单克隆抗体的制备 .ppt

2.2.2单克隆抗体单克隆抗体1、简述单克隆抗体制备的过程。、简述单克隆抗体制备的过程。2、了解单克隆抗体在医学实践中的应用。、了解单克隆抗体在医学实践中的应用。【学习目标学习目标】什么是抗体？抗体是怎什么是抗体？抗体是怎么产生的？么产生的？抗体是机体受抗原刺激后抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。的球蛋白。知识回顾知识回顾（一）获得抗体的传统方法（血清抗体）（一）获得抗体的传统方法（血清抗体）1 1、把某种抗原反复注射到动物体内，使动、把某种抗原反复注射到动物体内，使动物产生抗体，然后，从物产生抗体，然后，从动物血清动物血清中分离出所中分离出所需的抗体。需的抗体。2 2、血清抗体的缺点：、血清抗体的缺点：产量低，纯度低，产量低，纯度低，特异性差特异性差。为了解决血清抗体产量低、纯度低，特异性差这一难为了解决血清抗体产量低、纯度低，特异性差这一难题，科学家们进行了多年的研究和探索。他们发现，题，科学家们进行了多年的研究和探索。他们发现，哺乳动物感染病原体后，体内会形成相应的哺乳动物感染病原体后，体内会形成相应的B B淋巴细淋巴细胞。胞。B B淋巴细胞能分泌抗体，凝集或杀死这些病原体。淋巴细胞能分泌抗体，凝集或杀死这些病原体。动物在免疫反应的过程中，体内产生的特异性抗体的动物在免疫反应的过程中，体内产生的特异性抗体的种类可多达百万种以上，但是每一个种类可多达百万种以上，但是每一个B B细胞只分泌一细胞只分泌一种特异性抗体。种特异性抗体。所以，要想获得大量的单一抗体，必须克隆单所以，要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的一的B淋巴细胞，形成细胞群。淋巴细胞，形成细胞群。1、B淋巴细胞是一种高度分化的细胞，有没有可能淋巴细胞是一种高度分化的细胞，有没有可能通过细胞培养进行无限增殖？通过细胞培养进行无限增殖？不可能不可能2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？、我们学过的什么细胞具有这样的能力？癌细胞癌细胞3、有什么办法让、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？淋巴细胞也具有这样的能力？细胞融合细胞融合用用单个单个B B淋巴细胞淋巴细胞进行（无性繁殖）克隆，进行（无性繁殖）克隆，得到的得到的基因型相同基因型相同的的细胞群能够分泌一种细胞群能够分泌一种化化学性质单一学性质单一、特异性强特异性强的抗体。的抗体。单克隆抗单克隆抗体的概念：体的概念：（二）单克隆抗体的制备过程（二）单克隆抗体的制备过程创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦柯勒柯勒柯勒柯勒1975年设计实验年设计实验1984年获得诺贝尔生理年获得诺贝尔生理学和医学奖学和医学奖 单单克克隆隆抗抗体体的的制制备备例题例题1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A A、经过免疫的、经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B B、不经过免疫的、不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 C C、经过免疫的、经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D D、不经过免疫的、不经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞2.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身淋巴细胞自身融融 合细胞合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A B C D 1.1.在制备单克隆抗体的过程中，选用在制备单克隆抗体的过程中，选用哪两种细胞进行融合？为什么选择这哪两种细胞进行融合？为什么选择这两种细胞？两种细胞？浆细胞和骨髓瘤细胞浆细胞和骨髓瘤细胞浆细胞能产生浆细胞能产生单一抗体单一抗体，但不能无限，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖能无限增殖，但不，但不能产生单一抗体。能产生单一抗体。2 2、在这过程中进行了几次筛选？分、在这过程中进行了几次筛选？分别在哪个步骤进行筛选？别在哪个步骤进行筛选？两次筛选。第一次在两次筛选。第一次在B细胞和骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞；细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞；第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。所需抗体的杂交瘤细胞。3 3、单克隆抗体具有哪些优点？、单克隆抗体具有哪些优点？特异性强，灵敏度高，可大量制备特异性强，灵敏度高，可大量制备3 3、动物细胞融合的目的中最重要的是（、动物细胞融合的目的中最重要的是（）A A、克服远缘杂交不亲和、克服远缘杂交不亲和 B B、制备单克隆抗体、制备单克隆抗体C C、培育新物种、培育新物种 D D、生产杂种细胞、生产杂种细胞（三）单克隆抗体的应用（三）单克隆抗体的应用1、作为诊断试剂作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比与常规抗体相比,具有具有准确、高效、准确、高效、简易、快速简易、快速特点特点.用用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体抗体做成的做成的“早早孕诊断试剂盒早早孕诊断试剂盒”，灵敏度很高。在妊娠第，灵敏度很高。在妊娠第8天天就可以做出诊断。比原来的诊断就可以做出诊断。比原来的诊断方法提前了方法提前了10天左右，可以避免天左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在该方法检测的准确率在90%以上。以上。2、用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物：主要用于癌症治疗。主要用于癌症治疗。生物导弹：生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体抗癌细胞的单克隆抗体+放射性放射性同位素同位素+化学药物或细胞毒素化学药物或细胞毒素。（单克隆抗。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）癌细胞。）4 4、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（）A A利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞 B B以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C C抗癌物质在克隆细胞中大量合成抗癌物质在克隆细胞中大量合成D D单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合结合5 5只能使动物细胞融合的常用诱导方法（只能使动物细胞融合的常用诱导方法（）A APEGPEG B B灭活的病毒灭活的病毒 C C电刺激电刺激 D D离心离心6 6、“生物导弹生物导弹”是指是指 （）A.A.单克隆抗体单克隆抗体 B.B.杂交瘤细胞杂交瘤细胞 C.C.产生特定抗体的产生特定抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞 D.D.在单在单克隆抗体克隆抗体上连接抗癌药物上连接抗癌药物过程：过程：抗原抗原小鼠小鼠效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞多种杂交瘤细胞多种杂交瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选多孔培养板多孔培养板单个细胞培养，筛选单个细胞培养，筛选能产生特定抗体的能产生特定抗体的细胞群细胞群体外培养体外培养 体内培养体内培养提取出单克隆抗体提取出单克隆抗体小结：小结：谢谢谢谢