动物实验基本技术和方法 .ppt

动物实验基本技术和方法动物实验基本技术和方法广东药学院实验动物中心广东药学院实验动物中心主要内容主要内容一、实验前准备二、实验动物抓取与固定三、年龄的大致判断四、性别、发情、与妊娠鉴定五、编号和标记六、分组七、去毛八、给药途径与方法九、采血方法十、其他体液采集十一、麻醉方法十二、处死方法十三、动物病理检查一、一、实验前准备实验前准备v理论准备：了解动物实验基础知识 制定研究计划和方案 查阅关于实验方法的参考文献v条件准备：仪器、器械、药品 运输 动物实验和饲养场所二、实验动物抓取和固定二、实验动物抓取和固定（一）小鼠（一）小鼠小鼠固定器固定小鼠固定器固定（二）大鼠（二）大鼠大鼠固定盒固定大鼠固定盒固定（三）豚鼠（三）豚鼠（四）家兔（四）家兔兔子固定器固定兔子固定器固定狗钳狗钳狗的抓取固定狗的抓取固定（五）犬（五）犬犬嘴固定方法犬嘴固定方法猫的抓取猫的抓取犬固定犬固定（六）猴抓取与保定（六）猴抓取与保定猴徒手固定猴徒手固定三、年龄的大致判断三、年龄的大致判断（一）大、小鼠1、根据形态鉴定日龄（大、小鼠情况基本一样）日龄/d外观形态特征1仔鼠裸体鲜红3耳壳露出表皮4脐带瘢痕脱落5能翻身8能爬行日龄/d外观形态特征10能听到声音911全身被白毛，门齿长出1315眼皮张开，能跳跃，能抓取东西18以后能自行采食，独立生活2.根据体重鉴定日龄根据体重鉴定日龄 小鼠日龄与体重的对应日龄/d初生 5 10 15 20 25 305 10 15 20 25 30体重/g 1.8 4.0 6.0 11.0 15.0 21.0 24.01.8 4.0 6.0 11.0 15.0 21.0 24.0 大鼠日龄与体重的对应日龄/d初生 10 20 30 40 体重/g67 1725 3550 5590 100150日龄/d 50 60 70 80体重/g150210 170240 210270 240320（二）豚鼠（二）豚鼠一般老年豚鼠牙齿和趾爪长，被毛稀疏无光泽，眼神呆滞，行动迟缓。而年轻豚鼠牙齿短白，爪短软，眼睛圆亮，行动敏捷，被毛有光泽，且紧贴身体。同样，也可根据体重来推断大致年龄。同日龄豚鼠，雌性体重略高于雄性。与大鼠一样，其体重受多种因素的制约。实验对年龄要求比较严格时，必须由卡片记录提供准确年龄。日龄/d 初生 7 20 30 60 体重/g6080 100120 150200 170220 240300日龄/d 90 120 180体重/g330400 400470 520600（三）家兔三）家兔家兔的门齿和爪随年龄增长而增长，是年龄鉴别的重要标志。青年兔门齿洁白，短小，排列整齐；老年兔门齿暗黄，厚而长，排列不整齐，有时破损。白色家兔趾小基本呈红色，尖端呈白色。1岁家兔红色与白色长度相等；1岁以下，红多于白；1岁以上，白多于红。还可根据趾爪的长度与弯曲度来区别。青年兔趾爪较短，直平，隐在脚毛中，随年龄的增长，趾爪露出于脚毛之外，而且爪尖钩曲。另外，家兔皮薄而紧，眼神明亮，行动活泼的为青年兔；皮厚而松，眼神颓废，行动迟缓的为老年兔。（四）犬（四）犬犬的年龄主要以牙齿的生长情况、磨损程度、外形颜色等情况综合判定。仔犬在出生后十几天即开始生出乳齿，2个月以后开始由门齿犬齿臼齿顺序逐渐更换为恒齿，8l0个月齿换齐。但犬齿需要1岁半以后才能长坚实。饲养场饲养的品种犬，可以根据记录，明确了解年龄，而收购的杂种犬就无法知道确切年龄。实际中，可根据犬齿更换和磨损情况，估计犬的年龄。年龄 犬齿更换和磨损情况2个月以下仅有乳齿(白、细、尖)24个月更换门齿46个月更换犬齿(白，牙尖圆钝)610个月更换臼齿1岁牙长齐，洁白光亮。门齿有尖突2岁下门齿尖突部分磨乎3岁上、下门齿尖突大部分磨平45岁上、下门齿开始磨损呈微斜面，并发黄68岁门齿磨成齿根，犬齿发黄、磨损910岁唇部、胡须发白10岁以上门齿磨损，犬齿不齐全，牙根黄，唇边胡须全白四、性别、发情、与妊娠鉴定四、性别、发情、与妊娠鉴定（一）大、小鼠的（一）大、小鼠的性别鉴定性别鉴定 初生兔仔如阴部孔洞扁圆而略大于肛门，且与肛门相向、距离较近的是母兔；孔洞呈圆形而略小于肛门，孔洞向前而距肛门较远的是公兔。三月龄以上的兔子，只要看有无阴囊即可区别公母。（二）兔的（二）兔的性别鉴定性别鉴定Female Male（三）（三）大、小鼠发情大、小鼠发情鉴定鉴定小鼠性周期阴道分泌物涂片变化小鼠性周期阴道分泌物涂片变化 阶 段 持续时间（h）涂 片 可 见 卵 巢 变 化动情前期 9-18大量有核上皮细胞少量角化上皮细胞卵泡加速生长动 情 期 6-12满视野角化上皮细胞，少量有核上皮细胞卵泡成熟、排卵动情后期 30-48角化上皮细胞及白细胞黄体生成动情间期 36-42大量白细胞及少量粘液黄体退化（四）（四）妊娠妊娠鉴定鉴定1、阴道栓法（大、小鼠、豚鼠）2、外部检查法3、摸胎法4、阴道检查法5、直肠检查法6、超声波检查法7、孕酮含量测定法阴道栓阴道栓五、编号和标记五、编号和标记1、染色法：浅色动物 3.5-5苦味酸溶液（黄色）0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）煤焦油酒精溶液（黑色）龙胆紫溶液（紫色）2、打耳孔法：小型动物、打耳孔法：小型动物 3、剪趾法：小型动物、剪趾法：小型动物4、剪尾法：大、小鼠，仅限与两组间区分5、烙印法：刺号钳，中、大型动物6、针刺法：中、大型动物7、号牌法：耳标签、项圈、腿圈，中、大型动物8、剪毛法：大动物9、笼子标号六、分组六、分组随机化分组：避免人为影响例：将14只小鼠随机分成两组。先将小鼠编为I14号，在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄14个随机数字。编排如下：动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14随机数字 16 22 77 94 39 49 54 43 54 82 17 37 93 23归 组 B B A B A A B A B B A A A A奇数代表A织，偶数代表B组A组：3 5 6 8 11 12 13 14 B组：1 2 4 7 9 10调整分组：接刚才随机数字23继续抄表得随机数字78，用78除以8（因为需要把A组的8个数字调整掉一个），得余数6，所以把A组的第6个动物，即12号动物调整到B组 最终分组A组：3 5 6 8 11 13 14B组：1 2 4 7 9 10 12例：12只大鼠随机分为3组大鼠编号112在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄12个随机数字。每个数分别用3除，记录余数，根据余数分组大鼠编号：1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12随机数字：08，27，01，50，15，29，39，39，43，79，69，10余数：2，0，1，2，0，2，0，0，1，1，0，1组别：B，C，A，B，C，B，C，C，A，A，C，A A：3，9，10，12 B；1，4，6 C：2，5，7，8，11调整分组：接刚才随机数字10继续抄表得随机数字61，用61除以5（因为需要把C组的5个数字调整掉一个），得余数1，所以把C组的第1个动物，即2号动物调整到B组。最终分组 A：3，9，10，12 B；1，2，4，6 C：5，7，8，11七、去毛七、去毛1、剪毛：弯头剪毛剪。2、拔毛：大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射。3、剃毛：将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸温肥皂水润湿，用剃刀顺着被毛方向剃毛，用电动剃毛推剪，则逆被毛向剃毛。4、化学脱毛：常用脱毛剂8%硫化钠水溶液硫化钠3份，洗衣粉1份、淀粉7份，加水调成糊状硫化钡50克，氧化锌25克，淀粉25克，加水100毫升调成糊状硫化钠10克，生石灰15克，加水到100毫升，适合犬和其他大动物。八、给药途径与方法八、给药途径与方法（一）自动口服：加入饲料或饮水（二）投喂药片：掰开口，放到舌根部（三）灌胃（三）灌胃（i.g)1、小鼠、大鼠、豚鼠、小鼠、大鼠、豚鼠灌胃时将灌胃针按在注射器上，吸入药液。左手抓住鼠背部及颈部皮肤将动物固定，右手持注射器，将灌胃针插入动物口中，沿咽后壁徐徐插入食道。动物应固定成垂直体位，针插入时应无阻力。若感到阻力或动物挣扎时，应立即停止进针或将针拔出，以兔损伤或穿破食道以及误入气管。一般当灌胃针插入小鼠34cm，大鼠或豚鼠46cm后可将药物注入。常用的灌胃量小鼠为0.21ml，大鼠14ml，豚鼠为15ml。2、狗、兔、猫、猴、狗、兔、猫、猴灌胃时，先将动物固定，再将特制的扩口器放入动物口中，扩口器之宽度可视动物口腔大小而定，如狗的扩口器可用木料制成长方形，长约1015cm，粗细应适合狗嘴，约23cm，中间粘一小孔，孔的直途为510cm。灌胃时将扩口器放于上述动物上下门牙之后，并用绳将它固定于嘴部，将带有弹性的橡皮导管（如导尿管），经扩口器上的小圆孔插入，沿咽后壁而进入食道，此时应检查导管是否正确插入食道，可将导管外口置于一盛水的烧杯中，如不发生气泡，即认为此导管是在食道中，未误入气管，即可将药液灌入。灌胃管插入长度狗为20cm，兔子为12-15cm。动物最大灌胃量动物最大灌胃量 （四）直肠给药（五）呼吸道给药（六）滴鼻（七）点眼（八）经皮肤给药：常用于检测药物、毒物、化妆品等的透皮吸收、局部作用、至敏作用等。家兔和豚鼠选择脊柱两侧皮肤，大小鼠常采取浸尾方式。（九）皮内注射(i.d)：一般用于接种或过敏实验。将药液注射在真皮和表皮之间。皮内注射时需将注射的局部脱去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮肤并使之绷紧，在两指之间，用注射器连4(1/2)号细针头，紧贴皮肤表层刺入皮内，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射药液，此时可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。（十）皮下注射(s.c)：注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有5（1/2）号针头的注射器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、猫多在大腿外侧，豚鼠在后大腿的内侧或小腹部；大白鼠可在侧下腹部。兔在背部或耳根部注射。蛙可在脊背部淋巴腔注射。（十一）肌肉注射(i.m)：股部肌肉（十二）腹腔注射(i.p)：用大、小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推0.51.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液，为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。若实验动物为家兔，进针部位为下腹部的腹白线离开1cm处。（十三）静脉注射（十三）静脉注射(i.v)：1、小鼠：尾静脉、小鼠：尾静脉2、大鼠：尾静脉、大鼠：尾静脉、阴茎静脉、阴茎静脉、舌下静脉、舌下静脉、浅背侧跖静脉浅背侧跖静脉大小鼠有上、左、右3根尾静脉，成品字型 小鼠尾静脉注射大鼠阴茎静脉注射大鼠阴茎静脉注射大鼠舌下静脉注射大鼠舌下静脉注射大鼠浅背侧跖静脉注射大鼠浅背侧跖静脉注射3、豚鼠：浅背侧跖静脉、耳静脉注射4、家兔：耳静脉注射5、猪：耳缘静脉6、猴：前肢桡静脉、后肢隐静脉注射猪耳缘静脉注射7、猫、狗：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉注射狗狗前前肢肢内内侧侧头头静静脉脉狗狗后后肢肢外外侧侧小小隐隐静静脉脉猴的后肢皮下静脉注射猴的后肢皮下静脉注射（十四）脑腔注射：（十四）脑腔注射：1、小鼠、小鼠 小指夹鼠尾，拇指和是指置小鼠头两侧固定，中指和无名指压住鼠身，在注射处消毒后，右手持注射器，以食指固定针芯，垂直刺入针头深度约57mm。2、兔、兔 将兔用固定器固定好，剃去头顶的被毛，左手将头皮绷紧，消毒后，右手持锥子，自头顶正中稍偏一侧部位，锥穿头骨，即换以左手固定锥子，右手持注射器，使针头沿锥尖刺入，慢慢拔出锥子，即刻将针头刺入约1020mm，即可推液。（十五）（十五）关节腔注射：（十六）（十六）椎管内注射：注射入蛛网膜下腔（十七）（十七）淋巴囊内注射：蛙和蟾蜍（十八）小脑延髓池注射：（十八）小脑延髓池注射：几种动物不同给药途径的常用注射量（毫升）几种动物不同给药途径的常用注射量（毫升）注射途径小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.21.0 1325510515肌肉0.10.2 0.20.5 0.20.5 0.5125静脉0.20.5 1215310515皮下0.10.5 0.510.5213310九、采血方法九、采血方法（一）大、小鼠：（一）大、小鼠：1、眶静脉丛（窦）：少量多次采大小鼠血。小鼠0.20.3ml，大鼠0.40.6ml2、摘眼球：用于一次大量采小鼠血，可得到45体重的血量3、尾静脉：用于少量多次采大小鼠血尾静脉采血尾静脉采血4、剪头：用于一次性大量采小鼠血，可得到0.51.0ml的血量5、大血管：包括颈动脉（静脉），股动脉（静脉），腋下动脉（静脉），腹主动脉，此方法不常用于小鼠采血，而多用于大鼠一次性大量采血。可得5ml左右血量。6、心脏采血：小鼠少用，可用于大鼠一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。心脏采血心脏采血（二）家兔（二）家兔：1、耳缘静脉：中等血量的采集，可反复采血，每次510ml。2、耳中央动脉：可反复采血，每次1015ml。3、心脏采血：可用于 一次性（开胸）或 多次采血（不开胸）。一次性开胸采血可 得到80100ml血量4、颈动静脉采血：用于一次性采血，需要手术，可得血量8010ml。（三）（三）豚鼠：1、心脏采血：可用于一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。一次性开胸采血可得到510ml血量。2、背跖静脉采血：用于少量反复采血。3、耳缘剪口采血（四）犬猫：和静脉注射部位相同，前肢（四）犬猫：和静脉注射部位相同，前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉。也可颈内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉。也可颈静脉（动脉）或心脏采血。静脉（动脉）或心脏采血。（五）（五）猪：前腔静脉或耳大静脉采血（六）（六）羊：颈静脉采血（七）（七）猴：前肢头静脉、后肢皮下静脉或耳缘静脉等。（八）（八）禽类：翼下静脉仔猪前腔静脉采血仔猪前腔静脉采血 采血注意事项采血注意事项（一一）采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在2528，冬季，1520为宜；（二）（二）采血用具有采用部位一般需要进行消毒；（三）（三）采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；（四四）若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。（五）（五）注意不同动物的采血量采血。部位 动物种类尾静脉大鼠、小鼠耳静脉兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊眼底静脉丛兔、大鼠、小鼠d舌下静脉兔e腹壁静脉青蛙、蟾蜍f冠、脚蹼皮下静脉 鸡、鸭、鹅、取少量血、取中量血部位 动物种类后肢外侧皮下小隐静脉狗、猴、猫前肢内侧皮下头静脉狗、猴、猫耳中央动脉兔颈静脉狗、猫、兔心脏豚鼠、大鼠、小鼠断头大鼠、小鼠翼下静脉鸡、鸭、鸽、鹅颈动脉鸡、鸭、鸽、鹅、取大量血部位 动物种类股动脉、颈动脉狗、猴、猫、兔心脏狗、猴、猫、兔颈静脉马、牛、山羊、绵羊摘眼球大鼠、小鼠4、最大安全采血量与最小致死采血量动物种类最大安全采血量(ml)最小致死采血量(ml)小鼠0.20.3大鼠12豚鼠510兔1040狼狗100500猎狗50200猴1560常用抗凝剂：常用抗凝剂：1、肝素：抑制凝血酶活力，阻止血小板凝集。纯品肝素1mg125U，10U20U抗1ml血凝集，但通常应用23倍剂量。用法：可配成1%肝素溶液，用时取0.1ml于试管内，100烘干，每管可抗凝510ml血。或用1%肝素溶液湿润采血注射器。肝素可改变蛋白质等电点，当用盐析法分离蛋白作分类测定时，不可用肝素抗凝。2、枸橼酸钠：使凝血必需的钙离子失活。常用35%水溶液，碱性较强。3、草酸盐合剂：草酸铵1.2g，草酸钾0.8g，福尔马林1.0ml，加蒸馏水至100ml。使凝血必需的钙离子失活。每毫升血加草酸盐合剂0.1ml。4、氟化钠：每毫升血加6mg。十、其他体液采集十、其他体液采集1、胸水、腹水采集：穿刺2、消化液采集：唾液，胃液，胰液，胆汁3、精液采集：中、大动物用假阴道，小动物穿刺附睾来采集精液。4、脑脊液采集：手术或小脑延髓池抽取5、骨髓采集：大动物活体穿刺，小动物处死后取股骨或胸骨骨髓。6、尿液采集：v代谢笼收集v导尿管采集v膀胱穿刺v压迫排尿十一、麻醉方法（一）（一）麻醉方法：1、全麻 吸入麻醉，静脉注射、腹腔注射。2、局麻 浸润麻醉。根据手术，按皮下、筋膜、肌肉、腹膜、骨膜等顺序逐步深入注射到术野周围。（二）（二）麻醉前准备：1、禁食812h，防止呕吐，可饮水。2、根据实验部位和种类，给动物脱毛。3、犬、猪、猴等大动物可在麻醉前给予一些药物以减少动物紧张，减少支气管分泌。（1）阿托品：减少支气管和唾液腺分泌，防止气管阻塞。副作用：加快心率。用量：肌肉或皮下注射0.04mg/kg（2）安定：产生镇静作用，加强麻醉效果，使骨骼肌松弛。用量：2.55mg/kg（3）吗啡：产生镇静作用。副作用：抑制呼吸中枢。用量：皮下注射12mg/kg，肌肉注射1020mg/kg。（三）麻醉药物：（三）麻醉药物：1、全麻药物（1）乙醚：强挥发性、易燃。乙醚是最常用的吸入麻醉剂，各种动物适用。机制：抑制中枢神经系统。特点：安全范围大，肌肉完全松弛，对肝肾毒性小，麻醉诱导期和苏醒期较长。副作用：局部刺激大，引起上呼吸道黏膜分泌增加，导致呼吸道阻塞，可用阿托品对抗解救。（2）巴比妥类：种类很多，有巴比妥钠，戊巴比妥钠，硫喷妥那，苯巴比妥钠等。适用于各种动物。如实验中大小鼠常用3戊巴比妥钠溶液腹腔注射进行麻醉。特点：安全范围广，毒性小，麻醉潜伏期短，麻醉维持时间长。可腹腔或静脉给药。机理：阻断神经冲动传递到大脑。副作用：过量使用可导致呼吸肌麻痹而死亡，同时抑制末梢循环，导致血压降低，并影响基础代谢，导致体温降低。（3）氯胺酮：常用其盐酸盐。特点：麻醉潜伏期短，麻醉维持期仅1020min，麻醉浅，安全性高，可重复给药。机制：阻断大脑联络途径。副作用：兴奋心血管系统，使血压升高，心率加快，偶尔引起呕吐。（4）水合氯醛：作用特点和巴比妥类相似。但安全范围小，麻醉剂量和中毒剂量接近，对皮肤和黏膜有较强刺激。2、局麻药物（1）普鲁卡因：是无刺激性的局麻药物。特点：麻醉速度快，注射后13分钟就可产生麻醉。可以维持3045分钟。对皮肤和黏膜穿透力很弱，需要注射给药才能产生局麻效果。它可以使血管舒张，易被吸收入血液而失去效果。在其溶液中加入肾上腺素（每100ml加入0.1%肾上腺素0.20.5ml）可以使麻醉时间延长12小时。（2）利多卡因：效力和穿透力比普鲁卡因强。（3）的卡因：化学结构和普鲁卡因类似，效力和穿透力比普鲁卡因强。（四）实验动物的急救（四）实验动物的急救 动物实验过程中，可因麻醉药过量、出血过多、分泌物或血块堵塞气管造成窒息以及某种药物原因引起动物血压、呼吸不规则等现象，此时应立即进行急救处理措施。急救处理措施首先要迅速排查原因，并中断诱因（如止血、停药、排除分泌物等），然后对症实施急救措施。1、呼吸、心跳（血压）的改变 动物实验过程中，需密切观察实验动物的呼吸、心跳及血压的变化，一者它们是实验反应的数据指标，二者是实验动物状态的主要指征。尤其对呼吸的观察，因为动物的死亡首先是呼吸的停止。（1）诱发原因 麻醉给药速度过快或过量：实施静脉给药麻醉，可因给药速度过快或过量导致呼吸停止。因此，为防止麻醉剂过量，注射速度一定不要过快，严密观察动物状况，若需追加麻醉剂，一次不宜超过总量的1/5。气道不畅或堵塞：常见于麻醉后，因为气管分泌物增多或气管切口的出血凝块堵塞气管，动物呼吸不规则、呼吸困难甚至引起的窒息。大失血：如因大动脉插管的松脱所造成的大失血。实验药物的作用：如静脉注射乙酰胆碱过量或动物对其反应过强，引起心搏减弱减慢，继而出现呼吸、心跳的停止。2、急救措施 （1）迅速排查、中断、排除诱因。如应用棉签清除干净气管、气管插管内的分泌物及血凝块。必要时拔出气管插管冲洗后再行气管插管术。（2）根据下列不同情况采取相应的急救措施：呼吸极慢、不规则，但心跳正常时：给予人工呼吸-压胸法，适当给予苏醒剂。呼吸停止仍有心跳时：实施人工呼吸，必要时可使用人工呼吸机或吸氧（吸入气中O2占95%，CO2占5）；注射50葡萄糖液510ml；给肾上腺素及苏醒剂。呼吸、心跳均停止时：用l：10000肾上腺素溶液心内注射，其余同。3、大失血 （1）诱发原因 多因动脉插管结扎不牢、动物挣扎，导致大动脉插管的松脱，或在进行动脉插管术时，因未放置动脉夹或动脉夹夹闭不全而剪切动脉引起。（2）急救措施 立即止血：应迅速手指压迫或捏住出血处（尽量不要用止血钳，以防损伤动脉和神经），然后仔细检查分离出血点，于近心端放置动脉夹，再行动脉插管术。补充血容量：若失血太多，适当加快输液(生理盐水)速度，增加血容量。注射强心剂：静脉注射110000肾上腺素0.5ml。十二、处死方法十二、处死方法1、颈椎脱臼法：小鼠、大鼠2、空气栓塞法：兔、猫、犬等大动物3、放血法：心脏放血或大血管放血4、断头法：小鼠、大鼠5、吸入二氧化碳6、麻醉法：如注射巴比妥类药物十三、十三、动物病理检查动物病理检查（一）一般病理检查（一）一般病理检查1、实验动物不明原因死亡或实验需要时必须进行尸检以查明死亡原因。2、对动物进行尸检应该在动物死亡后立即进行，不能立即进行的需在冷冻的条件下保存动物尸体，以尽量保持病变与死亡前状态一致。3、外观检查：检查动物的发育状况、营养状况、精神状态、感觉器官、呼吸系统、消化系统、皮肤及被毛等指标。4、病理剖检：主要观察组织器官的大小、色泽、质地、切面和粘膜等指标。（二）组织病理学检查（二）组织病理学检查1、取材：按要求切取相应的组织器官，并用固定液进行固定。2、制片：按程序将切取的组织器官制作成组织切片。3、读片：在显微镜下观察动物的心、肝、脾、肺、肾、脑等重点器官。尸体需要做无害化处理：高压、焚烧、深埋等。