DB54_T 0356-2024 偏牛人工授精技术操作规程.docx

ICS 65.020.30 CCS B 4354西 藏 自 治 区 地 方 标 准DB54/T 03562024犏牛人工授精技术操作规程2024-04-21 发布 2024-05-21 实施西藏自治区市场监督管理局 发 布DB54/T 03562024前 言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。本文件由西藏自治区动物疫病预防控制中心（西藏自治区畜牧总站）提出。本文件由西藏自治区农业农村标准技术委员会归口。本文件起草单位：西藏自治区动物疫病预防控制中心（西藏自治区畜牧总站）。本文件主要起草人：达瓦、仁增顿珠、拉巴次仁、拉旺扎西、陈瑶、次仁多吉、孙锋博、张楠、刘 楠、措姆。IDB54/T 03562024犏牛人工授精技术规程1 范围本文件规定了犏牛人工授精术语定义、人工授精准备、发情鉴定、 输精前的准备、输精、妊娠诊断等。本文件适用于犏牛养殖集中区域内的犏牛养殖场、散养户及配种站人工授精技术人员及其他相关从 业人员的技术操作。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4143 牛冷冻精液GB/T5458 液氮生物容器3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。 3.1犏牛牦牛与黄牛杂交后所产生的第一代杂种统称为犏牛，公犏牛无繁育能力。 3.2冷冻精液将原精液用稀释液等温稀释、平衡后快速冷冻， 在液氮中保存。犏牛的冷冻原精液来源是安格斯肉 牛，精液分装细管冻精剂型。3.3人工授精人为利用器械采取公畜的精液，经过检查和处理后，再用器械输入到母畜的生殖道内，使之受胎的 一种方法。3.4发情鉴定通过外部观察或直肠把握检查方式确定母牛发情的方法，犏牛以直肠把握法为主要依据。 3.5发情周期2DB54/T 03562024初情期后，每隔一定时间会发情一次，通常将这次发情开始至下次发情开始、或这次发情结束至下 次发情结束所间隔的时期，称为发情周期，犏牛的发情周期为18d24d。3.6能繁母犏牛达到生殖年龄且具有生殖能力的母犏牛。4 人工授精准备4.1 固定式与活动式相结合犏牛养殖集中区建设配种点，每个配种点配备配种架、液氮罐、人工授精器械， 消毒液、液体石蜡 等用于犏牛的配种工作。针对路途相对较远的地方，配种员携带配种仪器设备开展巡逻式配种。4.2 仪器设备试验台、桌布、显微镜、载玻片、盖玻片、液氮罐、液氮、细管冻精、输精器、输精器外套、玻璃 瓶、玻璃棒、烧杯、温度计、镊子、一次性手套、常用消毒剂、纱布、卫生纸、热水壶、毛巾、脸盆、 肥皂等。5 发情鉴定犏牛整体上呈季节性发情， 发情季节主要集中在6月-9月份，但集中管理模式下可常年发情，夜晚 的发情率高于白天，下雨后天气转阴时发情率高，具体见附录A。5.1 外部观察通过母牛的外部表现症状和行为变化判断是否发情和发情程度。5.2 阴道检查法主要观察生殖器变化，用开膣器使阴道开张，观察外阴部的肿胀、流出的粘液、分泌物和子宫颈口 的变化，判断母牛发情与否。5.3 直肠检查通过直肠检查卵巢，触摸卵泡发育程度，判断发情程度及排卵时间。6 输精前的准备6.1 器具清洗和消毒凡是触碰冻精和母牛生殖道的器具都应进行清洗和消毒。金属器械清洗后， 待自然条件下冷却后待 用。使用前用75%酒精消毒干净，有条件的地方使用高压锅对金属器具进行消毒。 器械消毒，可以在121 摄氏度，气压在102.9kPa下消毒20分钟后取出使用。6.2 冷冻精液的准备3DB54/T 03562024冷冻精液应浸泡在液氮生物容器中贮存，定时补充液氮，保证细管冻精深埋于液氮面10cm以下，液 氮生物贮存应符合GB/T5458有关规定，冻精在液氮容器外停留时间不得超过5s。6.3 冷冻精液的解冻用长柄镊子从液氮罐中取出细管冻精，寻找冻精不得超过10s，停留部位应距颈管上口8cm以下。冻 精取好后放入38±2水中，解冻5s10s，待全部融化后，取出擦干即可，用细管剪剪开不带棉塞的一 端细管冻精封口，剪口应正，断面应齐，将有棉塞的一端装在输精器推杆上，套上外保护套备用。解冻 后的精液应在15min内输精，以防止对精子的第二次冷打击。根据季节的不同，注意输精前输精器的保 温措施，若路程较远，可将准备好的输精器放于贴身衣物内保暖,精液解冻后保存时间不应超过1h。6.4 冻精质量检查在显微镜下检查做直线前进运动的精子占整个精子数的35%以上、视为合格， 35%以下的弃之，冻精 质量检测应符合GB 4143。6.5 母牛的保定经发情鉴定确定输精的母畜，将其牵入配种架内保定好，注意安全措施。6.6 母牛外阴部的清洁输精前，带上输精器外套后，并对保定母畜外阴部周围的粪便、污物用温肥皂水清洗干净， 然后用 消毒液（高锰酸钾水）清洗一遍。6.7 输精准备将剪去封口的细管精液迅速装入输精器管内，输精器进入塑料外套管，管口顶紧外套管中固定圈， 向前推到头，外套管后部与输精器后部螺纹处拧紧，全部结合要紧密备用。7 输精7.1 输精时间最佳输精时间为母牛接收爬跨后的10h18h。母牛接受爬跨后8h12h为第一次输精时间，第二次 输精时间为母牛接受爬跨后16h20h。在发情盛期、后期各输精1次，两次输精的时间间隔为8h12h。7.2 输精方法7.2.1 触摸卵泡法在卵泡薄、满而软、有弹性和波动明显， 成熟葡萄状，有一触即破的感觉，接近成熟排卵时及时输 精。6h-8h后在卵泡未破裂之前，再输精一次。7.2.2 直肠把握法母犏牛个体与牦牛接近，生殖器官组织结构主要表现为子宫角发达、子宫体短小,子宫颈长 5cm 10cm,外壁直径3cm6cm，子宫颈口小，内有明显的三个具有许多细小而紧缩的皱璧的子宫颈环，子宫 颈宫口几乎临近角间沟纵隔。输精员将手指甲剪短磨光， 左手手臂套上乳胶手套，涂上一层润滑剂，五 指并拢呈锥形，伸入直肠，掏出粪便。动作要轻柔， 左手臂进入直肠25cm30cm，在直肠内触摸并握住 子宫颈，左手稍微下压，使阴门张开，右手持输精管（枪）由阴门缓缓插入，先稍向上斜插，避开尿道4DB54/T 03562024口，然后再向下平插至子宫颈口，将输精器前端插入子宫颈口内3cm-4cm(约经过2个-3个皱襞），若能 确定左右两侧具体卵泡发育位置，可将输精器继续伸向卵泡发育侧输精；若不能确定具体位置，则将输 精器微微后拉再行输精。输精后缓缓将输精器拔出， 并适当按摩阴蒂，以防止精液倒流，可有效提高受 胎率。7.3 输精部位及输精量将精液输到接近子宫角间沟分岔部的子宫体内，一次输0.25ml，一个情期输精两次。7.4 注意事项输精过程要严格按照慢插、适深、轻注、缓出、防倒流的原则进行，直肠检查或输精时母牛努责、 肠道形成空洞时，不要硬性抓捏，防止损伤母犏牛阴道壁、子宫颈口和子宫体。8 妊娠诊断妊娠诊断时间一般在输精后第一个发情周期开始到两个月。未妊娠的母牛进行查胎补配， 已妊娠的 母牛进行加强饲养管理，做好保胎、防流工作。8.1 外部观察母犏牛妊娠后，经过2个-3个情期后，周期性发情停止，食欲增进，营养状况改善，毛色润泽，性 情变得温顺，行为变安稳，体重增加。妊娠中后期腹围增大，甚至可观察到胎动，乳房逐渐肿大。8.2 直肠检查法输精后三个情期未发情，通过直肠检查卵巢、子宫角的形状、质地变化来判断是否妊娠。主要根据 子宫角的卵巢黄体的变化进行诊断，妊娠母牛子宫角两侧不对称，孕角侧卵巢比另一侧卵巢大，孕角有 波动感，卵巢有妊娠黄体突出于排卵侧卵巢表面，黄体质地柔软、丰满、顶端触感凸起。具体方法为先摸到子宫颈，再将中指向前滑动，寻找角间沟，然后将手向前、向下、再向后分别触 摸两个子宫角及卵巢的变化。一般怀孕20d25d，孕角侧卵巢比另一侧卵巢大，并有黄体，子宫壁较厚， 有弹性；怀孕60d，孕角大小为空角的两倍左右，波动感明显，角间沟变得宽平，子宫向腹腔下垂；怀 孕90d，孕侧子宫角变大，直径813，波动明显，角间沟消失，有时可触摸到绿豆大小的子叶。9 记录包括配种母牛编号、畜主、输精时间、输精操作人员、冻精号、精子活力、品种、供应商、妊娠检 查、产犊日期见附录B,以及受胎率，繁殖率计算方法见附录C。上述内容可用表格的形式记录。5DB54/T 03562024AA附 录 A （规范性）B表 1 母犏牛发情表现期别发情初期发情盛期发情末期外部表现母犏牛鸣叫不安，人靠近竖起 耳朵摇头，食欲减退，经常爬 跨其它牛，但拒绝公牛或者其他母犏牛的爬跨。母犏牛极度不安，食欲停止，性欲旺盛，尾巴翘起，接受爬 跨，爬跨其它牛。母犏牛性欲减退，不再爬跨其它牛，由狂躁转为 安静。生殖器官变化外阴轻微红肿，阴道粘膜充血流出稀薄透明 液体。外阴部明显肿胀，流出粘液增多，尾部毛发被其他牛趴跨时 翻起来的现象。外阴部肿胀减退，粘液变稠，呈黄白色。卵泡发育程度直肠检查子宫变软，卵巢有一侧增大，有卵泡，无弹性，此 期维持10h左右。直肠检查子宫松软，卵泡体积 增大，直径11.5 cm，突出于 卵巢表面，弹性强，有波动感。此期约维持812 h。直肠检查子宫颈变松软，卵泡壁变薄，波动明显，成熟葡萄状，有一触即破的感觉，此期约维持810 h。B C附 录 B （规范性）表 2 母犏牛配种记录表C D母畜公畜备注序 号畜主 （场）编 号胎 次发情日期输精日期妊娠检查冻精号品 种活 力供货厂 商输精员年月日年月日检查日期是否受胎产犊日期123.6DB54/T 03562024附 录 C（规范性）公式受胎率（%）=同期受胎的母牛数/同期输精母牛数×100% 繁殖率（%）=同期内出生仔畜数/同期可繁母牛7