酶联免疫吸附试验检测牛病毒性腹泻病毒.docx

酶标法检测牛腹泻病毒抗原SOP编号：S0P-ZL052-00页 码：13版本号：01修订号：00机密等级：秘密起草人起草日期颁发部门质量管理部审核人审核日期批准人批准日期生效日期分发清单研发部质量管理部 综合管理部生产管理部 市场销售部财务部1. 目的建立血清中牛腹泻病毒抗原酶联免疫吸附试验检验程序。2. 适用范围初制、精制血清中BVDV抗原的检验操作。3. 职责3.1. 质量管理部：负责本规程的起草。3.2. QC：负责本程序的操作。3.3. 总经理：负责本规程的审批。4. 定义无5. 引用标准无6. 材料及设备6.1. 试剂盒（北京爱德士元亨生物科技有限公司出品）6-2实验器材6. 2. 196孔酶标仪62. 2洗板机7. 2. 3微量板振荡器6.2.4可调移液器（200 uL）8. 流程图无9. 内容8. 1试验之前所有试剂盒组分都必须恢复至1826 o8.2操作过程8.2. 1取出抗体包被的微量反应板，并在记录纸上标记每个样品的位置。8. 2. 2.在每个反应孔中加入503检测抗体，可以用多道移液器。8.2.3.在阴性对照的双孔各加入50川的阴性对照。8.2.4.在阳性对照的双孔中各加入50pl的阳性对照。8. 2. 5.在剩下的反应孔中分别加入50川被检样品，不同的检测样品要更换吸 头。8. 2. 6.轻弹微量反应板或用振荡器振荡，将反应板中的溶液混匀。在37 （±3）的条件下孵育2小时（±5分钟），也可在28的条 件下孵育过夜（1218小时）。8. 2. 8.吸出反应孔中的液体，每孔中加入3003洗涤液，进行洗涤，共洗5次，每 次洗涤后将液体吸干。最后一次洗涤完毕，将反应板在吸水性材料上用力 拍干。8.2.9.每个反应孔中加入1003酶标抗体。8.2. 10在1826孵育30分钟（±2分钟）8.2. 11重复8. 2. 8.步骤8.2. 12在每个反应孔中加入100川TMB底物溶液。8.2. 13在1826条件下于黑暗处孵育10分钟（±1分钟）。在加完第一个孔开 始计时。8.2. 14在每个反应孔中加入1003终止液，终止反应。加终止液时要按照加入底 物溶液的顺序进行滴加。8. 2. 15将酶标仪在空气中调零。8.2. 16于450nm单波长或450nm和650nm双波长测定样本以及对照的吸光值。8.2. 17计算结果结果判定：阳性对照平均值与阴性对照平均值之差必须大于或等于0. 15光密度（0D）,阴性对照的平均值必须小于或等于0.25光密度（0D）,实验结果 才成立。实验不成立，要按照说明重复实验。判定标准被检样品的平均值减去阴性对照等于或小于0. 3,判为BVDV抗原阴性。被检样品的平均值减去阴性对照大于0. 3,判为BVDV抗原阳性。9. 注意事项aL在孵育过程中将微量反应板封闭或在湿盒中孵育，以防反应孔中的液体蒸发。生2-在洗涤时以及在加入下一步试剂前要防止反应板出现干燥现象10. 附录及派生记录10-L酶标法检测BVDV抗原记录F-S0P-ZL052-0011. 相关文件11.1. 质量检验超出标准调查分析程序12. 修订记录修订号修改内容生效日期