辅助生殖课件 .ppt

辅助生殖技术Assisted reproductive technologyw成都市计划生育技术指所男性科 高坪常用专业术语wAssisted reproductive technology，ART 辅助生殖技术wazoospermia 无精子症wbasal body temperature，BBT 基础体温wbiological freezer 生物冷冻仪wblastocyst 囊胚wcapacitation 获能wcomputer-assisted sperm analysis，CASA 计算机辅助精子分析wcryoprotectant 冷冻保护剂wglass wool filtration 玻璃纤维过滤whuman embryo cryopreservation 人类胚胎冷冻 wHuman sperm bank 人类精子库whuman spermatozoa selection technology 人类精子优选技术wintracytoplasmic sperm injection，ICSI 精子卵浆内注射win vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET 体外受精胚胎移植wmale infertility syndrome 男性不育综合征woocyte-corona-cumulus complexes，OCCCs 卵-冠-丘复合体wpartial zona dissection，PZD 部分透明带切割法wpost-coital test，PCT 性交后试验wswim-up 上游法wzona drilling 透明带钻孔法wzygote 受精卵wzygotene 偶线期生物的两大特性w生存 w种系繁衍辅助生殖技术的主要内容：w人类精子优选技术wX和Y精子的分离技术w人工受精技术w体外受精胚胎移植技术w显微授精技术w胚胎冷冻复苏技术 一.人类精子优选技术w目的：在体外通过人工方法对精液进行处理，去除精浆及所含的有害物质，选择形态正常、活动力强的精子，病使精子在体外获能。w精液的收集及检验常用的精子优选技术w上游法wPercoll密度梯度离心法w玻璃纤维过滤法w血清白蛋白过滤法二.X和Y精子的分离w概述：目前已知约400多种遗传病是伴随X染色体的遗传病，通过X和Y精子分离技术及IVFET，可获得健康后代。例如：X连锁显性遗传病w常见病种：抗维生素D佝偻病、遗传性肾炎、先天性眼球震颤、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症等。w指导原则：（1）病残儿一、二级亲属无病时，可能是基因突变所致，再发风险低，可考虑再生育。（2）病残儿母亲患病时，每胎子女各有50%机会患病，再发风险高，不宜生育。（3）病残儿的父亲患病时，每胎女性均患病，男性则全部正常。经产前诊断可考虑生育男性胎儿。病残儿鉴定指南 wX和Y精子的差异：精子膜表面电荷，核及形态学差异，PH敏感性，Y精子的乳酸脱氢酶，H-Y抗原，精子密度，泳动速度，运动性，DNA含量差异，奎丫因荧光染色，流式细胞仪，PCR，荧光原位杂交。常用方法w上游法w白蛋白柱分离法w电泳法wSephadex G50法w密度梯度离心法w流式细胞仪分选法改良上游法w原理：Y精子在培养液（Ham,s F-10）中比X精子泳动快，密度低。白蛋白柱分离法w 原理:X和Y精子在白蛋白中泳动速度不等，Y精子速度快，穿透粘稠的白蛋白溶液能力强，在较高浓度的白蛋白溶液层中可获得更多的Y精子。电泳法w原理：精子膜表面因含大量的唾液酸而使精子带负电荷，X和Y精子表面负电荷量不等，在电场中可将其分离。Sephadex G50法w原理：X精子头部长，宽径大于Y精子；采用Sephadex G50滤过，分子筛作用可将其分离。密度梯度离心法w原理：X、Y精子在分离介质中的沉降速度不等。流式细胞仪分选法w原理：单个细胞悬液，经特异的活体细胞染色后放入样品管中，流经流动室时，仪器可对符合分选特性的细胞充电，再经高压静电场时发生偏转，进入指定的收集器。三.人工授精（artificial insemination）w概念：应用非性交的方法，将精子置入女性生殖道内，让精子与卵子自然结合，以达到妊娠的目的而实施的检测治疗措施。w（1）自体人工授精（AIH）。w（2）异体人工授精（AID）。人工授精适应证wAIH适应证：w男性w（1）正常性交时精子不能进入女性生殖道的病症w（2）精液质量异常w（3）某些免疫性不育w（4）生殖保险w女性w（1）生殖道解剖结构异常w（2）生殖道生理功能异常w（3）免疫因素 wAID适应证w（1）无精子症w（2）严重的少、弱精子症w（3）男方患有某些不便生育的遗传性疾病w（4）免疫因素人工授精时间选择w时间：女方围产卵期（排卵前日，当日，后日）w常用检测指标：1.基础体温（basal body temperature BBT）；2.宫颈黏液检测，（1）宫颈黏液拉丝实验。（2）宫颈黏液结晶实验。3.激素测定，（1）雌激素E2（2）孕酮（3）FSH、LH 4.超声检查 人工授精的实施w设备和器才w人工授精技术：（1）经阴道授精（intravaginal insemination，IVI）（2）经宫颈授精（intracervical insemination，ICI）（3）经子宫授精（intrauterine insemination，IUI）（4）经输卵管授精（intratubal insemination，ITI）（5）经腹腔授精（intraperitoneal insemination，IPI）（6）直接卵泡内授精（direct intrafollicular insemination，DIFI）四.体外授精胚胎移植in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ETw适应证w（1）输卵管性不孕w（2）子宫内膜异位症w（3）免疫性不孕w（4）宫颈因素引起的不孕w（5）某些原发性不孕 w（6）多囊卵巢综合征w（7）遗传性疾病通过选择生育防止性连锁遗传疾病w（8）女性绝育术后的再生育w（9）其他方法w成熟卵细胞的收集：1.刺激卵泡生长的方法，2.卵泡收集的时间，3.获取卵泡的方法，4.卵泡的识别与培养。w体外授精：1.精子体外获能与处理，2.影响授精率的因素，3.体外授精程序，4.分离颗粒细胞及换液，5.精子穿卵胚胎体外培养w1.胚胎的裂变w2.胚胎分级 发育时间（小时）受精卵 1620 两细胞 2426 四细胞 4448 68细胞 6472 桑葚胚 95100 囊胚 105110 致密囊胚 115120 破壳 125135移植前胚胎评分wPuissant标准评分：w4分：正常大小的裂殖细胞，没有核碎片；w3分：轻微的大小形态不均的卵裂球，少于细胞团块1/3碎片；w2分：大小形如碎片不均一的卵裂球，大于细胞团块1/3碎片；w1分：只有1或2个卵裂球，大量无核碎片；w0分：退化，完全是碎片。辅助孵化技术w辅助孵化技术（assisted hatching）是指在体外受精形成的胚胎转移到宫腔前，人为的在透明带上打孔或使透明带变薄，或是使透明带消失，帮助胚胎孵化，促进胚胎植入。方法w（一）机械法（Partial zona dissection PZD）w（二）酸化法（Acid Tyrode，s Solution AT Solution）w（三）酶消化法w（四）激光法胚胎子宫腔内移植w（1）方法w（2）移植胚胎的数目早期妊娠w1.黄体期外源性孕激素的支持。w2.早期妊娠的检测。w3.生化妊娠五.人类冷冻精子库w1.生殖保险w2.生殖保护w3.不育症治疗w4.计划生育与优育精子在冷冻过程中的几个阶段w室温+5。C温度休克阶段w+5-5。C冰晶潜热阶段w-5-15。C冰晶形成阶段w-15-80。C再结冰晶阶段w-80-196。C贮存阶段贮存方法w1.安培法w2.细管法w3.颗粒法冷冻保护剂w渗透性保护剂（permeation agents）能穿入细胞，减低细胞内的电解质，减轻冷冻、复温过程中细胞渗透性肿胀，减少冰晶形成。如：甘油、二甲亚砜、丙二醇、甲醇、葡萄糖。w非渗透性保护剂（non-permeating agents）不能进入细胞内，提高细胞外渗透压，冷冻过程中使细胞内的水分外渗，使细胞脱水皱缩减少冰晶形成，避免细胞破坏。如：蔗糖、卵黄等。影响精子贮存的因素w1.细胞内冰晶形成对精子的机械损伤w2.细胞外冰晶形成，电解质浓度增高而损伤细胞溶液效应。w3.冷冻损伤的脂质化物致广泛生物膜受损w4.精子膜受损，细胞内酶外漏w5.细胞膜上Na+、K+-ATP酶功能丧失w6.线粒体结构功能遭到破坏，ATP生成障碍w7.ATP从精子内漏入到精浆中人类胚胎的冷冻w人类胚胎的冷冻（human embryo cryopreservation）指采用特殊的技术将受精卵（zygote）或囊胚（blastocyst）冷冻保存，需要时解冻后可进行胚胎植入。应用指征w1.在IVF治疗中除去用于新鲜胚胎植入外，仍有质量良好的剩余胚胎的患者。w2.由于某些原因无法接受新鲜胚胎植入者。w3.由于某些非医学原因不能及时接受新鲜胚胎植入者。六.显微授精w简史：1978年Lans-king等首次将人精子注入卵子透明带下（subzonal sperm injection，SUZI），1988年Cohen等采用部分透明带钻孔（partial zona dissection，PZD）；1988年Lanzendort等首先报道有关将单个人精子直接注入人卵子的胞浆内（intracytoplasmic sperm injection，ICSI），及并成功受精单精子注射；1992年Palermo等最先报道第二代试管婴儿诞生。wICSI正常受精率高达64%。适应证w1.常规IVF不成功者。w2.精子数目少。w3.弱精子症，或完全缺乏活力的精子。w4.免疫性不育者。w5.阻塞性无精子症。w6.畸形精子症。w7.透明带硬化。方法w透明带钻孔法 （zona drilling，ZD）w透明带下授精 （subzonal insemination，SUZI）w卵子胞浆内单精子注射 （intracytoplasmic sperm injection，ICSI）男性科医师在辅助生殖技术（ART）中的作用w1.不育症是一个症状预示。w2.男性不育症的可复性因素。w3.ART不一定都有效。w4.男科医师应掌握的ART技术。w 人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。