LS_T 6148-2023 粮油检测 粮食中铅的测定 时间分辨荧光免疫层析快速定量法.docx

0ICS67.60CCS B 20中华人民共和国粮食行业标准LS/T 61482023粮油检测粮食中铅的测定时间分辨荧光免疫层析快速定量法iltes-tInspectonofgrainandoisDeerminatonofladincerealTimeresolvedfuorescentimmunochromatographicmehod- - -2023 1114发 布20240514实 施国家粮食和物资储备局发 布LS/T 61482023前言本文件按照 GB/T1.2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由国家粮食和物资储备局提出。S本文件由全国粮油标准化技术委员会(AC/TC270)归口。本文件起草单位:江南大学、深圳市易瑞生物技术股份有限公司、深圳市绿诗源生物技术有限公司、东莞市森迈德生物科技有限公司、南京微测生物科技有限公司、江苏省粮油质量监测中心。本文件主要起草人:胥 传 来、匡 华、郭 玲 玲、刘 丽 强、雷 咸 禄、徐 丽 广、付 辉、马 涛、周 巧 妮、蒋 永 青、黄斌、张金超、刘海森、杨志华、肖理文、赵皖、张祎、贾继荣。LS/T 61482023粮油检测粮食中铅的测定时间分辨荧光免疫层析快速定量法1 范围本文件规定了时间分辨荧光免疫层析快速定量法测定粮食中铅含量的试剂及材料、仪器及设备、样品制备、样品测定、结果表述和重复性。本文件适用于稻谷、糙米、大米、小麦、玉米等粮食中铅的快速定量检测。本文件的方法检出限为0.5 mg/kg,定量限为0.9 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必 不 可 少 的 条 款。其 中,注 日 期 的 引 用 文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包 括 所 有 的 修 改 单)适 用 于本文件。GB/T5491 粮食、油料检验扦样、分样法GB/T5494 粮油检验粮食、油料的杂质、不完善粒检验GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理试样提取液中的铅与含铕-时间分辨荧光微球标记的特异性抗体发生结合后,抑制了层析过程中抗体与检测线上铅-载体蛋白偶联物的免疫反应,使 检 测 线 上 荧 光 强 度 降 低,通 过 荧 光 分 析 仪 内 置 曲 线 自动计算出试样中铅的含量。5 试剂及材料除另有说明外,所用试剂均为分析纯,实验室用水应符合 GB/T6682中三级水的要求。15.试剂115.硝酸(HNO3)。122135.磷酸氢二钠(Na HPO4)。5.氢氧化钠(NaOH)。2C1471516C5.乙二胺四乙酸二钠(C10H14N2Na O8, AS号:139-33-3),纯度大于98%。5. 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES,CAS号:365-45-9),纯度大于98%。5. 曲拉通 X-100( 34H62O11)。1LS/T 6148202325.溶液配制215.样品提取溶液( 1.量 取24mL 硝酸 5.1),缓慢加入424mL 水中,混匀,室温密封条件下,有效期6个月。由检测卡配套提供,或根据产品说明书配制。225.中和液6( 1.  8.( 1.称取72.g 磷酸氢二钠 5.2)、 0g 氢氧化钠 5.3),用水溶解 定 容 至 500 mL,室 温 条 件 下,有效期6个月。由检测卡配套提供,或根据产品说明书配制。235.样品稀释液4( 1.   9.(5  2( 1.称取3.0g 乙二胺四乙酸二钠 5.4)、 50g4-羟 乙 基 哌 嗪 乙 磺 酸 5.1.)、0.g 曲 拉 通 X-1005.6),用水定容 至 500 mL,室 温 条 件 下,有 效 期 6 个 月。 由 检 测 卡 配 套 提 供,或 根 据 产 品 说 明 书配制。245.铅时间分辨荧光免疫层析卡(以下简称“检测卡”)性能应满足附录 A 的 要 求,不 同 品 牌 不 同 批 次 的 检 测 卡 使 用 前 应 按 照 附 录 A 进 行 检 测 卡 性 能测定。6 仪器及设备126.天平:感量0.1g。6.实验砻谷机。3446.粉碎机:电机转速1000r/min。6.检验筛:0目。: 55566.离心管 1. mL、0 mL。6.涡旋振荡器。7386.离心机:转速5000r/min。6.孵育器:7 ±3 。9216.时间分辨荧光分析仪:激发波长为365nm±5nm,发射波长为615nm±5nm。6.0 移液枪:00L、1000L。7 样品制备17.样品制备117.按照 GB/T5491进行扦样、分样,在采样过程中,应防止 样 品 污 染。其 中,稻 谷 样 品 用 实 验 砻 谷( 2)(6.12机 6. 脱壳后,按照 GB/T5494的方法去除杂质和谷外糙米,得到净稻谷测试样本。7.随机取样500g,粉碎后使其全部过检验筛4),充分混匀后,放入聚乙烯瓶或袋中。27.样品储存将试样按照测试和备用分别存放。于-18 及以下条件保存。2LS/T 614820238 分析步骤18.试样处理0(0( 2.( 2.5准确称取5.g(精 确 至 0.1g)样 品 于 50 mL 离 心 管 6.5)中,加 入 25. mL 的 样 品 提 取 溶 液5.1),用涡旋振荡器 6.6)振 荡 5 min,离 心 机 6.7)5000r/min 离 心 3 min。 用 移 液 枪 6.10)取200L上清液,加入与已加入300L 中和液 5.2)的1. mL 离心管中,涡旋混合后,静置3min,再加( 2.入200L 的样品稀释液 5.3)涡旋混匀,此溶液为待测溶液。注:不同厂家检测卡所用的样品制备方法可能不同,按照产品使用说明中规定方法进行操作。2218.样品测定8.孵育( 3)(6.  3拆开产品包装,将检测卡 5. 放入孵育器8),7 下孵育5 min。228.检测(8.( 8)(1时间分辨荧光分析仪读取相应磁卡曲线后进入测试界面,准确移取100L 待测溶液1),加入检测卡加样孔中,孵育器 6. 37 下孵育6 min 后,立 即 将 检 测 卡 5.3)放 入 时 间 分 辨 荧 光 分 析 仪 6.9)中进行检测( min内读取数据有效)。注:不同厂家时间分辨荧光分析仪所用仪器界面设置可能不同,按照仪器使用说明中规定方法进行。9 结果分析1Tsi9239.将不同浓度梯度的铅自然污染有证标准物质或采用国家标准方法定值的铅自然污染样品,按照上述步骤,进行测定。以铅含量值的对数值为横坐标、检测线 T 信号值与 质 控 线C 信 号 值 的 比 值( /C)为纵坐标,采用四参数logitc拟合算法建立标准曲线,拟合程度 R2 值应在0.9以上。9.试样中铅含量由时间分辨荧光分析仪自动计算并显示,单位为毫克每千克(mg/kg)。9.检测结果在临界值时,进行复验确认,复验方法应按照相关国家标准规定。10 重复性在重复条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不应超过算术平均值的20%。3LS/T 61482023附录 A(规范性)铅时间分辨荧光免疫层析卡性能评价要求1A.概述本文件规定了时间分辨荧光免疫层析卡的技术性能要求,用于对 时 间 分 辨 荧 光 免 疫 层 析 法 检 测 类产品的技术性能进行验证,以确认其适用于本方法。2A.准确度3采用高、中、低3个 浓 度 水 平 的 自 然 污 染 有 证 标 准 物 质 或 采 用 国 家 标 准 方 法 定 值 的 自 然 污 染 样品,每个浓度水平测试不少于 6 次,取平均值。计算检测卡检测结果与实际样品定值的偏差, 个浓 度水平的偏差均应控制在-20%+20%之间。3A.重复性2采用0. mg/kg左右污染水平的自然 污 染 有 证 标 准 物 质 或 采 用 国 家 标 准 方 法 定 值 的 自 然 污 染 样品 ,测定不少于6次,计算检测卡批内变异系数,变异系数应小于或等于15%。4A.检出限计算20份阴性样品测定均值加3倍标准差,其结果应小于或等于产品灵敏度标示值。5A.批间稳定性2采用0. mg/kg左右污染水平的自然 污 染 有 证 标 准 物 质 或 采 用 国 家 标 准 方 法 定 值 的 自 然 污 染 样品,不应少于6个批次,每个批次测定不少于2次,批内测定取平均 值,计 算 检 测 卡 批 间 变 异 系 数,变 异系数应小于或等于15%。6A.质控按照产品说明 要 求,检 测 检 测 卡 自 带 的 阴 性 质 控 和 阳 性 质 控 样 品,阴 性 质 控 的 检 测 结 果 小 于0.5 mg/kg,阳性质控样品的检测结果应为标示值的±20%。4LS/T 61482023参考文献1 GB/T27404 实验室质量控制规范食品理化检测5