免疫学应用 .ppt

第七章第七章免疫学应用免疫学应用主主 要要 内内 容容o免疫学防治免疫学防治o免疫学诊断免疫学诊断o移植免疫移植免疫一、免疫预防一、免疫预防o自然免疫自然免疫 自动免疫：患传染病，隐形感染自动免疫：患传染病，隐形感染 被动免疫：胎盘、乳汁被动免疫：胎盘、乳汁o人工免疫人工免疫 主动免疫：疫苗、类毒素主动免疫：疫苗、类毒素 被动免疫：抗毒素、丙种球蛋白被动免疫：抗毒素、丙种球蛋白 免疫学防治免疫学防治（一）人工主动免疫（一）人工主动免疫1 1、概念：概念：是给机体输入疫苗或类毒素等抗原物质，是给机体输入疫苗或类毒素等抗原物质，刺激机体产生特异性免疫应答而获得免疫力刺激机体产生特异性免疫应答而获得免疫力的方法，也称预防接种。的方法，也称预防接种。o灭活疫苗（死疫苗）灭活疫苗（死疫苗）是选用免疫原性强的病是选用免疫原性强的病原体，经人工培养后，用理化方法灭活而制原体，经人工培养后，用理化方法灭活而制成的制剂。成的制剂。疫苗疫苗：伤寒、乙型脑炎、百日咳、霍乱、狂：伤寒、乙型脑炎、百日咳、霍乱、狂犬病疫苗犬病疫苗2 2、常用人工主动免疫制剂常用人工主动免疫制剂o减毒活疫苗减毒活疫苗 是用减毒或无毒的活病原微生是用减毒或无毒的活病原微生物制成的制剂。物制成的制剂。疫苗疫苗：卡介苗、麻疹、风疹、脊髓灰质炎疫：卡介苗、麻疹、风疹、脊髓灰质炎疫苗苗 死疫苗与活疫苗的特点比较死疫苗与活疫苗的特点比较区别要点区别要点 死疫苗死疫苗 活疫苗活疫苗制剂特点制剂特点 灭活，强毒株灭活，强毒株 活，弱毒或无毒株活，弱毒或无毒株接种量及次数接种量及次数 量较大，量较大，23次次 量较小，多为量较小，多为1次次免疫效果免疫效果 较差，较差，较好，较好，维持数月维持数月-2年年 维持维持35年或更长年或更长保存及有效期保存及有效期 易保存，易保存，不易保存不易保存 有效期约有效期约1年年 4冰箱内数周冰箱内数周接种方式接种方式 多为皮下注射多为皮下注射 多模拟自然感染途径多模拟自然感染途径副作用副作用 较大较大 较小较小o类毒素类毒素 是用细菌的外毒素经是用细菌的外毒素经0.3%0.4%甲甲醛处理后，其毒性消失但保留免疫原性故称醛处理后，其毒性消失但保留免疫原性故称为类毒素。为类毒素。如如：白喉、破伤风类毒素：白喉、破伤风类毒素o新型疫苗新型疫苗n亚单位疫苗亚单位疫苗 去除病原体中与激发保护性免去除病原体中与激发保护性免疫无关甚至有害的成分，保留有效成分制备疫无关甚至有害的成分，保留有效成分制备的疫苗。的疫苗。疫苗疫苗：HBV：血源：血源HBSAg 百日咳杆菌：丝状血凝素（百日咳杆菌：丝状血凝素（FHA）n合成肽疫苗合成肽疫苗 根据有效免疫原的根据有效免疫原的AA序列，序列，设计和合成的免疫原性多肽。（连接载体）设计和合成的免疫原性多肽。（连接载体）n结合疫苗结合疫苗 荚膜多糖成分连接类毒素制成的荚膜多糖成分连接类毒素制成的疫苗。（疫苗。（TI-Ag转变成转变成TD-Ag）n基因工程疫苗基因工程疫苗 重组抗原疫苗重组抗原疫苗 只含保护性抗原的纯化疫苗。只含保护性抗原的纯化疫苗。优点：不含活的病原体和病毒核酸，优点：不含活的病原体和病毒核酸，安全有效、成本低廉安全有效、成本低廉 疫苗：重组乙肝病毒表面抗原疫苗、疫苗：重组乙肝病毒表面抗原疫苗、口蹄疫疫苗口蹄疫疫苗 重组载体疫苗重组载体疫苗 将编码病原体有效免疫原的基因插入载体将编码病原体有效免疫原的基因插入载体（减毒的病毒或细菌疫苗株）基因组中。（减毒的病毒或细菌疫苗株）基因组中。如：痘苗病毒如：痘苗病毒载体载体DNADNA疫苗疫苗 用编码病原体有效免疫原的基因与细用编码病原体有效免疫原的基因与细菌质粒构建成重组体。（菌质粒构建成重组体。（发展方向发展方向）优点优点:可持续表达，维持时间长，效果好可持续表达，维持时间长，效果好转基因植物疫苗转基因植物疫苗 目的基因导入食用植物细胞基目的基因导入食用植物细胞基因中，食用接种。因中，食用接种。流脑流脑A乙脑（减毒）乙脑（减毒）,麻风麻风9个月个月 流脑流脑A麻疹麻疹,麻腮风麻腮风乙脑乙脑3岁岁 流脑流脑A+C（二）人工被动免疫（二）人工被动免疫o概念：概念：是给人体注射含特异性是给人体注射含特异性抗体或细胞因子抗体或细胞因子的制剂，使机体获得特异性免疫力，以治疗的制剂，使机体获得特异性免疫力，以治疗或紧急预防疾病的措施。或紧急预防疾病的措施。2 常用人工被动免疫制剂常用人工被动免疫制剂o抗毒素抗毒素 用细菌外毒素或类毒素免疫动物用细菌外毒素或类毒素免疫动物制备的免疫血清，具有中和外毒素毒性的作制备的免疫血清，具有中和外毒素毒性的作用。用。如：破伤风、白喉抗毒素如：破伤风、白喉抗毒素2 常用人工被动免疫制剂常用人工被动免疫制剂o人免疫球蛋白制剂人免疫球蛋白制剂 从正常人从正常人血浆血浆或健康或健康产妇的产妇的胎盘血胎盘血中分离制成的免疫球蛋白浓缩中分离制成的免疫球蛋白浓缩剂（人血浆丙种球蛋白和胎盘丙种球蛋白）。剂（人血浆丙种球蛋白和胎盘丙种球蛋白）。肌注：肌注：HAV、HCV、麻疹、脊髓灰质炎、麻疹、脊髓灰质炎 静注：免疫缺陷病静注：免疫缺陷病pCKCK与单克隆抗体与单克隆抗体 抗肿瘤、抗感染、自身免抗肿瘤、抗感染、自身免疫性疾病治疗疫性疾病治疗 如：口服如：口服CK：肿瘤坏死因子诱导蛋白肿瘤坏死因子诱导蛋白 粒粒-巨集落因子及胸腺素巨集落因子及胸腺素 哈铂蛋白哈铂蛋白59591-4主主(疫苗、类毒素疫苗、类毒素)（抗毒素、（抗毒素、丙种球蛋白）丙种球蛋白）二、免疫治疗二、免疫治疗（一）（一）治疗性疫苗治疗性疫苗 1、微生物抗原疫苗、微生物抗原疫苗 2、细胞疫苗、细胞疫苗 3、分子疫苗、分子疫苗 （二）（二）抗体抗体 1、多克隆抗体、多克隆抗体 2、单克隆抗体和基因工程抗体、单克隆抗体和基因工程抗体（三）细胞因子（三）细胞因子（四）过继免疫治疗和造血干细胞移植（四）过继免疫治疗和造血干细胞移植 过继免疫治疗：过继免疫治疗：供者免疫效应物质转移给其他个体供者免疫效应物质转移给其他个体 自体细胞经体外处理后输回自身自体细胞经体外处理后输回自身 造血干细胞移植：造血干细胞移植：患者自身患者自身HSC移植移植 健康人的健康人的HSC移植移植（五）生物应答调节剂和免疫抑制剂（五）生物应答调节剂和免疫抑制剂 免疫学诊断免疫学诊断一、检测抗原或抗体的体外实验一、检测抗原或抗体的体外实验(一一)检测的原理检测的原理 1.已知抗体测抗原（多用于定性）已知抗体测抗原（多用于定性）2.已知抗原测抗体（多用于定量）已知抗原测抗体（多用于定量）(二二)抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的特点 特异性、可逆性、可见性特异性、可逆性、可见性(三三)抗原抗体反应的影响因素抗原抗体反应的影响因素o电解质：常用生理盐水电解质：常用生理盐水o温度：温度：最适温度为最适温度为37opHpH：最适：最适pH6pH6 8 8（四）常用抗原和抗体检测方法（四）常用抗原和抗体检测方法1.1.凝集反应凝集反应p概念：细菌、细胞等颗粒性抗原与相应抗体概念：细菌、细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集团块称凝集反应。结合后形成凝集团块称凝集反应。p分类分类 直接凝集反应直接凝集反应 间接凝集反应间接凝集反应 （间接凝集抑制试验）（间接凝集抑制试验）直接凝集反应原理直接凝集反应原理间接凝集反应原理间接凝集反应原理间接凝集抑制反应原理间接凝集抑制反应原理2.沉淀反应沉淀反应o概念：可溶性抗原与相应抗体结合后出现肉概念：可溶性抗原与相应抗体结合后出现肉 眼可见的沉淀物。眼可见的沉淀物。o分类分类 单向琼脂扩散单向琼脂扩散 双向琼脂扩散双向琼脂扩散 对流免疫电泳对流免疫电泳 单向琼脂扩散试验单向琼脂扩散试验 双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验 对流免疫电泳对流免疫电泳3.免疫标记技术免疫标记技术o概念概念：用荧光素、酶、放射性核素、胶体金、：用荧光素、酶、放射性核素、胶体金、化学发光物质等标记抗体或抗原用以测定相化学发光物质等标记抗体或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术称为免疫标记技术。应抗原或抗体的技术称为免疫标记技术。o特点特点：敏感、特异、快速，能定性、定量、：敏感、特异、快速，能定性、定量、定位。定位。o常用免疫标记技术常用免疫标记技术：酶免疫测定酶免疫测定 免疫荧光技术免疫荧光技术 免疫胶体金技术免疫胶体金技术 放射免疫测定法放射免疫测定法 免疫印迹技术免疫印迹技术o酶免疫测定酶免疫测定 酶联免疫吸附实验酶联免疫吸附实验（ELISAELISA）即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。判断结果。方法方法：双抗体夹心法（检测大分子抗原）：双抗体夹心法（检测大分子抗原）间接法（测定特异抗体）间接法（测定特异抗体）酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法间接法)免疫荧光技术免疫荧光技术斑点金免疫层析实验检测尿中的绒毛膜促性腺激素斑点金免疫层析实验检测尿中的绒毛膜促性腺激素（HCGHCG）免疫胶体金技术免疫胶体金技术放射免疫测定法（放射免疫测定法（RIA）p概念：是将放射性核素分析的灵敏性和抗原概念：是将放射性核素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合的测定技术。抗体反应的特异性结合的测定技术。p特点：灵敏、精确、特异性高、易规范化、特点：灵敏、精确、特异性高、易规范化、自动化自动化免疫印迹技术免疫印迹技术o概念：将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析概念：将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。技术相结合的杂交技术。o特点：分析容量大、敏感度高、特异性强特点：分析容量大、敏感度高、特异性强二、免疫细胞的测定二、免疫细胞的测定（一）免疫细胞分离及数量检测（一）免疫细胞分离及数量检测1、外周血单个核细胞的分离、外周血单个核细胞的分离 方法：葡聚糖方法：葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法泛影葡胺密度梯度离心法 PBMCPBMC：淋巴细胞和单核细胞淋巴细胞和单核细胞 抗抗凝凝血血 分层液分层液 抗凝血抗凝血血浆血浆PBMC 红细胞红细胞离心离心单个核细胞的分离单个核细胞的分离2 2、淋巴细胞及其亚群的分离、淋巴细胞及其亚群的分离（1）E E玫瑰花环试验：玫瑰花环试验：正常情况下，外周血淋巴细胞中能形成花环正常情况下，外周血淋巴细胞中能形成花环的细胞（的细胞（即即T T细胞）约细胞）约60%-80%60%-80%。T细胞亚群的检测细胞亚群的检测花环法（一）花环法（一）T细胞亚群的检测细胞亚群的检测花环法（二）花环法（二）外周血外周血 单个核细胞单个核细胞 鼠抗人鼠抗人CD3CD3单抗单抗 CD4CD4T T细胞数细胞数鼠抗人鼠抗人CD4CD4单抗单抗 CD8CD8T T细胞数细胞数总总T T细胞数细胞数 鼠抗人鼠抗人CD8CD8单抗单抗兔抗鼠荧光抗体兔抗鼠荧光抗体 兔抗鼠荧光抗体兔抗鼠荧光抗体 兔抗鼠荧光抗体兔抗鼠荧光抗体 606080%80%555560%60%202030%30%正常值：正常值：CD4CD4T/CD8T/CD8T T 比值比值=2:1 2:1（2）免疫荧光法）免疫荧光法T细胞总数及亚群检测细胞总数及亚群检测T T总数的检测总数的检测o从外周血分离单个核细胞（从外周血分离单个核细胞（PBMCPBMC）后，用鼠）后，用鼠抗人抗人CD3CD3的单克隆抗体作第一抗体与的单克隆抗体作第一抗体与PBMCPBMC结结合，再用荧光素（合，再用荧光素（FITCFITC）标记的兔抗鼠）标记的兔抗鼠IgGIgG抗体作第二抗体进行间接荧光染色。抗体作第二抗体进行间接荧光染色。T T细胞亚群测定细胞亚群测定 用间接荧光法检测用间接荧光法检测CD4TCD4T和和CD8TCD8T细胞细胞CD4/CD8CD4/CD8正常比值为正常比值为1.7-2.01.7-2.0左右。左右。（3 3）免疫磁珠分离法）免疫磁珠分离法（4 4）流式细胞术）流式细胞术（二）免疫细胞功能测定（二）免疫细胞功能测定1.T1.T细胞功能测定细胞功能测定（1 1）淋巴细胞转化试验：）淋巴细胞转化试验：p形形态态学学检检测测法法：用用PHA(PHA(植植物物血血凝凝素素)刺刺激激体体外外培培养养的的T T细细胞胞，使使T T细细胞胞增增殖殖，向向淋淋巴巴母母细细胞胞转化。计算转化率。转化。计算转化率。o同位素标记法：外周血单个核细胞中加同位素标记法：外周血单个核细胞中加PHAPHA共同培养，终止前共同培养，终止前8-158-15小时，加入氚标记的小时，加入氚标记的胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷3 3H-TdRH-TdR，用液体闪烁仪测定，用液体闪烁仪测定射线放射活性，确定细胞增值水平。射线放射活性，确定细胞增值水平。（2 2）皮肤实验）皮肤实验2 2、B B细胞功能测定细胞功能测定（1）B细胞增殖实验细胞增殖实验（2）抗体形成细胞测定）抗体形成细胞测定（溶血空斑实验）（溶血空斑实验）将绵羊红细胞（将绵羊红细胞（SRBC）免疫过的小鼠的）免疫过的小鼠的脾淋巴细胞（含抗脾淋巴细胞（含抗SRBC抗体）与抗体）与SRBC混混合，在补体参与下，结合有抗体的合，在补体参与下，结合有抗体的SRBC溶溶解，形成肉眼可见的圆形透明的溶血空斑。解，形成肉眼可见的圆形透明的溶血空斑。每个空斑表示一个抗体形成细胞。每个空斑表示一个抗体形成细胞。3 3、细胞毒试验、细胞毒试验o同位素同位素5151Cr(Cr(铬铬)释放法释放法o细胞凋亡检测法细胞凋亡检测法4 4、吞噬细胞功能测定、吞噬细胞功能测定5 5、细胞因子的检测、细胞因子的检测三、免疫学检测的应用三、免疫学检测的应用o协助诊断感染性疾病协助诊断感染性疾病o协助诊断肿瘤协助诊断肿瘤o协助诊断免疫系统疾病协助诊断免疫系统疾病o进行免疫学监测进行免疫学监测三、免疫学检测的应用三、免疫学检测的应用（一）协助诊断感染性疾病（一）协助诊断感染性疾病（三）协助诊断免疫系统疾病（三）协助诊断免疫系统疾病（四）进行免疫学监测（四）进行免疫学监测（二）协助诊断肿瘤（二）协助诊断肿瘤