非发酵革兰阴性菌 PPT课件.ppt
Department of Microbiology,Hebei North University教学目的教学目的 掌握非发酵菌的鉴定要点及铜绿假单掌握非发酵菌的鉴定要点及铜绿假单胞菌的鉴定特征，熟悉不动杆菌属、产胞菌的鉴定特征，熟悉不动杆菌属、产碱杆菌属的主要鉴定特征。碱杆菌属的主要鉴定特征。第二十四章第二十四章 非发酵革兰阴性杆菌非发酵革兰阴性杆菌nonfermentativeGram-negativebacilli Department of Microbiology,Hebei North University非发酵菌非发酵菌Nonfermenters概念：概念：一大一大群群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌。性杆菌。Department of Microbiology,Hebei North University主要菌属主要菌属：假单胞菌属假单胞菌属(Pseudomonas)产碱杆菌属产碱杆菌属(Alcaligenes)不动杆菌属不动杆菌属(Acinetobacter)莫拉菌属莫拉菌属(Moraxella)黄杆菌属黄杆菌属(Flavobacterium)丛毛单胞菌属丛毛单胞菌属(Comamonas)无色杆菌属（无色杆菌属（Achromobacter）艾肯菌属艾肯菌属(Elikenella)土壤杆菌属土壤杆菌属(Agrobacterium)Department of Microbiology,Hebei North University第一节第一节 假单胞菌属（假单胞菌属（Pseudomonas）-铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌P.aeruginosaP.aeruginosa 广泛存在于自然环境，是引起医院内感染的常见病原菌，属广泛存在于自然环境，是引起医院内感染的常见病原菌，属于于重点重点监测菌株。监测菌株。为人体正常菌群的一部分，多数为为人体正常菌群的一部分，多数为条件致病菌。条件致病菌。具有天然抗药性，常呈多重耐药具有天然抗药性，常呈多重耐药,且耐药率逐年增加。且耐药率逐年增加。常见菌有：常见菌有：铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌P.aeruginosaP.aeruginosa 荧光假单胞菌荧光假单胞菌P.fluorecenceP.fluorecence 恶臭假单胞菌恶臭假单胞菌P.PutideP.Putide Department of Microbiology,Hebei North University 1 1、形态染色、形态染色：G-G-直或微弯细长直或微弯细长杆菌，有荚膜，端生单鞭毛，运杆菌，有荚膜，端生单鞭毛，运动活泼动活泼 。2 2、培养特性、培养特性：营养要求不高：营养要求不高：专性需氧，专性需氧，44不生长，不生长，4242可可生长；生长；液体液体混浊，形成菌膜；混浊，形成菌膜；血平板血平板金属光泽、特殊气味、金属光泽、特殊气味、透明溶血环；透明溶血环；普通平板普通平板多种色素（绿脓素多种色素（绿脓素和荧光素）和荧光素）MAC-MAC-半透明，半透明，48h48h后中心棕绿后中心棕绿色色一、生物学性状一、生物学性状：Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University 典型菌落典型菌落大肠菌样型菌落大肠菌样型菌落粗糙型菌落粗糙型菌落粘粘液液型型菌菌落落侏侏儒儒型型菌菌落落 Department of Microbiology,Hebei North University3 3、生化反应：、生化反应：氧化酶阳性；氧化酶阳性；在在O/FO/F培养基上，氧化分解葡萄糖；培养基上，氧化分解葡萄糖；精氨酸双水解酶阳性；精氨酸双水解酶阳性；利用枸橼酸盐；利用枸橼酸盐；液化明胶；液化明胶；还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气氮气。Department of Microbiology,Hebei North University4 4、抗原构造与分型：、抗原构造与分型：外膜蛋白：具有属的特异性外膜蛋白：具有属的特异性菌体菌体(O)(O)抗原抗原 脂多糖：具有型特异性脂多糖：具有型特异性鞭毛（鞭毛（H H）抗原）抗原 Department of Microbiology,Hebei North University5 5、抵抗力强、抵抗力强：对干燥、紫外线有抵抗力；对干燥、紫外线有抵抗力；在蒸馏水中长期存活在蒸馏水中长期存活 对多种抗生素耐药对多种抗生素耐药-先形成生物膜，产先形成生物膜，产 生耐药性生耐药性（通透性差）（通透性差）对热抵抗力弱，对热抵抗力弱，56 30min56 30min可被杀死；可被杀死；对消毒剂敏感，对消毒剂敏感，1%1%石炭酸石炭酸5min5min即被杀死；即被杀死；Department of Microbiology,Hebei North UniversityPA 对亚胺培南的耐药性 铜绿假单胞菌对铜绿假单胞菌对内酰胺酶类抗生素的耐药性内酰胺酶类抗生素的耐药性明显增加明显增加 ,尤其是耐碳青霉烯类尤其是耐碳青霉烯类 PA PA 所致感染所致感染已成为临床抗感染治疗的棘手问题。已成为临床抗感染治疗的棘手问题。耐碳青霉烯类抗生素耐碳青霉烯类抗生素 PA PA 的耐药机制较复杂：的耐药机制较复杂：产生产生-内酰胺酶，如：金属内酰胺酶，如：金属-内酰胺酶内酰胺酶特异性的孔蛋白特异性的孔蛋白OprD2OprD2缺失缺失细菌主动外排系统。细菌主动外排系统。Department of Microbiology,Hebei North University菌菌体体结结构构毒毒素素酶酶致致病病物物质质二、致病性：二、致病性：Department of Microbiology,Hebei North University2 2、所致疾病：、所致疾病：条件致病菌：免疫力低下者易感。条件致病菌：免疫力低下者易感。医院内感染：医院环境监测（水、医院内感染：医院环境监测（水、物体表面物体表面、空气空气）；药物敏感性变迁）；药物敏感性变迁指导临床用药。指导临床用药。临床表现多样：化脓性细菌临床表现多样：化脓性细菌烧伤感染：烧伤感染：绿色、恶臭脓液绿色、恶臭脓液渗透过多层纱布。渗透过多层纱布。呼吸道感染：呼吸道感染：常见于免疫力低下者，肺感染者痰中常见于免疫力低下者，肺感染者痰中带血。带血。中耳炎：中耳炎：常见于慢性感染者。常见于慢性感染者。眼角膜炎：眼角膜炎：穿孔后失明。穿孔后失明。如果合并败血症者死亡率高如果合并败血症者死亡率高 Department of Microbiology,Hebei North University院内感染的重要地位1 1、在院内感染比率仅次于大肠杆菌、在院内感染比率仅次于大肠杆菌10%10%2 2、院内感染常见类型：、院内感染常见类型：下呼吸道或肺部感染下呼吸道或肺部感染 伤口感染伤口感染 尿路感染尿路感染 免疫功能低下者免疫功能低下者败血症败血症 心脏术后心脏术后 Department of Microbiology,Hebei North University三、微生物检验三、微生物检验1 1、标本采集、标本采集：血液、脑脊液、胸腹水、尿液、痰液、脓汁：血液、脑脊液、胸腹水、尿液、痰液、脓汁等。医院环境监控：可采集空气、水、物体表面等。等。医院环境监控：可采集空气、水、物体表面等。2 2、直接镜检、直接镜检：涂片、革兰染色：涂片、革兰染色3 3、分离培养、分离培养：直接接种或增菌后接种血平板和：直接接种或增菌后接种血平板和MACMAC4 4、鉴定、鉴定：根据菌落特征、色素、菌体形态、氧化酶试验等：根据菌落特征、色素、菌体形态、氧化酶试验等作出鉴定。对无色素菌株应与其他假单胞菌鉴别。作出鉴定。对无色素菌株应与其他假单胞菌鉴别。5 5、结果报告、结果报告：无正常菌群部位的标本，有临床意义。无正常菌群部位的标本，有临床意义。有正常菌群的部位标本，有临床特征，检出有意义。有正常菌群的部位标本，有临床特征，检出有意义。有正常菌群的部位标本，无临床特征，检出无意义有正常菌群的部位标本，无临床特征，检出无意义病房物体表面不得检出铜绿假单胞菌病房物体表面不得检出铜绿假单胞菌外科、妇科空气培养不得检出铜绿假单胞菌外科、妇科空气培养不得检出铜绿假单胞菌 Department of Microbiology,Hebei North University2.2.检验程序检验程序血液血液脑脊液、胸腹水、脓液、痰、尿液脑脊液、胸腹水、脓液、痰、尿液粪便粪便营养肉汤营养肉汤分离培养分离培养分离培养分离培养（血琼脂，麦康凯（血琼脂，麦康凯)涂片染色涂片染色(SS，麦康凯，麦康凯)初步鉴定初步鉴定最后鉴定最后鉴定菌落；形态；色素；氧化酶菌落；形态；色素；氧化酶生化反应生化反应分型分型血血噬噬绿绿基基清清菌菌脓脓因因型型体体素素型型 Department of Microbiology,Hebei North University非发酵菌生化编码鉴定结果记录表非发酵菌生化编码鉴定结果记录表试试验验项项目目1 1O/FO/F发发酵酵管管4 4氧氧化化酶酶2 2枸枸橼橼酸酸盐盐1 1麦麦芽芽糖糖4 4精精氨氨酸酸双双水水解解2 2甘甘露露醇醇1 1木木糖糖4 4硝硝酸酸盐盐还还原原2 2D DN NA A1 1乙乙酰酰胺胺结结果果总总值值鉴定值鉴定值 鉴定结果鉴定结果 鉴定者鉴定者 Department of Microbiology,Hebei North University铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别试验试验铜绿假铜绿假单胞菌单胞菌荧光假荧光假单胞菌单胞菌恶臭假恶臭假单胞菌单胞菌斯氏假斯氏假单胞菌单胞菌嗜麦芽假嗜麦芽假单胞菌单胞菌鼻疽假鼻疽假单胞菌单胞菌类鼻疽假类鼻疽假单胞菌单胞菌氧化酶氧化酶+/-+荧光素荧光素+/青脓素青脓素+/+/动力动力+葡糖氧化葡糖氧化+乳糖氧化乳糖氧化+蔗糖氧化蔗糖氧化+木糖氧化木糖氧化+赖氨酸脱羧酶赖氨酸脱羧酶+精氨酸脱羧酶精氨酸脱羧酶+硝酸盐还原硝酸盐还原+/-+明胶液化明胶液化/+/+42生长生长+/+/+Department of Microbiology,Hebei North University铜绿假单胞菌的鉴定依据铜绿假单胞菌的鉴定依据 Department of Microbiology,Hebei North University四、防治原则四、防治原则 铜绿假单胞菌可由各种途径传播，但主要铜绿假单胞菌可由各种途径传播，但主要是通过污染医疗器械、用具及带菌医护人员是通过污染医疗器械、用具及带菌医护人员引起医源性感染。引起医源性感染。结合临床感染症状，如果无感染症状则作结合临床感染症状，如果无感染症状则作为正常菌群（住院患者带菌率为正常菌群（住院患者带菌率20%20%）。）。临床治疗必须密切遵循药敏实验结果。临床治疗必须密切遵循药敏实验结果。Department of Microbiology,Hebei North University第二节不动杆菌属第二节不动杆菌属Acinetobacter不动杆菌不动杆菌(Acinetobacter)Acinetobacter)为一群氧化酶阴性，不发酵糖为一群氧化酶阴性，不发酵糖类、无动力的革兰阴性菌。主要包括：类、无动力的革兰阴性菌。主要包括：Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University见下表二、致病性1 1、腐生菌、水中、腐生菌、水中100%100%有、自来水清洗器械。有、自来水清洗器械。2 2、产生青霉素酶。、产生青霉素酶。3 3、其感染多见于严重基础疾病、大量使用抗生素、激素、呼、其感染多见于严重基础疾病、大量使用抗生素、激素、呼吸机使用者、透析患者：吸机使用者、透析患者：菌血症：静脉导管导致菌血症：静脉导管导致 伤口感染：蜂窝组织炎伤口感染：蜂窝组织炎 胸外科术后易感胸外科术后易感 Department of Microbiology,Hebei North University试验试验醋酸钙醋酸钙不动杆菌不动杆菌鲍曼鲍曼不动杆菌不动杆菌溶血溶血不动杆菌不动杆菌琼氏琼氏不动杆菌不动杆菌约翰逊约翰逊不动杆菌不动杆菌洛菲洛菲不动杆菌不动杆菌葡糖氧化葡糖氧化+/木糖氧化木糖氧化+/乳糖氧化乳糖氧化+精氨酸双水解酶精氨酸双水解酶+/+鸟氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶+苯丙氨酸脱氨酶苯丙氨酸脱氨酶+丙二酸盐利用丙二酸盐利用+/+柠檬酸盐利用柠檬酸盐利用+/+明胶液化明胶液化+生长温度生长温度37+41+44+不动杆菌属主要菌种生化反应特征不动杆菌属主要菌种生化反应特征 Department of Microbiology,Hebei North University血平板和血平板和MACMAC Department of Microbiology,Hebei North University(3)(3)初步鉴定初步鉴定 染色为革兰阴性球杆状菌，成对排列，氧化酶（染色为革兰阴性球杆状菌，成对排列，氧化酶（-），），O/F O/F 试验为氧化型，动力（试验为氧化型，动力（-），硝酸盐还原（），硝酸盐还原（-）。）。符合上述结果即可判定为不动杆菌属的细菌。符合上述结果即可判定为不动杆菌属的细菌。与属内其他菌的鉴别：与属内其他菌的鉴别：Department of Microbiology,Hebei North University不动杆菌属检验程序不动杆菌属检验程序血液、脑脊液血液、脑脊液增菌培养增菌培养血平板和血平板和MAC Department of Microbiology,Hebei North University第三节第三节产碱杆菌属产碱杆菌属Alcaligenes Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University窄食单胞菌窄食单胞菌 Department of Microbiology,Hebei North University生物学性状生物学性状 Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University Department of Microbiology,Hebei North University窄食单胞菌鉴定依据窄食单胞菌鉴定依据 Department of Microbiology,Hebei North University其他临床常见的非发酵菌其他临床常见的非发酵菌黄杆菌属：黄杆菌属：1 1、氧化酶阳性、氧化酶阳性、H H2 2O O2 2阳性阳性2 2、细长杆菌，无鞭毛，专性需氧、细长杆菌，无鞭毛，专性需氧3 3、血平板上产生色素（黄）、血平板上产生色素（黄）4 4、磷酸酶阳性、磷酸酶阳性5 5、O-FO-F为氧化型为氧化型 Department of Microbiology,Hebei North University其他临床常见的非发酵菌其他临床常见的非发酵菌莫拉菌属莫拉菌属：1 1、氧化酶阳性、氧化酶阳性、H2O2H2O2阳性阳性2 2、球杆菌，无鞭毛，专性需氧、球杆菌，无鞭毛，专性需氧3 3、营养要求高，最适、营养要求高，最适32-3532-354 4、不分解任何糖类、不分解任何糖类5 5、O-FO-F为产碱型为产碱型
