DB22_T 3316-2021 滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程.docx

ICS 65.020CCS B 15DB22吉林省地方标准DB 22/T 33162021滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程Code of practice for production of diapause Trichogramma dendrolimi2021 - 11 - 26 发布2021 - 12 - 15 实施吉林省市场监督管理厅发 布DB22/T 33162021前言本文件按照 GB/T 1.12020 标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：吉林农业大学。本文件主要起草人：张俊杰、杜文梅、阮长春、张雪。IDB22/T 33162021滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程1  范围本文件确立了滞育松毛虫赤眼蜂（Trichogramma dendrolimi Ishii）生产的程序，规定了前期准备、赤眼蜂繁育、精选与储存等阶段的操作指示，描述了记录档案等追溯方法。本文件适用于利用柞蚕卵繁育的滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产。2  规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3  术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1滞育诱导diapause induction利用持续低温诱导松毛虫赤眼蜂稳定进入滞育状态的一个过程。3.2滞育持续期diapause maintenance赤眼蜂进入稳定滞育到解除滞育前的阶段。3.3滞育解除diapause termination通过条件控制，使赤眼蜂结束滞育期，继续发育至羽化出蜂的过程。4  滞育赤眼蜂生产程序滞育松毛虫赤眼蜂生产分为 3 个阶段。程序流程图如图 1 所示：图1  滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产流程5  生产前准备1 a)蜂种繁育室不低于 20  m ； b)暖茧车间不低于 300  m ； c)采卵室不低于 50  m ； d)洗卵室不低于 20  m ； e)消毒及晾干室不低于 25  m ； f)接种室不低于 10  m ； g)暗室不低于 50  m ； h)发育室不低于 50  m ； i)保鲜冷藏室不低于 100  m ； j)物品保存库不低于 20  m 。DB22/T 331620215.1  厂房及规模按照 150 亿头滞育松毛虫赤眼蜂生产规模应包括：22222222225.2  设备低温生化培养箱、药品保存箱、搅拌器、脱水机、烘干机、柞蚕卵色选机、空调、排风机、电暖气、加湿器、温湿度自控仪、电脑及打印机、发育盘架、手推运输车。5.3  常用药品及材料5.3.1  25 g/L  30 g/L 苯扎溴铵溶液（新洁尔灭消毒液）。5.3.2  孔径为 0.15 mm 的纱网。5.3.3  孔径为 2.00 mm 的纱网。5.4  蜂种5.4.1  蜂种采集生产前 1 年的 7 月下旬至 8 月初，在自然条件下未放蜂玉米田采集玉米螟卵块，以半山区近水边为宜。5.4.2  蜂种纯化采集的玉米螟卵块带回室内发育培养，将寄生变黑的卵块单独装入试管，羽化出蜂后引单头雌蜂，放入装有 100 粒米蛾卵的试管（10 mm ×70 mm）转接寄生。发育条件为（25±1）、RH（75±5）%、光照 16 h、 黑暗 8 h。5.4.3  松毛虫赤眼蜂鉴定根据雄性赤眼蜂外生殖器的形态特征进行种类鉴定，参照附录 A 执行。5.4.4  蜂种滞育保存鉴定纯化的松毛虫赤眼蜂，经 3 代  5 代筛选繁殖，建立实验种群后保存使用：a)将纯化的松毛虫赤眼蜂蜂种在 (25±1) 、RH (75±5)% 条件下，按蜂卵（柞蚕卵）比 2:1 接种 24 h 后去除种蜂；b)接蜂后发育 36 h  46 h 到幼虫中期，置入 12 、RH (75±5)% 的条件下，滞育诱导 30 d，赤眼蜂滞育；2DB22/T 33162021c)将滞育持续期的赤眼蜂置入(3±1) 、RH (75±5)% 的条件下，进行滞育解除 60 d  90 d；d)经 10  48 h、15  24 h 过渡后，按光照 16 h，(25±1) 、RH (75±5)%；黑暗 8 h，(20±1) 、RH (75±5)%，变温发育至出蜂。5.5  柞蚕茧5.5.1  备茧5.5.1.1  备茧时期在生产前一年的 11 月  12 月份开始按预定计划备茧。5.5.1.2  茧质要求5.5.1.2.1  健康雌茧率  90%；5.5.1.2.2  雄茧率  7%；5.5.1.2.3  死伤茧率  3%；5.5.1.2.4  割口茧率  8%；5.5.1.2.5  发育蛹和嫩蛹  5%；5.5.1.2.6  茧层率  10%，无薄皮茧、瘪茧；5.5.1.2.7  茧干燥，未在 -3  以下低温储存。5.5.1.3  备茧数量按每繁 150 亿头松毛虫赤眼蜂用茧 15000 kg计算。5.5.2  蚕茧保存5.5.2.1  保存温度 (3±1) 、RH (60±5)%。5.5.2.2  适当通风换气，保持空气含氧量。5.5.2.3  防止接触有毒有害物质。5.5.2.4  储存时间不低于 45 d。6  工厂化生产6.1  灭菌消毒在生产前 1 周，将所有繁蜂车间及繁蜂工具，进行集中消毒。消毒方法为如下：a)首先对消毒对象进行清水或 0.5%  1% 氢氧化钠、1% 的漂白粉水冲洗；b)用生石灰或石灰水对繁蜂车间喷刷覆盖；c)将繁蜂工具等置于繁蜂车间内，用毒消散或硫磺等熏蒸消毒。保持室温 24 以上，RH 75% 以上，时间 24 h。6.2  蜂种复壮与扩繁6.2.1  复壮根据生产计划，定期对松毛虫赤眼蜂蜂种，以米蛾卵和柞蚕卵交替繁育复壮：a)接蜂比例：米蛾卵蜂卵比 1：200，柞蚕卵蜂卵比 1:1；3DB22/T 33162021b)接蜂时间： 24 h；c)发育条件：(25±1) 、RH (75±5)%、光照 16 h、黑暗 8 h；d)复壮周期：30 d。6.2.2  扩繁以柞蚕卵为寄主，将蜂种扩繁 2 代  3 代：a)接蜂比例： 1：30 （蜂种寄生柞蚕卵：新鲜卵）；b)接蜂时间：24 h；c)接蜂条件：全黑暗，(25±1) 、RH (75±5)%；d)发育条件:同 6.2.1 c)；e)将末 1 代蜂种发育至幼虫中后期置于 (3±1) 、RH (75±5)% 条件下冷藏，冷藏时间  15d。6.3  寄主卵6.3.1  暖茧发蛾暖茧室保持 18   22 ，RH (70±5)% ，20 d  25 d 后柞蚕茧羽化出蛾。6.3.2  收蛾在柞蚕蛾羽化期内，随时采收刚羽化（展翅前）雄蛾，避免交尾，次日清晨人工收雌蛾，用于当天繁蜂或储存在 (3±1)  的冷库中备用。6.3.3  剖腹取卵用人工方法将柞蚕雌蛾腹部与头胸部分离，剖腹取卵。6.3.4  洗卵用搅拌器将卵与蛾腹内杂物搅拌分离，漂净杂物，然后反复用清水冲洗至卵粒无杂质。6.3.5  卵面消毒将清洗干净的新鲜卵用 0.1% 的苯扎溴铵溶液浸泡 10 min。6.3.6  脱水晾卵消毒后的新鲜卵用纱网袋装好，用脱水机进行初步脱水，然后用烘干机烘干，温度不超过 25  28 。6.3.7  清除绿卵烘干的新鲜卵用色选机等专用设备清除绿卵后，再用于接蜂，绿卵率  4%。6.4  接蜂蜂种卵与新鲜柞蚕卵按 1:25 1:30 比例进行接蜂。当蜂种羽化 25%  30% 时，将种蜂卵均匀撒在接蜂盘中，铺上孔径为 2 mm 的纱网，再将新鲜卵平铺到纱网上，送入 (25±1 )、RH (75±5)%的暗室内产卵寄生，36 h  48 h 后，去除蜂种，标明日期送入发育室发育。6.5  培养发育4DB22/T 33162021接蜂后的寄生卵分批次送入 (25±1) 、RH (75±5)% ，自然光照条件下的发育室，继续发育 12h  24 h，镜检至幼虫中后期。6.6  滞育诱导将发育到幼虫中后期的松毛虫赤眼蜂，在 10   12 、RH (75±5)% 的全暗条件下，平铺在卵盘内，卵厚 3 cm  4 cm，每天翻动两次，诱导 25 d  30 d后，赤眼蜂滞育。6.7  滞育解除诱导滞育结束后即进入到滞育持续期，将滞育的赤眼蜂转入 (3±1) 、RH (75±5)% 的黑暗条件下滞育解除，时间 70 d  90 d。6.8  变温发育滞育解除后的赤眼蜂采用分步渐变加温的方式进行发育：a)在 (10±1) 、RH (75±5)% 全暗条件下加温 48 h；b)在（15±1）、RH (75±5)% 全暗条件下加温 24 h；c)在日间 25  下 16 h、夜间 20  下 8 h，RH (75±5)% 室内条件下发育至蛹后期。7  精选与储存7.1  精选将发育至蛹后期的赤眼蜂寄生卵，用绿卵色选机去除未寄生卵、劣质卵、绿卵及其它杂质。7.2  储存将精选后的赤眼蜂转入 (3±1) 、RH (75±5)% 的保鲜冷藏室储存备用，储存时间  7 d。8  记录档案建立滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产档案，对整个生产过程进行详实记录，保存 2 年以上，做到可追溯：a)每天的温湿度记录；b)每批次滞育赤眼蜂的生产日期；c)每批次滞育赤眼蜂的滞育率和解除滞育率；d)每批次滞育赤眼蜂的加温日期。5DB22/T 33162021AA附录A（资料性）松毛虫赤眼蜂形态学鉴定方法A.1  制作鉴定玻片将用浓度 75%  95% 酒精浸泡的雄性赤眼蜂标本按下列方法制作为玻片：a)在 5% 的 KOH 溶液中浸泡 8 h  15 h，并用水清洗干净，置于载玻片上；b)在解剖镜下，用昆虫针挑取雄蜂的外生殖器，清除其他组织，盖好盖玻片；c)在显微镜下观察并测量阳基背突、腹中突及 D 值。A.2  观察测量并鉴定在显微镜下观察赤眼蜂雄性外生殖器并测量其阳基背突、腹中突及 D 值，符合下列特征的属于雄性松毛虫赤眼蜂：a)阳基背突有明显宽圆形的侧叶，末端达 D 值的 3/4 ；b)腹中突的长度约等于 D 值的 3/5  3/4 ；c)钩爪末端伸达 D 值的 3/4。图A.1  松毛虫赤眼蜂雄性外生殖器-阳基_6