DB22_T 3604-2023 甘薯地方种质资源普查、评价及离体保存技术规程.docx

ICS 65.020CCS B 0522吉林省地方标准DB22/T 36042023甘薯地方种质资源普查、评价及离体保存技术规程Technical code of practice for investigation，evaluation andin vitro conservation of local sweetpotato germplasm resources2023-12-28 发布2024-02-01 实施吉林省市场监督管理厅发 布DB22/T 36042023前言本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：吉林省蔬菜花卉科学研究院。本文件主要起草人：徐飞、张胜利、韩忠才、孙静、邱博妍、王中原、张倩、马艺荞、李天亮。IDB22/T 36042023甘薯地方种质资源普查、评价及离体保存技术规程1范围本文件确立了甘薯地方种质资源普查、评价及离体保存技术流程，规定了普查准备、普查实施、鉴定评价、离体保存的操作指示，描述数据库建立、记录与档案的追溯方法。本文件适用于甘薯地方种质资源普查、评价及离体保存。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 2260中华人民共和国行政区划代码GB/T 19557.32植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南 甘薯NY/T 402脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程NY/T 1320农作物种质资源鉴定技术规程 甘薯NY/T 2176农作物优异种质资源评价规范 甘薯NY/T 2939甘薯种质资源描述规范3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4甘薯地方种质资源普查、评价及离体保存流程甘薯地方种质资源普查、评价及离体保存由普查准备、普查实施、鉴定评价、离体保存和数据库建立及档案管理 5 个阶段构成，其中普查准备分为 3 个步骤，普查实施分为 4 个步骤，鉴定评价分为 2个步骤，离体保存分为 9 个步骤，数据库建立及档案管理分为 2 个步骤。程序流程见图 1。1DB22/T 360420235普查准备图1 甘薯地方种质资源普查、评价及离体保存流程图5.1普查对象普查对象为行政区域内甘薯地方种质资源：a)  经过人类长期驯化，并经自然选择、人工选择形成的世代相传种植的具有不同特点的群体；b)  对本地区自然条件的适应性强、抵抗力和忍耐能力好的甘薯地方种质资源；c)  优先普查特异的甘薯地方种质资源。5.2普查内容5.2.1普查区域内甘薯地方种质资源的种类、来源、数量（栽植面积）、分布、保存状况等，记录分布地点的生态环境，采集样本。5.2.2普查区域内甘薯地方种质资源的生长情况、生物学性状、抗逆性等。5.3普查方法5.3.1资料查阅资料查阅包括不限于：a)  行政区划图、地形图、气候、地理、土壤和社会经济等资料；b)  农业年鉴、农业管理部门记录、地方志、县志、技术报告、论文、专著等；c)  地方及国家种质库（圃）资料。5.3.2知情人访谈（走访）2DB22/T 36042023知情人访谈（走访）包括不限于：a)  通过会议、访谈或走访等形式，召集基层农业技术人员和熟悉情况的村民代表进行座谈，以此了解、询问和调查区域内的甘薯地方种质资源；b)  确定重点普查线路和重点普查区域。5.3.3征集甘薯地方种质资源征集未入地方及国家种质库（圃）保存的甘薯地方种质资源。6普查实施6.1实地普查6.1.1在资料查询、访谈、征集的基础上，确定普查地点、普查路线，进行实地普查。6.1.2普查小组由专业技术人员、当地向导人员等 2 人4 人组成。6.1.3根据普查表内容开展普查，记录调查结果（见表 A.1 和表 B.1）和普查报告。依据 GB/T19557.32、NY/T 1320、NY/T 2176 和 NY/T 2939 调查甘薯地方种质资源的生物学性状。6.2样本收集6.2.1收集地点收集地点主要为田间、贮藏窖和农贸市场等。6.2.2收集方法按混合群体方式收集，即按群体内不同类型的比例取样。6.2.3收集数量从不同植株上收集 10 个15 个薯块（薯苗）。6.2.4样本命名6.2.4.1有名称的种质资源应采用原名称。6.2.4.2无名称的种质资源可按县（市、区）名加某一特征或加作物名命名，如长白黄瓤甘薯。6.2.4.3同一地区同一作物相同名称的不同种质材料，在名称后加符号“”和数字（1、2、3 等）进行区别，如长白黄瓤甘薯1、长白黄瓤甘薯2。6.2.4.4不同地区同一作物相同名称的不同种质材料，在名称前冠以县（市、区）名进行区别，如长白黄瓤甘薯、靖宇黄瓤甘薯。6.2.5样本编号6.2.5.11 份种质材料应给予 1 个唯一的编号。6.2.5.2样本编号由字母 P 和 9 位数字组成：P+县（市、区）代码 6 位+顺序号 3 位。6.2.5.3地区代码按 GB/T 2260 执行。6.2.6图像收集6.2.6.1样本应及时拍照或录像，详细记录样本的编号、拍摄时间、地点、画面内容和拍摄人等。3DB22/T 360420236.2.6.2每份种质图像资料应包括薯块或薯苗、完整植株、生境等的照片或录像，应反映种质材料的典型特征特性。6.2.6.3图片格式为“.jpg”，像素大小至少为 1024×3648 或 600 dpi。6.2.6.4照片和录像的文件名应按样本编号加内容命名，同一份样本的照片和录像放在同一个文件夹内，文件夹用样本编号命名。6.3样本整理与处理6.3.1整理6.3.1.1收集的样本形成 1 份清单，逐份核对查看收集的样本、编号、图像、调查表是否完整。6.3.1.2对缺失的样本应及时重新收集，对缺项或不一致的信息及时补充修订。6.3.1.3为确保收集的种质资源可长期保存利用，将样本分成 2 份，1 份用于鉴定评价，1 份由具有相应条件的薯类种质资源库长期保存利用。6.3.2处理薯块样品存放于阴凉通风处，温度在 9  以上；薯苗可在阴凉保湿处短时存放，应尽快假植或定植。6.4撰写与整理工作日志6.4.1工作日志包括：普查时间、地点、经度、纬度、海拔、参加人员、行程路线、收集样本种类和数量等情况；经验、体会、存在问题等。6.4.2装订成册，保留原始记录；提炼数据，录入甘薯种质资源数据库。7鉴定评价7.1育苗、定植及田间管理采用田间种植方式鉴定评价种质资源。育苗、定植及田间管理同大田生产。7.2鉴定与评价7.2.1 对每份种质进行基本的生物学性状鉴定评价并记录结果，填写表 B.1。7.2.2 如有特殊性状，进行特殊性状鉴定。7.2.3 鉴定应连续 2 个生长周期。7.2.4 需种植对照品种。8离体保存8.1培养基制备、灭菌与存放8.1.1制备8.1.1.1组织培养中的基础培养基为 MS 培养基，其成分及配方见表 C.1；固体基础培养基为：MS+30g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂或 6 g/L 卡拉胶。8.1.1.2配置培养基时，培养基 pH 应为 5.86.0。pH 过高或过低时可用 HCl 或 NaOH 进行调节。4DB22/T 360420238.1.2灭菌与存放分装好的培养基进行高温高压灭菌，灭菌条件为 121 ，15 min20 min。灭菌后的培养基自然冷却，常温存放。8.2外植体预处理8.2.1薯块选择完好、无病害的薯块在流水下用刷子清洗薯皮表面，去除泥土杂质。干净的薯块在 28 30  培养箱中催芽发苗。8.2.2薯苗将薯苗进行除杂、清洗，除去不需要的部分，剪取 1 cm3 cm 顶芽，用 1% 洗衣粉溶液浸泡 5 min，流水冲洗 30 min。8.3消毒冲洗好的顶芽，在超净工作台中用 75% 乙醇浸泡 30 s，无菌水漂洗 2 次3 次。用添加 1% 吐温80 的 2% NaClO 溶液浸泡 10 min15 min，无菌水漂洗 2 次3 次。8.4茎尖剥离无菌滤纸吸干顶芽表面水分，在 40 倍解剖镜下，用解剖针、手术刀切取带 1 个2 个叶原基的茎尖组织 0.2 mm0.4 mm。8.5诱导培养8.5.1 将剥离的茎尖组织接种到诱导培养基 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂或 6 g/L 卡拉胶，pH 5.86.0 上诱导培养，获得试管苗。8.5.2 培养条件：23 ±2 、光强 2000 lx3000 lx、光照时间 12 h/d16 h/d。8.5.3 注明品种（编号）、茎尖号、接种日期等信息。8.6转接培养诱导培养 20 d30 d 后，将诱导出的茎尖苗转接到 MS 基础培养基上培养，获得试管苗。其他条件同 8.5。8.7株系扩繁将单株茎尖苗剪切为带有 1 叶2 叶的茎段，转接到 MS 培养基上培养。其他条件同 8.5。8.8病毒检测株系苗达到苗高 10 cm 时，按照 NY/T 402 方法进行病毒检测。检测后销毁病毒阳性株系，保留脱毒株系。8.9继代保存经检测确定不带病毒的脱毒苗用 MS 基础培养基继代保存。每份株系保存 3 瓶、每瓶 3 株。其他条件同 8.5。视不同种质的生长速度，每 2 个3 个月继代 1 次。5DB22/T 360420239数据库建立及档案管理9.1数据库建立将普查的数据、图像、报告等录入计算机，建立电子数据库。9.2档案管理原始记录存档，由专人管理，记录档案保存至少 3 年，做到可追溯。6样本编号日期年          月        日普查单位普 查 人姓名：                                        联系电话:提 供 人姓名：                                        联系电话:地        点市                       乡（镇）                  村经        度纬        度海        拔名        称种质来源播 种 期收 获 期主要特性高产    优质    抗病    抗虫    耐盐碱    抗旱    广适    耐寒    耐热    £耐涝耐贫瘠    其他品种类型淀粉型    食用型    高花青甙型    高胡萝卜素型    叶菜用型    观赏型    其他地        形平原    £山地    丘陵    盆地土壤类型黑土    黑钙土    £盐碱土    红壤    黄壤    棕壤    褐土    £栗钙土    沼泽土其他采集方式农户搜集    田间采集 贮藏窖采集 市场购买 其他采集部位薯苗 薯块样本数量个或            株或            千克是否采集标本是    否备        注DB22/T 36042023A                    A附录A（资料性）基本信息登记基本信息登记表见表 A.1。表A.1  基本信息登记表7序号性状观测时期和方法选项1*植株：生长习性20 VG直立 £半直立 匍甸2*茎：顶端茸毛20 VG无或疏 中 密3茎：顶芽相对位置20 VG凹 平 凸4*茎：顶芽花青甙显色强度20 VG无或弱 中 强5茎：节间花青甙显色强度20 VG无或弱 中 强6茎：节花青甙显色强度20 VG无或弱 中 强7茎：长度30 MS/VG极短 极短到短 短 短到中等 中等 中等到长长 长到极长 极长8茎：节间长度30 MS/VG极短 极短到短 短 短到中等 中等 中等到长长 长到极长 极长9茎：粗度30 MS极细 极细到细 细 细到中等 中等 中等到粗粗 粗到极粗 极粗10叶片：大小20 VG极小 极小到小 小 小到中等 中等 中等到大大 大到极大 极大11*叶：裂片20 VG无裂片 三裂片 五裂片 七裂片12*叶：形状（无裂片品种）20 VG心形 三角形 肾形 圆形13叶：缺刻深度（有裂片品种）20 VG极浅 极浅到浅 浅 浅到中等 中等 中等到深深 深到极深 极深14叶：颜色20 VG£黄色 £黄绿色 £浅绿色 £中等绿色 £深绿色 £紫色15叶：正面花青甙显色强度20 VG无或弱 中 强16叶：背面叶脉花青甙显色强度20 VG无或极弱 弱 强17叶：背面叶脉基部花青甙显色强度20 VG无或极弱 弱 强18*叶柄：花青甙显色强度30 VG无或极弱 极弱到弱 弱 弱到中等 中等 中等到强强 强到极强 极强19叶柄：长度30 MS极短 极短到短 短 短到中等 中等 中等到长长 长到极长 极长20*薯块：形状40 VG下膨纺锤形 纺锤形 球形 上膨纺锤形 柱形不规则形DB22/T 36042023B                    B附录B（资料性）甘薯性状调查甘薯性状调查表见表 B.1。表B.1  甘薯性状调查表8序号性状观测时期和方法选项21*薯块：表皮颜色40 VG白色 浅黄色 中等黄色 深黄色 橙红色 深橙红色浅红色 中等红色 紫红色 紫色 深紫色 棕色22*薯块：薯肉主要颜色40 VG白色 浅黄色 中等黄色 深黄色 浅橙红色中等橙红色 深橙红色    浅紫色 中等紫色 深紫色23薯块：薯肉次要颜色40 VG白色 黄色 橘红色 紫色24薯块：薯皮厚度40 VG薄 中 厚25薯块：萌芽一致性10 MG不一致 中等 一致26薯块：萌芽数量10 VG少 中 多27叶：叶耳20 VG无 有28叶：边缘紫色20 VG无 有29薯蒂：长度40 VG短 中 长30植株：结薯习性40 VG松散 较集中 集中31薯块：表面缺陷40 VG无 星点状 纵浅沟 纵深沟 横浅沟 横深沟32薯块：裂皮40 MG无或极少 少 中 多注1：* 为必填项注2：MS（个体测量）：每个小区植株取样数量不少于 20 个，在观测植株的器官或部位时，每个植株取样数量为 1个。 注3：VG（群体目测）、MG（群体测量）：需观测整个小区或规定大小的混合样本。注4：代码：10 出苗期，50% 出苗；20 蔓薯并长期，移栽后 60 d 左右；30 薯块盛长期，移栽 90 d 左右；40 收获期。DB22/T 36042023表B.1甘薯性状调查表（续）9成分分子量使用浓度mg/L大量元素硝酸钾 KNO3101.211900硝酸铵 NH4NO380.041650磷酸二氢钾 KH2PO4136.09170硫酸镁 MgSO4·7H2O246.47370氯化钙 CaCl2·2H2O147.02440微量元素碘化钾 KI166.010.83硼酸 H3BO361.836.2硫酸锰 MnSO4·4H2O223.0122.3硫酸锌 ZnSO4·7H2O287.548.6钼酸钠 Na2MoO4·2H2O241.950.25硫酸铜 CuSO4·5H2O249.680.025氯化钴 CoCl2·6H2O237.930.025铁盐乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA372.2537.25硫酸亚铁 FeSO4·7H2O278.0327.85有机成分肌醇 Inositol100甘氨酸 Glycine2盐酸硫胺素 VB10.1盐酸吡哆醇 VB60.5烟酸 VB5 或 VPP0.5蔗糖 sucrose342.3130 g/L凝固剂：琼脂 agar 8 g/L 或卡拉胶 carrageenan 6 g/L酸碱度：pH 5.86.0（用 NaOH 或 HCl 调节）表C.1  MS  培养基成分表10DB22/T 36042023C                    C附录C（资料性）MS 培养基成分MS 培养基成分见表 C.1。DB22/T 36042023参考文  献1 NY/T 37572020 农作物种质资源调查收集技术规范.11