临床医学临床常用免疫学检查制 PPT课件.ppt

12024/4/142024/4/141 1临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查Immunological tests吴映娥吴映娥汕大医学院第一附属医检验科汕大医学院第一附属医检验科22024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查2 2临床常用免疫学检查p免疫功能免疫功能检查(immunologicalfunction)血清免疫球蛋白血清免疫球蛋白检测血清血清补体体检测细胞免疫胞免疫检测(immunoglobulin,complements,cellimmune),细胞因子。细胞因子。q肿瘤瘤标志物志物检测(tumormarkers)蛋白蛋白质类肿瘤瘤标志物志物糖脂糖脂类肿瘤瘤标志物志物酶类肿瘤瘤标志物志物(proteins,glycolipid,enzymesmarkers)p自身免疫自身免疫检测(auto-antibodies)类风湿因子湿因子测定定抗核抗体抗核抗体检测组织和和细胞抗体胞抗体检测(RFANAotherantibodies)p感染免疫感染免疫检测(infectiousimmunology)细菌感染免疫菌感染免疫检测病毒感染免疫病毒感染免疫检测其它其它(寄生虫感染、性病等）寄生虫感染、性病等）(bacterial,virusandsoon)p其它其它循循环免疫复合物免疫复合物检测、冷球蛋白、冷球蛋白检测、丙种反、丙种反应性蛋白性蛋白检测32024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查3 3一、一、免疫功能检查(immunological function(immunological function(immunological function(immunological function)l血清免疫球蛋白检测血清免疫球蛋白检测(Immunoglobulintest)l血清补体检测(Complements)l细胞免疫检测(Cell immune)42024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查4 4血清免疫球蛋白检测血清免疫球蛋白检测n概念：概念：具有具有抗体活性抗体活性和和抗体抗体样结构构的球蛋白，由的球蛋白，由浆细胞胞产生，存在于体液，血液，外分泌液和一些生，存在于体液，血液，外分泌液和一些细胞膜上。胞膜上。n分分类:根据其根据其功能功能和和理化性质理化性质不同，将免疫球蛋白不同，将免疫球蛋白分为五类：分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE52024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查5 5u IgG最多、占70%80%u IgA血清型和分泌型两种u IgM是有效的凝聚和溶解细胞的因子，最早；最先。u IgD功能尚不完全清楚u IgE与变态反应有关(0.002%)血清免疫球蛋白检测6检测方法酶联免疫法（酶联免疫法（ELISA)放射免疫（放射免疫（RIA)荧光标记免疫荧光标记免疫(IFA)化学发光法（化学发光法（CLIA)免疫透射比浊、免疫散射比浊免疫透射比浊、免疫散射比浊7血清免疫球蛋白G（IgG）检测IgG人体内含量最多，占Ig的70-80再次免疫应答的主要抗体对细菌、病毒和寄生虫都有抗体活性唯一可通过胎盘的Ig8检测方法：免疫比浊法免疫比浊法参考值：7.016.6 g/L血清免疫球蛋白血清免疫球蛋白G（IgG）检测）检测9临临 床床 意意 义义IgG 增高（病理性）IgG增高是再次免疫应答的标志。见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺结核、链球菌感染以及自身免疫性疾病，如SLE，类风湿关节炎等。单克隆性增高 仅见一种Ig增高，主要见于免疫增殖性疾病，如IgG分泌型多发性骨髓瘤10IgG 增高（生理性）胎儿出生前可从母体获得IgG，孕期22-28周与母体血浓度相等，出生后逐渐减少，3、4月胎儿血IgG降至最低，随后胎儿自身逐渐开始合成IgG，血清IgG逐渐增多，到16岁前达到成人水平。IgG 减低见于各种先天性和获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、肾病综合症、和免疫抑制剂患者以及重症传染病等。临临 床床 意意 义义11免疫球蛋白免疫球蛋白A(IgA)检测检测两型：血清型IgA，分泌型IgA（SIgA）。血清型IgA以单体形式存在,占10%-15%.分泌型IgA（S IgA）由J链连接的二聚体和分泌片组成。12血清IgA 0.73.5 g/L。SIgA 唾液0.3 g/L，泪液3080 g/L，初乳5.06 g/L，粪便1.3 g/L参考值：检测方法：免疫比浊法免疫比浊法免疫球蛋白免疫球蛋白A(IgA)检测检测13临临 床床 意意 义义IgA增高：见于IgA型MM，SLE,类风湿性关节炎，肝硬化，湿疹及皮肌炎等。在中毒性肝损伤时，IgA浓度与炎症程度相关。IgA降低：见于反复呼吸道感染，非IgA型MM，原发和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病等。生理性变化：儿童的IgA水平比成人低，到16岁前达到成人水平。14免疫球蛋白免疫球蛋白M(IgM)检测检测IgM是五聚体，分子量最大的Ig不能通过血管壁，不能通过胎盘个体发育过程中最早合成的抗体，脐带血IgM增高提示胎儿宫内感染体液免疫应答中IgM是最早产生的抗体1516检测方法：免疫比浊法免疫比浊法参考值：0.5 2.6 g/L 占占5%-10%免疫球蛋白免疫球蛋白M(IgM)检测检测17临临 床床 意意 义义IgM增高 见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等，由于IgM是初次免疫应答中的Ig,因此单纯IgM增加常提示为病原体引起的原发性感染。原发性巨球蛋白血症时，IgM呈单克隆性明显增高IgM降低 见于IgG型重链病，IgA型MM，先天性免疫缺陷病，使用免疫抑制剂，淋巴系统肿瘤和肾病综合症等。18免疫球蛋白E(IgE)检测IgE是血清中最少的一种Ig，占血清总Ig的0.002%。是一种亲细胞抗体，介导型变态反应，与变态反应、寄生虫感染和皮肤过敏等有关。19检测方法：ELISA 法法参考值：0.1 0.9 mg/L免疫球蛋白E(IgE)检测20临临 床床 意意 义义IgE增高 见于IgE型MM、肝脏病、结节病、类风湿性关节炎，以及各种过敏性疾病和寄生虫感染等。IgE降低 见于先天性和获得性丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期应用免疫抑制剂和共济失调性毛细血管扩展症等。212024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查2121M蛋白（Monoclonalprotein）概念：概念：单克隆单克隆B淋巴细胞异常增殖产生淋巴细胞异常增殖产生免疫球蛋白，具有相同结构和电泳迁徙免疫球蛋白，具有相同结构和电泳迁徙速度，但不具有抗体活性速度，但不具有抗体活性。22【参考值】蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性。图图1 14 4号为多发性骨髓瘤病人的血清蛋白电泳图谱号为多发性骨髓瘤病人的血清蛋白电泳图谱13 13 1 12 23 34 45 56 67 78 89 91010 11111212M蛋白（Monoclonalprotein）23临床意义临床意义检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：多发性骨髓瘤：以IgG型最常见，其次为IgA型，IgD和IgE罕见，也有IgM型的报道。巨球蛋白血症(macroglobulinemia)：该病血液中存在大量单克隆IgM。重链病：出现Ig重链轻链病：出现单克隆游离轻链。半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段。恶性淋巴瘤：血液中可出现M蛋白。良性M蛋白血症：242024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查2424血清补体（血清补体（complement,C）p组成：补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统途径的9种成分c1（c1q、c1r、c1s）c9,旁路途径的3种成分及其衍生物B、D、P、H、I等因子组成。p作用：参与灭活病原体的免疫反应，也可破坏自身组织或自身细胞造成免疫损伤25补体的三条激活途径补体的三条激活途径26总补体溶血活性检测总补体溶血活性检测(CH50)原理:抗体致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)可激活血清中的补体C1,从而引起补体经典途径的连锁反应,导致绵羊红细胞膜上形成多分子的聚合物，绵羊红细胞溶解。在分光光度计上542nm读取吸光度。溶解程度与样品中补体量正相关。主要反应补体经典途径的综合水平。282024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查2828正常正常值：试试管法管法50100kU/L临床意床意义：减低减低1.先天性先天性2.合成减少合成减少肝炎,营养不良3.消耗或者消耗或者丢失失过多多,自身免疫性疾病，如自身免疫性疾病，如SLE、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎。增高增高急性炎症、急性炎症、组织损伤、某些、某些肿瘤等。瘤等。总补体溶血活性检测总补体溶血活性检测(CH50)292024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查2929p补体体C3检测 C3在补体系统各成分中含量最多，是传统途径和旁路途径被激活的关键物质。正常值：0.81.g/L p补体体C4检测 C4代表补体传统活化途径，在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和病毒等方面发挥作用。正常值：0.200.60g/L其他补体检测其他补体检测302024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查3030p参参见CH50减低和增高的减低和增高的临床意床意义pC3增高在急性炎性反增高在急性炎性反应更敏感更敏感pC4对判断免疫复合物形成判断免疫复合物形成时补体消耗性减体消耗性减低更有意低更有意义临床意义临床意义312024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查3131细胞免疫胞免疫检测(Cell immune)(Cell immune)T细胞免疫检测B细胞免疫检测自然杀伤细胞检测(NK cell)细胞因子检测(cytokine)（自学了解）32T细胞分化抗原细胞分化抗原T细胞表面特异的表面抗原，WHO统称其为白细胞分化抗原（cluster differentiation，CD)CD3+代表总T细胞、CD3+/CD4+T辅助细胞、CD3+/CD8+T抑制细胞。应用这些细胞的单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后，再与荧光标记二抗(兔或羊抗鼠IgG)反应，在流式细胞仪中计数CD阳性细胞的百分率。33参考值参考值流式细胞术：CD3+61-85 CD3+CD4+(Th)28-58 CD3+CD8+(Ts)19-48 Th/Ts 0.9-2.0342024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查3434CDCD4 4降低降低病毒感染（病毒感染（CMV,HIV,HBV)CDCD4 4/CD/CD8 8增高增高自身免疫性疾病、变态反应、排异反应自身免疫性疾病、变态反应、排异反应 CDCD4 4/CD/CD8 8减低减低见于艾滋病于艾滋病(HIV(HIV,常常0.5)0.5)、恶性性肿瘤瘤（进行期或复发期）进行期或复发期）、传单传单及乙肝急性期。及乙肝急性期。CDCD3 3 CD CD4 4 CD CD8 8均增高均增高T T细胞型淋巴胞型淋巴细胞胞恶性疾病性疾病 (T lymphocytes malignant disease)(T lymphocytes malignant disease)临床意义临床意义35应用用CDCD1919、CDCD2020、CDCD21 21、CDCD2222 和和CDCD4040等等单克隆抗体克隆抗体标记单个核个核细胞胞B B细胞，通胞，通过免疫免疫荧光或流式光或流式细胞胞术进行行检测。CDCD1919 为全部全部B B细胞共有的表面胞共有的表面标志，志，B B细胞活化后不消细胞活化后不消失失，是最重要的，是最重要的B B细胞胞标记分子。分子。CDCD22 22 为成熟成熟B B细胞的表面胞的表面标志。志。细胞分化抗原细胞分化抗原36检测方法：检测方法：流式细胞术流式细胞术参考参考值：CDCD19 19 11.743.73%3.73%细胞分化抗原细胞分化抗原37升高升高B B细胞型急性淋巴胞型急性淋巴细胞性白血病、慢胞性白血病、慢性淋巴性淋巴细胞白血病、胞白血病、BurkittBurkitt淋巴瘤等淋巴瘤等 减低减低无丙种球蛋白血症、无丙种球蛋白血症、长期免疫抑制期免疫抑制剂应用后用后临床意义临床意义38自然杀伤细胞(NK cell)检测NK 细胞是一种多功能细胞群，介导天然免疫，不依赖抗体和补体，能直接杀死靶细胞，在抗肿瘤免疫监视作用中起第一道防线。其分化抗原主要是表达CD3-/CD(16+56)+.其作用：1.介导天然免疫应答，它不依赖抗体和补体即能杀伤靶细胞，抗感染和免疫调节作用；是在抗肿瘤的免疫监视作用中处于第一道防线。2.自然杀伤细胞（NK）活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一39检测方法：检测方法：流式细胞术流式细胞术参考参考值：CDCD-/CD(16+56)/CD(16+56)+：13.8%5.95.9%自然杀伤细胞(NK cell)检测40临床意床意义自然杀伤细胞（NK）活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一活性降低活性降低：见于血液系统肿瘤、实体肿瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些病毒感染患者；活性升高活性升高：宿主抗移植物反应者。41细胞因子（Cytokine,CK）是由免疫原、丝裂原或其他因子刺激细胞所产生的低分子量可溶性蛋白质，为生物信息分子，具有调节固有免疫应答和适应性免疫应答，促进造血以及刺激细胞活化、增殖分化等功能。必须与相应受体结合发挥作用。细胞因子的细胞因子的产生细胞产生细胞抗原等抗原等刺激刺激产生生物产生生物学效应学效应靶细胞靶细胞细胞因子细胞因子42多为小分子（830kD）多肽。在较低浓度下即具有生物学活性。（高效性）通过结合细胞表面高亲和力受体发挥生物学效应。半衰期很短。以自分泌、旁分泌或内分泌形式发挥作用具有多效性、重叠性、协同性和拮抗性细胞因子的共同特点细胞因子的共同特点43细胞因子可以旁分泌、自分泌或内分泌的方式发挥作用,以自分泌和旁分泌为主。细胞因子的作用方式细胞因子的作用方式内分泌内分泌endocrine血液循环血液循环远距离作用远距离作用(IL-1、TNF)自分泌自分泌autocrine作用于分泌细作用于分泌细胞自身胞自身(IL-2)T作用于比邻细胞作用于比邻细胞(IL-12)旁分泌旁分泌paracrineDCT44（1 1）多效性）多效性:一种CK可作用多种靶细胞,产生多种生物学效应（2 2）重叠性）重叠性:2种或2种以上的CKs可介导相似的功能（3 3）拮抗性）拮抗性:一种CK可抑制另一种CK的功能（4 4）协同性）协同性:一种CK可强化 另一种CK的功能IL-6IL-4IL-13B增殖增殖造血干细胞造血干细胞造血干细胞造血干细胞肥大肥大细胞细胞IL-4BIL-3IL-11IL-4(-)(+)IFN-ThTh1Th2IL-4(+)(-)IFN-细胞因子的发挥生物效应特点细胞因子的发挥生物效应特点45细胞因子的分类细胞因子的分类白细胞介素 interleukin，IL干扰素interferon，IFN肿瘤坏死因子Tumor necrosis factor，TNF集落刺激因子 colony stimulating factor，CSF趋化性细胞因子 chemokine生长因子growth factor,GF 根据结构和功能，细胞因子分为六大类根据结构和功能，细胞因子分为六大类46几种主要的白细胞介素几种主要的白细胞介素IL-1:发热,激活T细胞、巨噬细胞。IL-6:发热,促进T、B细胞增殖分化。IL-2:主要由活化Th细胞产生，促进T细胞分化发育。IL-8:主要由单核-巨噬细胞生成，激活中性粒细胞。IL-4:主要由活化的T细胞和肥大细胞产生，促进B细胞生长；抑制Th1细胞生长，促进体液免疫应答，促进IgE的合成。IL-10:由活化的T细胞和巨噬细胞产生，抑制巨噬细胞的活性。IL-12:由B细胞、单核-巨噬细胞生成，激活NK细胞，促进Th1细胞的生长。IL-15:由单核-巨噬细胞生成，激活T细胞和NK细胞。47干扰素干扰素(interferon IFN)(interferon IFN)最早发现的CK,具有干扰病毒感染和复制的能力。根据其来源和结构，可将其分为两型：型：型：IFN-、-主要由白细胞、成纤维细主要由白细胞、成纤维细胞、病毒感染的组织细胞等产生胞、病毒感染的组织细胞等产生型：型：IFN-主要由主要由T、NK细胞产生细胞产生48主要功能主要功能IFN IFN IFN CD118CD118CD119淋巴细胞，单核巨噬细胞淋巴细胞，单核巨噬细胞成纤维细胞成纤维细胞活化活化T细胞，细胞，NK细胞细胞抗病毒作用强抗病毒作用强，促进，促进MHCI和和II类子表达类子表达抗病毒作用强抗病毒作用强，抗细胞，抗细胞增殖，同上增殖，同上免疫调节能力强，免疫调节能力强，如激如激活巨噬细胞，抑制活巨噬细胞，抑制Th2细细胞，抗病毒作用弱胞，抗病毒作用弱名称名称受体受体主要产生细胞主要产生细胞主要功能主要功能病毒性疾病病毒性疾病肿瘤肿瘤49可以直接诱导肿瘤细胞凋亡的细胞因子。分类：TNF ：活化的单核巨噬细胞产生：活化的单核巨噬细胞产生 亦称恶液亦称恶液质素质素TNF：活化的：活化的T细胞产生，亦称淋巴毒素。细胞产生，亦称淋巴毒素。两种两种TNF的分子量为的分子量为51kD，结构为同源三聚结构为同源三聚体，具有相同的结合受体和生物学活性体，具有相同的结合受体和生物学活性肿瘤坏死因子超家族肿瘤坏死因子超家族 （tumor necrosis factor,TNF）50集落刺激因子集落刺激因子 -（colony stimulating factor，CSF）指能刺激多能造血干细胞和不同发育分化阶段的造血干细胞进行增殖分化，并在半固体培养基中形成相应集落的细胞因子。按其作用范围分为：粒细胞CSF（G-CSF），巨噬细胞CSF（M-CSF），粒细胞和巨噬细胞CSF（GM-CSF）和多集落刺激因子（multi-CSF，IL-3）等。广义上，凡是刺激造血细胞的细胞因子都可以统称为CSF，如EPO，SCF、TPO、IL-11。治疗肾性贫血治疗肾性贫血51趋化性细胞因子（趋化性细胞因子（chemokine）概念：能使细胞发生趋化运动的小分子细胞因子。趋化运动是指细胞向高浓度刺激物方向的定向运动。功能：招募血液中的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入感染发生的部位。特点：结构上有较大的同源性 氨基端多含有1个或2个半胱氨酸52生长因子生长因子（growth factor,GF）对细胞生长起调节作用的细胞因子。包括TGF-、EGF、VEGF、FGF、NGF等。TGF-可抑制多种免疫细胞的增殖、分化及效应,但对肿瘤细胞的生长无抑制作用。53细胞因子检测的特点免疫原性较弱样品含量低样品具有时效性生物效应特异性差54细胞因子检测的方法免疫学检测方法抗原性检测细胞生物学检测方法生物活性检测分子生物学检测方法基因表达检测55二、肿瘤标志物检测 肿瘤标志物（肿瘤标志物（tumor marker、TM）：）：在肿瘤发生和发展过程中，在肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞由肿瘤细胞所产生或机体在肿瘤细胞刺激下产生的所产生或机体在肿瘤细胞刺激下产生的，与，与肿瘤存在相关的物质，存在于血液、细胞、肿瘤存在相关的物质，存在于血液、细胞、组织液、体液中组织液、体液中。56肿瘤的发展与诊断肿瘤的发展与诊断10-100 g榛子大小针头大小免疫学方法生物物理学方法早期亚临床阶段晚期1 mg1 g1kg1 g高灵敏度的肿瘤标志物的测定对肿瘤的早期诊断和治疗方案设计是十分重要的手段 世界卫生组织（WHO）指出：若能早期诊断并若能早期诊断并及时治疗，及时治疗，90%90%95%95%的的肿瘤是可以治愈的肿瘤是可以治愈的。临床可检测的肿瘤临床可检测的肿瘤肿瘤标记物肿瘤标记物(无形的肿瘤无形的肿瘤)58肿瘤标志物分类肿瘤标志物分类蛋白质类，蛋白质类，如如AFPAFP、CEACEA和和PSAPSA等等。糖脂类，糖脂类，如如CA125、CA19-9、CA153和和CA-50等等*酶类，酶类，如前列腺酸性磷酸酶如前列腺酸性磷酸酶(PAP)(PAP)、神经元特异性烯、神经元特异性烯醇化酶醇化酶(NSE)(NSE)和和-L-L-岩藻糖苷酶岩藻糖苷酶(AFU)(AFU)等等。*激素，激素，如如HCGHCG、雌激素受体等、雌激素受体等其它其它 肿瘤标志物，肿瘤标志物，如核酸、多胺等如核酸、多胺等。59甲胎蛋白（-fetoprotein，AFP）在在胎胎儿儿发发育育早早期期,由由肝肝脏脏和和卵卵黄黄囊囊合合成成，出出生后一年内降至正常水平。生后一年内降至正常水平。细胞恶变后又重新具有分泌细胞恶变后又重新具有分泌AFP的能力。的能力。对对诊诊断断肝肝细细胞胞癌癌及及滋滋养养细细胞胞恶恶性性肿肿瘤瘤有有重重要的临床价值。要的临床价值。60参考值血清血清 300g/L300g/L。病毒性肝炎与肝硬化患者血清中病毒性肝炎与肝硬化患者血清中AFPAFP可增高，但可增高，但常常 300g/L300g/L。生殖器胚胎性肿瘤、胃癌、胰腺癌患者血清中生殖器胚胎性肿瘤、胃癌、胰腺癌患者血清中AFPAFP可升高。可升高。妊妊娠娠时时AFPAFP可可升升高高，峰峰值值低低于于400g/L400g/L，若若异异常常升高应考虑胎儿神经管缺损畸形。升高应考虑胎儿神经管缺损畸形。62癌胚抗原（carcinoembryonic antigen、CEA）早早期期胎胎儿儿的的胃胃肠肠道道及及某某些些组组织织均均有有合合成成CEA的的能能力力胎儿出生后血清胎儿出生后血清 CEA的含量极低的含量极低是是一一种种广广谱谱性性肿肿瘤瘤标标志志物物，多多种种肿肿瘤瘤表表达达，脏脏器器特特异异性性低低，主主要要用用于于辅辅助助肿肿瘤瘤的的诊诊断断、判判断断预预后后、监测疗效和肿瘤复发等。监测疗效和肿瘤复发等。63参考值血清血清 2.5ug/L,少数人少数人5.0ug/L.65前列腺特异性抗原（前列腺特异性抗原（PSA)前列腺分泌的单链糖蛋白存在于前列腺管道的上皮细胞，前列腺癌时血清水平明显升高总PSA(t-PSA）中，80结合形式，20游离（f-PSA)参考值:t-PSA4.0g/L、f-PSA0.2566临床意义临床意义前列腺癌是60-90患者血清t-PSA明显升高前列腺炎、增生，轻度升高，t-PSA 4.0-10.0g/L t-PSA 4.0-10.0g/L，f-PSA/t-PSA 的比的比值对诊断更有价值值对诊断更有价值，f-PSA/t-PSA0.1时提示前列腺癌672.糖脂类肿瘤标志物检测糖脂类肿瘤标志物检测肿瘤细胞内糖基化过程发生变异，从而导致细胞分泌性或细胞膜上的糖蛋白或糖脂中的糖基序列发生改变，形成了一种和正常糖蛋白不同的特殊抗原，可利用单克隆抗体技术检测这些抗原，结果诞生了糖蛋白类抗原。作为新一代的肿瘤标记物，远较酶和激素类标记物敏感、特异。68CA125糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于上皮性卵巢组织及患者血清中参考值：3.5万/69CA-125在卵巢诊断中的应用在卵巢诊断中的应用8090的卵巢上皮癌中CA-125可明显升高子宫内膜癌、透明细胞癌、输卵管癌及未分化卵巢癌患者中CA-125含量也可明显升高粘液性卵巢癌患者的阳性率则较低CA-125在卵巢包块良恶性的鉴别上特别有价值，敏感度为78、特异性95、阳性预测价值82、阴性预测价值91 。CA-125和CEA联合测定，计算两者比值，可提高卵巢癌检出的敏感性和特异性。74CA15-3 分子量约为40 000的糖蛋白是抗原决定簇、糖和多肽组成的糖蛋白参考值：100 kU/L 时，肯定有转移，敏感性高于CEA、TPA。79肿瘤标志物的合理选用 同一种肿瘤可含多种标志物，而一种标志物可出现在多同一种肿瘤可含多种标志物，而一种标志物可出现在多种肿瘤。选择特异标志物或最佳组合有利于提高肿瘤种肿瘤。选择特异标志物或最佳组合有利于提高肿瘤诊断的阳性率。动态检测有利于良性和恶性肿瘤的鉴诊断的阳性率。动态检测有利于良性和恶性肿瘤的鉴别，也有利于复发、转移和预后判断。别，也有利于复发、转移和预后判断。肝癌：AFP胃癌：CA724+CEA+CA199大肠癌：CA724+CEA乳腺癌：CA153+CEA+CA199卵巢癌：CA125+CA72480三、自身免疫病检测三、自身免疫病检测正常情况下，机体免疫系统对自身抗原物质不产生免正常情况下，机体免疫系统对自身抗原物质不产生免疫应答或只产生极微弱的免疫应答疫应答或只产生极微弱的免疫应答自身免疫性疾病是指机体免疫功能紊乱时自身免疫性疾病是指机体免疫功能紊乱时,针对自身针对自身组织抗原产生自身抗体或组织抗原产生自身抗体或致敏淋巴细胞致敏淋巴细胞,并导致组织并导致组织损伤而引起的疾病损伤而引起的疾病.如如SLE、RA等。等。自身免疫性疾病主要免疫学特征为血清或其它体液中自身免疫性疾病主要免疫学特征为血清或其它体液中出现出现高滴度的自身抗体和致敏淋巴细胞高滴度的自身抗体和致敏淋巴细胞,因此通过对因此通过对自身抗体的检测辅助自身免疫自身抗体的检测辅助自身免疫性疾病的诊断性疾病的诊断.812024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查8181自身免疫检测p抗核抗体抗核抗体检测p组织和和细胞抗体胞抗体检测p类风湿因子湿因子测定定823.1常见自身免疫性疾病的自身抗体检测 自身抗体（自身抗体（autoantibodyautoantibody）是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要特征之一，某些自身免疫身免疫病重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗体病伴有特征性的自身抗体(谱谱)分类分类:脏器特异性自身抗体脏器特异性自身抗体 脏器非特异性自身抗体脏器非特异性自身抗体83自身免疫性疾病的重要标志自身免疫性疾病的重要标志高滴度高滴度存在于自身免疫性疾病患者存在于自身免疫性疾病患者与疾病的与疾病的活动性相关活动性相关参与免疫参与免疫病理性损伤病理性损伤自身抗体的特性自身抗体的特性84抗核抗体（抗核抗体（ANAANA）抗可提取性核抗原抗体（抗可提取性核抗原抗体（ENAENA）抗中性粒细胞胞浆抗体（抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAANCA）类风湿因子（类风湿因子（RFRF）抗角蛋白抗体（抗角蛋白抗体（AKAAKA）抗环瓜氨酸肽抗体（抗抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCPCCP抗体）抗体）抗心磷脂抗体（抗心磷脂抗体（ACLAACLA）实验室常检测的自身抗体实验室常检测的自身抗体85标志抗体标志抗体相关疾病相关疾病dsDNAdsDNASLESLESmSmSLESLESSBSSBSS(SS(干燥综合症干燥综合症)着丝点抗体着丝点抗体PSSPSS（局限型）局限型）（进行性全身性硬化症）（进行性全身性硬化症）Scl-70Scl-70抗体抗体PSSPSS（弥漫型）弥漫型）AKAAKA、抗、抗CCPCCP抗体抗体RARAJo-1Jo-1抗体抗体PM/DMPM/DM（进行性系统性硬皮病）（进行性系统性硬皮病）高滴度高滴度RNPRNP抗体抗体MCTD(MCTD(混合型结缔组病混合型结缔组病)肝肾微粒体抗体（肝肾微粒体抗体（LKM-1LKM-1）型自身免疫性肝炎型自身免疫性肝炎平滑肌抗体（平滑肌抗体（SMASMA）型自身免疫性肝炎型自身免疫性肝炎AMAAMA（M2M2）PBC(PBC(原发性胆汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化)常见自身免疫性疾病的标志抗体常见自身免疫性疾病的标志抗体86间接免疫荧光法间接免疫荧光法（IIFIIF）ELISAELISA免疫印迹法（免疫印迹法（Western-blotWestern-blot）酶免疫斑点法酶免疫斑点法检测自身抗体常用的方法检测自身抗体常用的方法872024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查8787血清抗体荧光素标记的抗免疫球蛋白细胞核细胞浆载片间接免疫荧光检测的原理88间接免疫荧光法示意图HEp-2HEp-2细胞细胞肝组织切片肝组织切片荧光标记抗体荧光标记抗体病人血清（待检抗体）病人血清（待检抗体）89 抗核抗体抗核抗体:以真核细胞（如以真核细胞（如HEp-2HEp-2细胞、细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。检测的自身抗体的总称。抗核抗体的检测与应用抗核抗体的检测与应用90抗核抗体抗核抗体谱谱91 细胞核细胞核 细胞浆细胞浆 细胞骨架细胞骨架 细胞周期细胞周期 均质型均质型 核糖体型核糖体型 肌蛋白型肌蛋白型 中心体型中心体型 斑点型斑点型 线粒体型线粒体型 波形纤维蛋白型波形纤维蛋白型 纺缍体型纺缍体型 核仁型核仁型 高尔基体型高尔基体型 细胞角蛋白型细胞角蛋白型 纺缍丝型纺缍丝型 着丝点型着丝点型 溶酶体型溶酶体型 原肌球蛋白型原肌球蛋白型 中间体型中间体型 周边型周边型 颗粒型颗粒型 纽带蛋白型纽带蛋白型 PCNAPCNA型型 核点型核点型(dots)dots)IIF检测检测ANA荧光染色模型荧光染色模型92斑点型（斑点型（nRNP/Sm）高滴度的抗高滴度的抗U1-nRNPU1-nRNP为为MCTDMCTD的特征。的特征。抗抗SmSm抗体对抗体对SLESLE具有高度特异性具有高度特异性。斑点型（斑点型（SSA/SSB）抗抗SSASSA最常出现于最常出现于SSSS及新生儿红斑狼疮及新生儿红斑狼疮 （100%100%）。抗）。抗SSBSSB抗体几乎仅见于女性，抗体几乎仅见于女性，可出现于可出现于SSSS和和SLESLE。93均质型均质型 抗抗dsDNAdsDNA抗体抗体 抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体(histone)histone)抗抗ssDNAssDNA抗体抗体 抗核小体抗体抗核小体抗体(nucleosome)nucleosome)94周边型周边型 可见于胶原病、可见于胶原病、PBCPBC(原发性胆汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化)、CAHCAH(先天性肾上腺皮质增生症先天性肾上腺皮质增生症)等患者等患者 95核点型核点型（DOTS）见于见于SLESLE、SSSS、PBCPBC、风湿病风湿病 抗着丝点型抗着丝点型 PSSPSS局限型标志抗体局限型标志抗体962024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查9696 免疫荧光法：阴性 血清滴度1：100为阳性 参考值参考值972024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查97971、ANAANA阳性最多阳性最多见于未治于未治疗的的SLESLE，阳性率达，阳性率达80%80%100%100%（活（活动期几乎期几乎100%100%阳性）阳性）2 2、ANAANA阳性是阳性是结缔组织病的病的标志，是志，是SLESLE最佳最佳筛选试验。3 3、其它疾病、其它疾病,如原如原发性胆汁性肝硬化性胆汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis)、慢性肝病、慢性感染、慢性肝病、慢性感染、肿瘤等也可出瘤等也可出现阳性阳性临床意义临床意义98ANA荧光光图形形临床意床意义2024/4/142024/4/14临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查9898高滴度均质型-SLE高滴度核膜型-SLE（活动）高滴度斑点型-MCTD(混合型结缔组病混合型结缔组病)高滴度核仁型-SSC99抗双链DNA抗体 抗抗dsDNAdsDNA抗体与细胞核抗体与细胞核DNADNA（外围区）脱（外围区）脱氧核糖磷酸框架结合。氧核糖磷酸框架结合。抗抗dsDNAdsDNA抗体是抗体是SLESLE患者的特征性标志抗患者的特征性标志抗体。其体。其抗体滴度与疾病的活动程度有相抗体滴度与疾病的活动程度有相关性关性，抗体滴度的动态测定为监控治疗，抗体滴度的动态测定为监控治疗提供了有效的实验室手段。提供了有效的实验室手段。抗双链抗双链DNADNA抗体抗体100间接免疫荧光检测，是目前国内外临床常间接免疫荧光检测，是目前国内外临床常规检测抗规检测抗dsDNAdsDNA抗体最常用的方法。抗体最常用的方法。抗抗dsDNAdsDNA抗体诊断抗体诊断SLESLE的特异性可达的特异性可达95%95%100%100%，但其敏感性仅为，但其敏感性仅为30%30%50%50%，因此抗，因此抗dsDNAdsDNA抗体阴性不能排除抗体阴性不能排除SLESLE的诊断。的诊断。检测方法及应用检测方法及应用101抗抗dsDNA抗体抗体SLESLE特异性抗体，与病情活动度相关。特异性抗体，与病情活动度相关。102抗核小体抗体 核小体（核小体（nucleosomenucleosome）是真核生物细胞是真核生物细胞核染色质的基本单位核染色质的基本单位 。凋亡细胞凋亡细胞是核小体是核小体的重要来源，当的重要来源，当SLESLE患者的吞噬细胞对凋亡患者的吞噬细胞对凋亡细胞的清除能力受损或降低，导致核小体在细胞的清除能力受损或降低，导致核小体在患者体内大量存积，激活患者体内大量存积，激活B B细胞产生细胞产生抗核小抗核小体抗体（体抗体（Antinucleosome antibody Antinucleosome antibody,AnuA,AnuA）。）。103检测及应用AnuAAnuA的检测的检测通常采用通常采用ELISAELISA检测法。检测法。AnuAAnuA具有同抗具有同抗ds-DNAds-DNA抗体相同的诊断特异性，抗体相同的诊断特异性，可达到可达到95%95%，在系统性硬化（，在系统性硬化（SScSSc）病中可有）病中可有20%20%50%50%低浓度阳性率，其他自身免疫性疾低浓度阳性率，其他自身免疫性疾病中该抗体均为阴性。病中该抗体均为阴性。AnuAAnuA的表达与的表达与SLESLE病情活动分数相关。病情活动分数相关。检测及应用检测及应用104可提取核抗原可提取核抗原(Extractable nuclear antigen,ENA)多肽抗体谱多肽抗体谱ENA又称又称盐水可溶性抗原或磷酸盐可浸出抗原盐水可溶性抗原或磷酸盐可浸出抗原，是指在盐水中或磷酸盐可溶解的是指在盐水中或磷酸盐可溶解的核抗原核抗原。ENA多肽抗体谱是针对多肽抗体谱是针对核内核内ENA的一类自身抗体的一类自身抗体，约有约有10余种，主要为抗核糖核蛋白余种，主要为抗核糖核蛋白(RNP)抗体和抗体和抗抗Sm抗体，其它还有抗抗体，其它还有抗SS-A抗体、抗抗体、抗SS-B抗体、抗体、抗抗Scl-70抗体、抗抗体、抗JO-1抗体等。抗体等。不同的自身免疫病可产生不同的抗不同的自身免疫病可产生不同的抗ENA抗体。抗体。通通过检测抗过检测抗ENA抗体的类型及其组合，可综合诊断抗体的类型及其组合，可综合诊断自身免疫病的类型。自身免疫病的类型。105 抗抗ENA抗体谱抗体谱:可提取核抗原抗体的总称可提取核抗原抗体的总称 临床常检测的抗临床常检测的抗ENAENA抗体谱主要包括：抗体谱主要包括：抗抗SmSm 抗抗U1-RNPU1-RNP 抗抗SSASSA 抗抗SSBSSB 抗抗Jo-1Jo-1 抗抗Scl-70Scl-70 抗抗rib-Prib-P蛋白蛋白抗抗ENA抗体谱的检测与应用抗体谱的检测与应用106抗可提取抗可提取性性核抗原（核抗原（ENA）抗体）抗体107 双向免疫扩散（双向免疫扩散（IDID）对流免疫电泳（对流免疫电泳（CIECIE）免疫印迹法（免疫印迹法（Western-blotWestern-blot）ELISAELISA 酶免疫斑点法酶免疫斑点法 ENA检测方法检测方法108免疫印迹法 SDS-PAGESDS-PAGE电泳电泳转移电泳转移电泳酶免疫检测酶免疫检测免疫印迹法免疫印迹法109110 抗可提取抗可提取性性核抗原（核抗原（ENAENA）抗体）抗体 抗抗SmSm抗体：抗体：SLESLE标记性抗体（标记性抗体（20%20%30%30%）抗抗nRNPnRNP抗体抗体：MCTD 95%MCTD 95%100