的采集往往由患者独立完成，应向患者充分说明留取无污染中段尿的意义和具体采集方法。尽可能在未使用抗菌药 物前送检，晨尿最佳。采集方法如下：(1 1)女性：女性：在采集标本前充分清洗尿道口在采集标本前充分清洗尿道口部位。部位。2.2.标本采集：标本采集：(一一)清洁中清洁中段段尿尿(2 2)男性：男性：在采集在采集标本前充分清洗尿道口。标本前充分清洗尿道口。p 将包皮上翻 (如果未割包皮)，充分暴露龟头；p 用肥皂水清洗尿道口；p 手持采样杯外侧，避免接触杯口边缘。p 先将少量尿液排入便池，然后用采样杯采集半杯尿液；将盖子盖 好、旋紧；p 检查杯盖是否密封，避免溢洒。2.2.标本采集：标本采集：(一一)清洁中清洁中段段尿尿参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会因存在着极大的污染可能，禁止禁止从集尿袋中采集标本，可直接穿刺导尿管近端侧壁采集尿液标本。具体操作如下具体操作如下：(1)夹闭导尿管不超过30min；(2)用酒精棉球消毒清洁导管近端采样部位周围外壁；(3)将注射器针头穿刺进入导管腔，抽吸出尿液；(4)收集的尿液置于无菌尿杯或试管中；(5)检查杯盖是否密封，避免洒溢。2.2.标本采集：标本采集：(二二)导尿管采导尿管采集集尿液尿液参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会如需进行厌氧菌培养或儿童及其他无法配合获得清洁尿液标本时，应采用耻骨上膀胱穿刺。具体操作具体操作如下：如下：(1)消毒脐部至尿道之间区域的皮肤。(2)对穿刺部位进行局部麻醉。(3)在耻骨联合和脐部中线部位将针头插入充盈的膀胱。(4)用无菌注射器从膀胱吸取尿液。(5)无菌操作将尿液转入无菌螺口杯，尽快送至实验室培养。(6)厌氧菌培养，可进行床旁接种，将培养平板放入厌氧袋罐内送检；或无菌操作直接将注射器中的尿液注入厌氧血培养瓶中，迅速送检。参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会2.2.标本采集：标本采集：(三三)耻骨上膀耻骨上膀胱胱穿刺穿刺3.3.标本运标本运输输p尿标本采集后应立即送检。p若不能在采集3030minmin内进行培养，应放入4冰箱保存，但也不能超过24h。4.4.其他事其他事项项p尿液标本培养出3种或3种以上细菌，通常提示尿液采集时受到污染。p拒绝导尿管尖端培养，无临床价值。p如果事先未与实验室沟通并明确判断标准，实验室应根据实验室操作手册，不 对“所有生长的微生物”做判断。参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会四、尿液标四、尿液标本本病原病原体体诊断方诊断方法法最佳的样最佳的样本本运送要点和理想的运输时运送要点和理想的运输时间间革兰阴性革兰阴性菌菌肠杆菌科：肠杆菌科：包括大肠埃希菌包括大肠埃希菌，克雷伯氏菌，克雷伯氏菌，变形杆菌，变形杆菌，其他其他 假单胞菌，假单胞菌，其他非发酵其他非发酵革革兰氏兰氏 阴性杆阴性杆菌菌常规需氧细菌培养革兰染色 (可选、低灵敏 度)清洁中段尿，或 直接获取的尿液使用无菌防漏容器；冰箱保存(4c)或使用尿液输送管，确 保1 h送至实验室。革兰阳性革兰阳性菌菌肠球菌肠球菌属属金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌;腐生性葡萄球菌腐生性葡萄球菌;解脲棒状杆解脲棒状杆菌菌无乳链球菌无乳链球菌(B B群链球菌群链球菌)常规需氧细菌培养革兰染色 (可选、低灵敏 度)清洁中段尿，或 直接获取的尿液使用无菌防漏容器；冷藏 (4)，或使用尿液输送管，确保1 h送至实验室。分枝杆分枝杆菌菌结核分枝杆结核分枝杆菌菌分枝杆菌培养首段尿最好采集20ml尿液，运输 过程保持冷藏(4)。病病毒毒腺病腺病毒毒NAATa清洁中段尿密闭的无菌容器，1h内送至 实验室BKBK多瘤病多瘤病毒毒采集尿液、血浆或血清进 行定量NAATa;血液血清EDTA或枸橼酸盐抗凝管，RT 促凝管，RT缩写：缩写：EDTAEDTA，丁二胺四乙酸；丁二胺四乙酸；NAATNAAT，核酸扩增试验；核酸扩增试验；R RT T，室温；室温；a美国食品和药品管理局未批准认证的美国食品和药品管理局未批准认证的NAATNAAT测试测试。参 考 A Guide to Utilization of the Microbiology Laboratory for Diagnosis of Infectious Diseases:2 0 1 8 表34.膀胱炎和肾盂肾炎的实验室诊断胃肠炎、胃肠炎、感染性和毒素引感染性和毒素引起起 的腹的腹泻泻五、粪便五、粪便标标本本粪便是诊断胃肠道感染的主要标本。胃肠道感染，包括细菌性痢疾、微生物引起的胃肠炎、细菌性食物中毒、肠道感染、消化性溃疡和抗菌药物相关性腹泻等疾病。由于引起胃肠道感染的微生物种类繁多，诊断比较困难，因此加强对胃肠道标本的病原微生物检测具有重要临床意义。1.1.采样采样指指征征p 当患者出现腹痛、腹泻 (水样便、脓血便)，或伴有发热；p粪便常规镜检异常，建议采集粪便标本，进行细菌培养。五、粪便五、粪便标标本本参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会p若无黏液、脓血，则在粪便上多点采集送检。此为常规方法。(2 2)直肠拭子直肠拭子法法p用肥皂水将肛门周围洗净，将蘸有无菌生理盐水的棉拭子插入肛门4-5cm(儿童为2-3cm)。p棉拭子与直肠黏膜表面接触，轻轻旋转拭子，可明显在拭子上见到粪便。p将带有粪便标本的棉拭子插入运送培养基，立即送检。p本方法仅适用于排便困难的患者或婴幼儿，不推荐使用拭子做常规标本。2.2.采集方采集方法法(1 1)自然排便自然排便法法p患者在干燥清洁便盆 (避免使用坐式或蹲式马桶)内自然排便后，p挑取有脓血、黏液部分的粪便2-3g (液体粪便则取絮状物1-3ml)放入无菌 便盒内送检。五、粪便五、粪便培培养养3.3.标本运标本运送送p粪便标本应尽快送检，室温下运送标本时间不超过2h。p若不能及时送检，可加 入 ph=7.0磷酸盐甘油缓冲液或使用Cary-Blair 运送培养基置于4冰箱保存，保存时间不超过24h。p直肠拭子采集的标本应置入 Cary-Blair 运送培养基或GN肉汤中送检。Cary-Blair运送培养基：作空肠弯曲杆菌、霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌采样时用。成分：1000mL蒸馏水中琼脂 (0.5%)和9mL1%氯化钙溶液 (pH8.4)。五、粪便五、粪便培培养养参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会病原病原体体诊断程诊断程序序最佳样最佳样本本转运要点和最佳转运时转运要点和最佳转运时间间细细菌菌艰难梭艰难梭菌菌NAAT粪便密闭容器，RT，2hGDH抗原和毒素检测结果有无差异由 NAAT结果来判断；或NAAT加毒素作 为程序的一部分执行粪便密闭容器，RT，2h沙门氏菌沙门氏菌属属NAAT粪便密闭容器，RT，2hb志贺菌志贺菌属属常规粪便肠道病原体培养a弯曲杆菌弯曲杆菌属属大大 肠肠 埃埃 希希 菌菌 (包包 括括 大大 肠肠 埃埃 希希 菌菌 O157:H7和其他产志贺毒素大肠和其他产志贺毒素大肠埃埃希希 菌菌)志贺毒素基因NAAT志贺毒素免疫测定法大肠埃希菌 O157:H7培养c粪便密闭容器，RT，2hb耶尔森菌属、耶尔森菌属、弧菌属、弧菌属、邻单胞菌邻单胞菌属属 大肠埃希菌大肠埃希菌 (肠毒性、肠毒性、肠侵袭性、肠侵袭性、肠肠 致病性、致病性、肠聚集性肠聚集性)NAATd粪便密闭容器，RT，2hb耶尔森菌属、耶尔森菌属、弧菌属、弧菌属、水气单胞水气单胞菌菌 邻单胞菌属、邻单胞菌属、迟钝爱德华氏迟钝爱德华氏菌菌属属金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌大肠埃希菌 (肠肠毒毒 性、性、肠侵袭性、肠侵袭性、肠致病性肠致病性、肠聚集性肠聚集性)特殊粪便培养e粪便密闭容器，RT，2hb蜡样芽胞杆蜡样芽胞杆菌菌产气荚膜梭产气荚膜梭菌菌金黄色葡萄球金黄色葡萄球菌菌毒素检测专门程序f粪便密闭容器，RT，2h肉毒杆肉毒杆菌菌小鼠致死性试验g (通常在国家公共卫 生实验室进行)粪便、胃内容物、呕吐物h密闭容器保持4C储存和运输标本；不要 冷冻表27.胃肠炎、感染、毒素引起的腹泻的实验室诊断参考2018年美国感染性疾病微生物学实验室诊断应用指南缩写：RT，室温病原病原体体诊断程诊断程序序最佳样最佳样本本转运要点和最佳转运时转运要点和最佳转运时间间寄生寄生虫虫溶组织内阿米溶组织内阿米巴巴人芽囊原人芽囊原虫虫i脆弱双核阿米脆弱双核阿米巴巴结肠小袋结肠小袋虫虫蓝氏贾第鞭毛蓝氏贾第鞭毛虫虫线虫类，线虫类，包括蛔虫、包括蛔虫、粪类圆线虫粪类圆线虫j、毛、毛 首鞭虫、首鞭虫、钩虫钩虫绦绦虫虫吸吸虫虫OVA和寄生虫检测，包括永久染色涂 片粪便粪便无固定剂 1 h RT，5%-10%缓冲福尔马林和改良PVA，SAF，或市售的单剂量瓶，2-24h溶组织内阿米溶组织内阿米巴巴溶组织特异性免疫测定NAATd粪便粪便无固定剂Cary-Blair 转运,RT,24 h蓝氏贾第鞭毛蓝氏贾第鞭毛虫虫k隐孢子隐孢子虫虫kEIADFANAATd组织学检查并电镜确认粪便粪便粪便有固定剂，2-24h粪便有固定剂，2-24h Cary-Blair 转运,RT,24 h 福尔马林容器，RT，2-14d球虫，球虫，包括隐孢子虫包括隐孢子虫k、环孢环孢菌菌属、属、等等 孢球虫孢球虫属属浓缩样品的改良抗酸染色l粪便粪便无固定剂 1 h RT，5%-10%缓冲福尔马林和改良PVA，SAF，或市售的单剂量瓶，2-24h隐孢子虫隐孢子虫d，环孢环孢子子虫虫NAATd粪便Cary-Blair 转运,RT,24 h微孢子微孢子虫虫汰选样品的改良三色染色法l粪便粪便无固定剂 1 h RT，5%-10%缓冲福尔马林和改良PVA，SAF，或市售的一次性瓶，2-24h蠕形驻肠线蠕形驻肠线虫虫蛲虫短桨或透明胶带 (Scotch tape)肛周区RT，2h表27.胃肠炎、感染、毒素引起的腹泻的实验室诊断(续)参考2018年美国感染性疾病微生物学实验室诊断应用指南缩写：RT，室温病原病原体体诊断诊断程序程序最佳最佳样本样本转运转运要点和最佳转运时间要点和最佳转运时间病毒病毒星状星状病毒病毒m杯状病毒杯状病毒m (诺如诺如病毒，病毒，副流感副流感 病毒病毒)肠道肠道腺病毒腺病毒肠道病毒肠道病毒/副肠孤病毒副肠孤病毒属属m，n 轮状病轮状病毒毒mNAAT粪便密闭容器，RT，2h轮状轮状病毒病毒肠道肠道腺病毒腺病毒EIAo粪便密闭容器，RT，2h肠道腺病肠道腺病毒毒p肠道病毒肠道病毒/副肠孤病毒副肠孤病毒属属n病毒培养粪便病毒转运培养基，冷藏，2h巨细胞病巨细胞病毒毒组织病理学检查巨细胞病毒 (CMV)培养病毒载量NAATq检 检 浆活 活 血福 尔 马 林 容 器，R T，2-14d无菌容器，RT，立即 EDTA血浆管，RT，2 h或 2 -8，2 4 h，冷 冻-20可储存更长时间杯状病毒杯状病毒 (诺如病毒，诺如病毒，副副流流感病感病 毒毒)公共卫生官员进行暴发调查粪便密闭容器，RT，2h缩写：CMV，巨细胞病毒；DFA、直接荧光免疫分析；EDTA、乙二胺四乙酸；EHEC，肠出血性大肠埃希菌；EIA，酶免疫分析；GDH，谷 氨酸脱氢酶；NAAT，核酸扩增试验；PVA，聚乙烯醇；RT，室温；SAF，醋酸钠福尔马林运输。表27.胃肠炎、感染、毒素引起的腹泻的实验室诊断(续)参考2018年美国感染性疾病微生物学实验室诊断应用指南(二)创伤相关皮肤感染(三)手术部位感染(一)烧伤创面感染六、皮肤软组织六、皮肤软组织标标本本主要途径，并混合多种微生物感染 (兼性厌氧菌和厌氧菌)累及皮下组织。p 坏死性感染：如坏死性筋膜炎，通常由链球菌引起。这种感染通常发生在肢体末端 的穿刺伤后，会危及生命，需要立即识别和干预。p 伤口的表面培养物，包括褥疮溃疡，价值不高，因为它们通常为定植菌，其不能与 潜在的病原体区分。p 彻底清创后的组织活检或骨组织活检是最有价值的标本皮肤和软组织感染 (skin and soft tissue infections,SSTIs)p 分为原发性感染、与继发性感染和坏死性感染。p 原发性感染：蜂窝组织炎、脓疮、脓疱病、毛囊炎、疖病和丹毒，通常由窄谱的化 脓性细菌 (金黄色葡萄球菌和/或化脓性链球菌A群链球菌)引起。p 继发性感染：先前病变 (创伤或手术伤口、溃疡)的延伸，它是病原微生物侵入的六、皮肤软组织六、皮肤软组织感染感染p烧伤患者的创面、组织活检、血培养等的细菌学检测结果对临床医生进行烧 伤感染的诊断和治疗十分重要。p两种标本进行定量培养：(1)定量的表面拭子 (quantitative surface swabs)：最好每周2 2次对同一 部位进行采样，以准确监测细菌定植的趋势。但其仅反映伤口表面的微生物 菌群，而不能反映皮下或深层受损组织的潜在感染。(2)活检组织的细菌定量培养：其更准确的反映微生物侵袭的程度。出现全身感染症状时，应同时采集血培养标本。p采集标本前，应对创面彻底清洁，且局部未应用未应用抗菌药物。参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会(一一)烧伤创面烧伤创面感感染染2.2.标本采标本采集集p首先应用无菌生理盐水或注射用水清洁创面。p表面拭子：采用无菌棉拭子用力刮取创面，置无菌试管内，封闭管口；p组织细菌定量培养：在无菌条件下，切取深度烧伤痂下组织，以0.3-0.5g为宜。p厌氧培养：应采用注射器抽吸的方法采集深部、创面边缘的标本。1.1.采样指采样指征征p 由于烧伤的早期创面无菌，烧伤后1212h h内内勿采集标本。p 当患者出现发热、创面恶化时，考虑采样。(一一)烧伤创面烧伤创面感感染染参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会4.4.标本运标本运送送p 应尽快将标本送至实验室进行检测。p 若1h内无法将标本送达实验室，需4冷藏保存。p 不要将用于培养的组织标本置于福尔马林中。3.3.检验申请检验申请单单p 申请单除基本信息外，应注明采集部位，该部位是表浅还是深部。p 标明需氧或者厌氧培养，必要时需注明病程的阶段。(一一)烧伤创面烧伤创面感感染染参考临床微生物标本采集和送检指南 中华预防医学会医院感染控制分会病原病原微生物微生物诊断诊断程序程序最佳最佳标本标本运输运输问题和最佳运输时间问题和最佳运输时间细菌细菌金金黄色葡萄球菌黄色葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌肠球肠球菌属菌属铜绿铜绿假单胞菌假单胞菌大