临床检验方法的评价CLSIEP文件 .ppt
临床检验方法的评价临床检验方法的评价郭郭 健健卫生部临检中心卫生部临检中心方法评价方法评价方法评价方法评价方法选择方法选择方法选择方法选择常规分析前准备常规分析前准备常规分析前准备常规分析前准备常规分析常规分析常规分析常规分析样品样品样品样品统统计计质质控控统统计计质质控控报告结果报告结果报告结果报告结果预预防防措措施施预预防防措措施施方方法法发发展展方方法法发发展展分析方法分级分析方法分级决定性方法（决定性方法（definitive method）：）：经详尽经详尽研究尚未发现不准确度或不确定性原因研究尚未发现不准确度或不确定性原因的方法。的方法。参考方法（参考方法（reference method）：）：经详尽研经详尽研究证实其不准确度与不精密度可以忽略究证实其不准确度与不精密度可以忽略的方法。的方法。常规方法（常规方法（routing method）：）：可满足临床可满足临床或其他目的需要的日常使用的方法。或其他目的需要的日常使用的方法。常规方法常规方法常规方法常规方法参考方法参考方法参考方法参考方法决定性决定性决定性决定性 方法方法方法方法准确度增加准确度增加准确度增加准确度增加应用范围增加应用范围增加应用范围增加应用范围增加不同方法的关系不同方法的关系标准品（标准品（标准品（标准品（reference materialreference materialreference materialreference material）：）：）：）：充分均匀并具有一充分均匀并具有一充分均匀并具有一充分均匀并具有一个或多个良好确定的特性值的材料或物质，用来校个或多个良好确定的特性值的材料或物质，用来校个或多个良好确定的特性值的材料或物质，用来校个或多个良好确定的特性值的材料或物质，用来校准仪器设备、评估测定方法或给其它物质赋值。准仪器设备、评估测定方法或给其它物质赋值。准仪器设备、评估测定方法或给其它物质赋值。准仪器设备、评估测定方法或给其它物质赋值。一级标准品一级标准品一级标准品一级标准品（原级参考物）：（原级参考物）：（原级参考物）：（原级参考物）：稳定、均一，由高度稳定、均一，由高度稳定、均一，由高度稳定、均一，由高度准确的若干方法定值，可用于校准决定性方法及为准确的若干方法定值，可用于校准决定性方法及为准确的若干方法定值，可用于校准决定性方法及为准确的若干方法定值，可用于校准决定性方法及为二级标准品定值。二级标准品定值。二级标准品定值。二级标准品定值。二级标准品：二级标准品：二级标准品：二级标准品：用一级标准品校准，参考方法定值。用一级标准品校准，参考方法定值。用一级标准品校准，参考方法定值。用一级标准品校准，参考方法定值。校准品：校准品：校准品：校准品：用二级标准品校准，拟被用于校准的常规用二级标准品校准，拟被用于校准的常规用二级标准品校准，拟被用于校准的常规用二级标准品校准，拟被用于校准的常规方法定值。用于对常规方法和仪器的校准。方法定值。用于对常规方法和仪器的校准。方法定值。用于对常规方法和仪器的校准。方法定值。用于对常规方法和仪器的校准。标准品分级标准品分级 参考方法参考方法参考方法参考方法 决定性方法决定性方法决定性方法决定性方法 厂家方法厂家方法厂家方法厂家方法 常规分析常规分析常规分析常规分析 一级标准品一级标准品一级标准品一级标准品二级标准品二级标准品二级标准品二级标准品校校校校 准准准准 品品品品准确度的传递准确度的传递溯溯源源校校准准仪器参数仪器参数试剂试剂人血清无机成分分析标准物质人血清无机成分分析标准物质人血清无机成分分析标准物质人血清无机成分分析标准物质GBW09135GBW09135血清胆固醇标准物质血清胆固醇标准物质血清胆固醇标准物质血清胆固醇标准物质GBW09138GBW09138一级标准物质一级标准物质二级标准物质二级标准物质红细胞微粒标准物质红细胞微粒标准物质红细胞微粒标准物质红细胞微粒标准物质GBWGBW（E E）090001090001胆红素标准物质胆红素标准物质胆红素标准物质胆红素标准物质GBWGBW（E E）090002090002氰化高铁血红蛋白溶液标准物质氰化高铁血红蛋白溶液标准物质氰化高铁血红蛋白溶液标准物质氰化高铁血红蛋白溶液标准物质GBWGBW（E E）090004090004纯化血红蛋白标准物质纯化血红蛋白标准物质纯化血红蛋白标准物质纯化血红蛋白标准物质GBWGBW（E E）090011090011评价内容：评价内容：+初步评价（初步评价（NCCLS EP10）+精密度（精密度（NCCLS EP5）+对比及偏差（对比及偏差（NCCLS EP9）+线性（线性（NCCLS EP6）+抗干扰能力（抗干扰能力（NCCLS EP7）+基质效应（基质效应（NCCLS EP14）+临床准确度（敏感性和特异性）临床准确度（敏感性和特异性）（NCCLS GP10，ROC曲线）曲线）方法的评价方法的评价NCCLS文件文件EP9-A用患者样本进行方法对比用患者样本进行方法对比及偏差评估及偏差评估批准指南批准指南1995年年12月月评价两种分析方法（同一分析项目）评价两种分析方法（同一分析项目）的偏差。的偏差。评价要求：评价要求：熟悉仪器操作熟悉仪器操作熟悉评价方案熟悉评价方案质控质控足够的数据（最少足够的数据（最少5个工作日，个工作日，40个样本）个样本）用途用途：目的：目的：引进新方法前或用一种方法替代另一种方引进新方法前或用一种方法替代另一种方 法时进行偏差分析。法时进行偏差分析。实验样本：实验样本：实验样本：实验样本：来源于健康人或患者，无干扰，尽量避免贮存。来源于健康人或患者，无干扰，尽量避免贮存。来源于健康人或患者，无干扰，尽量避免贮存。来源于健康人或患者，无干扰，尽量避免贮存。对比方法：对比方法：对比方法：对比方法：厂家要求的实验室常规方法或公认的参考方法。厂家要求的实验室常规方法或公认的参考方法。厂家要求的实验室常规方法或公认的参考方法。厂家要求的实验室常规方法或公认的参考方法。具有好的精密度具有好的精密度具有好的精密度具有好的精密度 没有已知的干扰物没有已知的干扰物没有已知的干扰物没有已知的干扰物 相同单位相同单位相同单位相同单位 相对国家标准或参考方法的偏差是已知的相对国家标准或参考方法的偏差是已知的相对国家标准或参考方法的偏差是已知的相对国家标准或参考方法的偏差是已知的测定范围：测定范围：医学决定水平范围内（均匀分布）医学决定水平范围内（均匀分布）样本数：样本数：至少至少40例，增加可提高可信性。例，增加可提高可信性。测定方法：测定方法：两种方法分别做双份测定。两种方法分别做双份测定。测定顺序：测定顺序：每天每天：1、2、3、4、5、6、7、8 8、7、6、5、4、3、2、1测定次数：测定次数：每天分别用两种方法进行测定，每天分别用两种方法进行测定，至少测定至少测定5天，共天，共40个样本个样本数据监督：数据监督：系统误差、人为误差系统误差、人为误差质控：质控：常规质控常规质控熟悉仪器及方法熟悉仪器及方法收集数据收集数据检查方法内的离群点检查方法内的离群点 界限：界限：（双份测定）相对差值均值（双份测定）相对差值均值的的4倍倍实验步骤实验步骤绘图绘图 均值散点图（均值散点图（均值散点图（均值散点图（X X，Y Y）所有值散点图（所有值散点图（所有值散点图（所有值散点图（YijYij，XiXi）偏差图偏差图偏差图偏差图 散点图（散点图（散点图（散点图（Yij-XijYij-Xij），），），），XiXi）均值散点图（均值散点图（X，Y）偏差图：每次测定的偏差图：每次测定的Y均值与均值与X均值均值 之差之差-相应相应X均值图均值图线性相关目测检查线性相关目测检查两种方法间离群值目测检查两种方法间离群值目测检查 界限：界限：4倍两种方法间绝对偏差的均值倍两种方法间绝对偏差的均值 绝对差值允许范围绝对差值允许范围:相对差值允许范围相对差值允许范围:适合范围适合范围 计算计算 r，r2=0.95 范围适合范围适合 r2 0.95 扩大数据范围扩大数据范围线性回归线性回归 计算计算 均匀离散度的直观检查均匀离散度的直观检查预期偏差及可信范围预期偏差及可信范围 线性回归方程线性回归方程 计算偏差（高、中、低计算偏差（高、中、低3组）组）解释实验结果并与内部标准比较解释实验结果并与内部标准比较定量分析方法的线性评价定量分析方法的线性评价Evaluation of The Linearity of Quantitative Analytical MethodsEP6-P目的目的为实验室中采用定量分析方法的用户提为实验室中采用定量分析方法的用户提供评价仪器或方法是否满足厂家线性指供评价仪器或方法是否满足厂家线性指标的评价方法。标的评价方法。用户可为分析方法设定线性范围。用户可为分析方法设定线性范围。定义定义Assay Range（Linear Range)The range of concentration or activity in which the final output value of a system is proportional to the analyte concentration or activity within a stated tolerance.定义定义Linearity:The measure of the degree to which a curve approximates a straight line.It refers to overall system response(i.e.,the final analytical answer rather than the instrument output)Scope and Limitations线性是分析方法的一个特征，不同于准线性是分析方法的一个特征，不同于准确性和精密度。确性和精密度。线性实验应该使用与待分析物基质相似线性实验应该使用与待分析物基质相似的样本。的样本。线性检验系统反应，包括校准、线性化线性检验系统反应，包括校准、线性化技术、系数和仪器反应。技术、系数和仪器反应。使用者的需求使用者的需求用简单的实验来检验厂家标示的线性范用简单的实验来检验厂家标示的线性范围及定量分析方法的分析范围。围及定量分析方法的分析范围。在实验室中作为方法学的信息（方法线在实验室中作为方法学的信息（方法线性）。性）。进行线性评价实验。进行线性评价实验。仪器的熟悉过程仪器的熟悉过程执行分析过程的实验室人员必须掌握仪执行分析过程的实验室人员必须掌握仪器操作和维护程序、样本准备方法和校器操作和维护程序、样本准备方法和校准。准。对较简单的设备需要对较简单的设备需要5天或更少时间。天或更少时间。对较复杂的多通道设备需要对较复杂的多通道设备需要5天或更长时天或更长时间。间。实验周期实验周期在完成仪器熟悉过程后开始实验并收集在完成仪器熟悉过程后开始实验并收集数据。数据。全部实验和数据采集应在同一工作日内全部实验和数据采集应在同一工作日内完成。完成。线性评价实验线性评价实验样本要求：最少4个浓度水平，推荐5个水平。基质效应：应使用与病人样本相似的样本或注明基质类型。可以使用的样本可以使用的样本病人混合血清病人混合血清 理想的样本基质理想的样本基质 高值样本：高于上限高值样本：高于上限30%低值样本：线性低限或更低。低值样本：线性低限或更低。可以使用的样本可以使用的样本Patient-Sample Pool Spiked with Analyte 加入品在没有干扰物存在时不需高纯度。Pool Diluted with Treated Pool Material 用于降低分析物浓度，如：透析、热处理、层析。可以使用的样本可以使用的样本Pool Diluted with Saline。在线性实验中使用此类样本可掩盖不同的基质在线性实验中使用此类样本可掩盖不同的基质效应效应。Commercial Control/Calibrator Material 此类样本由于不是正常的生理形式此类样本由于不是正常的生理形式，可掩盖实，可掩盖实际的线性结果。际的线性结果。可以使用的样本可以使用的样本Underdiluted/Overdiluted Commercial Control MaterialAqueous Solutions（一般无基质效应）（一般无基质效应）Solution in Other Solvents（基质效应与（基质效应与有机溶剂相似）有机溶剂相似）推荐的样本添加材料推荐的样本添加材料ALB：白蛋白干粉、：白蛋白干粉、human fraction V.乙醇：无水乙醇乙醇：无水乙醇ALP：纯酶：纯酶AMS：腮腺或胰腺提取物：腮腺或胰腺提取物BIL：胆红素纯品胆红素纯品Ca:CaCO3Cl:NaCl推荐的样本添加材料推荐的样本添加材料CHOL：胆固醇纯品或稀释质控品：胆固醇纯品或稀释质控品CO2：CaCO3CREA：标准液或高值血清：标准液或高值血清-ALT：纯酶纯酶GLU：右旋糖右旋糖AST：纯酶纯酶ALT：纯酶纯酶推荐的样本添加材料推荐的样本添加材料HBD：纯酶纯酶LDH：纯酶纯酶Lipase：胰腺提取物胰腺提取物Mg：MgCl2P:K(H)2PO4或或Na(H)PO4TP：白蛋白干粉、人或牛的成份白蛋白干粉、人或牛的成份VUA：在得不到高值病人样本时，使用标准储备液或干在得不到高值病人样本时，使用标准储备液或干燥尿酸燥尿酸。BUN：在得不到高值病人样本时，使用标准储备液或：在得不到高值病人样本时，使用标准储备液或干燥尿素干燥尿素。样本分析顺序样本分析顺序分析序列应为随机排列。分析序列应为随机排列。有显著携带污染时，应用空白隔开样本。有显著携带污染时，应用空白隔开样本。每个实验组内应至少分析每个实验组内应至少分析4个（最好是个（最好是5个）不同浓度水平的样本。个）不同浓度水平的样本。样本浓度范围样本浓度范围应覆盖待评线性范围的上、下限。应覆盖待评线性范围的上、下限。评价结果不满意时应重新设定浓度。评价结果不满意时应重新设定浓度。线性范围内至少应保留有线性范围内至少应保留有4个浓度。个浓度。样本的准备样本的准备足量的混合血清。足量的混合血清。低浓度混合血清（低浓度混合血清（No1）；高浓度混合血）；高浓度混合血清（清（No5）血清（血清（No2）：）：3份份“No1”+1份份“No5”血清（血清（No3）：）：2份份“No1”+2份份“No5”血清（血清（No4）：）：1份份“No1”+3份份“No5”样本浓度计算样本浓度计算 C1V1+C5 V5浓度浓度=-V1+V5数据收集数据收集x1 y1-1 y1-2 y1-3 y1-4x2 y2-1 y2-2 y2-3 y2-4x3 y3-1 y3-2 y3-3 y3-4 x4 y4-1 y4-2 y4-3 y4-4x5 y5-1 y5-2 y5-3 y5-4数据评价数据评价观察有无明显的数据错误。观察有无明显的数据错误。若有明显异常时应判断是否为离群点。若有明显异常时应判断是否为离群点。如离群点超出如离群点超出2点，则保留全部数据或重点，则保留全部数据或重做全部实验。做全部实验。离群点检查离群点检查用于特定浓度用于特定浓度Y值离群点的检验。值离群点的检验。将将4个重复值从大到小排列（个重复值从大到小排列（Y1到到Y4）。）。计算：计算：D=Y1-Y4若若Y1可能是离群点，计算：可能是离群点，计算：D1=（Y1-Y2）/D若若Y4可能是离群点，计算：可能是离群点，计算：D4=（Y3-Y4）/D离群点判断离群点判断判断值（判断值（Critical value)(0.05)0.765(0.01)0.889绘图和评价绘图和评价线性线性X-Y图，图，X轴为分析物浓度。轴为分析物浓度。反应值或仪器输出值为反应值或仪器输出值为Y轴。轴。目测离群值。目测离群值。(Y=aX+b )目测线性判断是否符合要求。目测线性判断是否符合要求。进行统计学判断和评价。进行统计学判断和评价。注意：注意：统计学标准和临床可接受限不同。统计学标准和临床可接受限不同。慎用方法学线性范围从慎用方法学线性范围从0开始。开始。有临床意义的浓度应在线性评价中：有临床意义的浓度应在线性评价中：最小的线性浓度最小的线性浓度医学决定水平医学决定水平最大的线性浓度最大的线性浓度参考文献参考文献Dixon W.J.and Massey F.J.introduction to statistical analysis,3rd edition,McGraw-Hill Book Co.,New York,1969,pp308-310,500,536-537.Weissberg A.and Beatty G.H.Tables of tolerance-limit factors for normal distributions,Technometrics 2:4,1960Graybill,Franklin A.An introduction to linear statistical models,volume I,McGraw-Hill Book Company,1961,p191.临床化学设备的精密度评价临床化学设备的精密度评价Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices,Approved Guideline,1984EP5精密度的内容精密度的内容批内批内批间批间日内日内日间日间总精密度总精密度实验方法实验方法试剂和校准物：同一批号试剂和校准物：同一批号样本：基质与临床样本相似，样本：基质与临床样本相似，2个以上浓个以上浓度（参考医学决定水平）。度（参考医学决定水平）。实验天数：实验天数：20天以上天以上实验次数：每天实验次数：每天2批，每批批，每批2个（批号）个（批号）样本，每个样本重复样本，每个样本重复2次次精密度评价批内：批内：日内日内：（批间）：（批间）日间：日间：总精密度：总精密度：
