生物安全实验室的检测验证全国培训班省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

AMMS生物安全试验室检测验证生物安全试验室检测验证/051第1页AMMS概概 述述l生生物物安安全全试试验验室室是是经经过过物物理理围围场场方方式式将将病病原原微微生生物物操操作作局局限限在在能能预预防防感感染染性性材材料料尤尤其其是是预预防防感感染染性性生生物物气气溶溶胶胶扩扩散散到到试试验验室室外外环环境境。为为了了确确保保病病原原微微生生物物试试验验室室在在试试验验操操作作过过程程中中产产生生含含有有病病原原微微生生物物“三三废废”（即即感感染染性性固固体体废废物物、感感染染性性液液体体废废物物和和感感染染性性空空气气）不不扩扩散散到到试试验验室室外外环环境境，经经过过各各种种物物理理和和/或或化化学学伎伎俩俩，使使排排出出试试验验室室 “三三废废”中中病病原原微微生生物物到到达达“零零排放排放”。/052第2页AMMS概概 述述l 试 验 室 生 物 安 全 通 用 要 求（GB19489）11.4条，明确要求“对于新安装生物安全柜和安全罩及其HEPA滤器安装与更换，应由有资格人员进行，安装或更换后应按照经确认方法进行现场生物和物理检测，并每年进行验证。”/053第3页AMMS概概 述述l在中华人民共和国卫生行业标准微生物和生物医学试验室生物安全通用准则（WS 233），在附录B（规范性附录）相关级生物安全柜现场检测B.5中要求，“在颁布实施我国级生物安全柜相关标准之前，进口级生物安全柜必须符合生产国对应标准，生产国无相关标准产品不得进口使用。国产级生物安全柜生产厂家必须制订对应企业标准，其性能指标不得低于国外同类产品标准。出厂时必须按企业标准对每台生物安全柜进行检测并出具检测汇报，使用微生物进行生物安全防护检测不得省略。”/054第4页AMMS概概 述述l生物安全试验室设施检测与验证，主要是排放口HEPA滤器；l生物安全试验室设备检测与验证，主要是生物安全柜和安全罩。l高压灭菌器检测验证，国家已经有相关标准和要求。/055第5页AMMS一、生物安全试验室设施检测验证一、生物安全试验室设施检测验证 l生物安全试验室设施检测对象主要：生物安全试验室设施检测对象主要：半污染区和污染区洁净度检测半污染区和污染区以及缓冲间负压值检测半污染区和污染区气流流速和流向检测HEPA滤器物理检测气密性检测验证对象主要是半污染区和污染区排风口HEPA滤器对微生物气溶胶滤除率生物学检测验证。/056第6页AMMS半污染区和污染区洁净度检测半污染区和污染区洁净度检测l检测技术方法参考洁净室施工及验收规范（JGJ 7190）。BSL3和ABSL3试验室、BSL4和ABSL4试验室半污染区和污染洁净度检测合格范围应该是空气中0.5m尘粒数35粒/m3到350粒/m3，5m尘 粒 数 2930粒/m3到29300粒/m3。/057第7页AMMS半污染区和污染区以及缓冲间负压值检半污染区和污染区以及缓冲间负压值检测测lBSL3和BSL4试验室由外向内分别是清洁区、缓冲间、半污染区、缓冲间和污染区，它们负压值分别是0Pa、10Pa、20Pa、30Pa和40Pa。lABSL3和ABSL4试验室由外向内分别是清洁区、缓冲间、半污染区、缓冲间和污染区，它们负压值分别是0Pa、10Pa、25Pa、40Pa和60Pa。l负压值测定应在全部门关闭时进行，并应从平面上最里面房间依次向外测定。/058第8页AMMS半污染区和污染区气流流速和流向检测半污染区和污染区气流流速和流向检测l气流流速检测气流流速检测 l（1）单向流气流测定方法 在距送风面0.5垂直截面测定。截面上测点间距不应2，测点数应不少于10个，均匀布置。采取热球风速仪作为检测仪器。l（2）评价标准 应符合生物安全试验室设计每小时换气次数换算气流流速，同时应考虑试验室内气流流速不应0.24m/s。/059第9页AMMS半污染区和污染区气流流速和流向检测半污染区和污染区气流流速和流向检测l气流方向检测和评价气流方向检测和评价l（1）测定方法 用发烟器装置测定，测点在送风口和排风口之间连线方向上，高度为1.1m，均匀布置不少于3个。l（2）评价标准 气流流向应符合GB194896.3.3条要求。/0510第10页AMMSHEPAHEPA滤器物理检测滤器物理检测HEPA滤器物理检测项项 目目送风系统送风系统HEPA滤器检漏滤器检漏 排风排风HEPA滤器检漏滤器检漏 检漏方法粒子计数扫描法，执行洁净室施工及验收规范（JGJ 71）粒子计数扫描法，执行洁净室施工及验收规范（JGJ 71）检漏工况送、排风系统正常运行 l关闭送风，只开排风，室内含尘浓度（0.5m）大于5000粒/L 评价标准 l超出3粒/L，即判断为泄漏 l第一道滤器，超出3粒/L，即判断为泄漏；第二道滤器，超出2粒/升，即判断为泄漏/0511第11页AMMS气密性检测气密性检测 生物安全试验室缓冲间、半污染区、缓冲间和污染区房间气密性应按以下要求进行检测和评价。l1.BSL-3试验室应经过直观检验证实围护结构密封完好。l2.BSL-4试验室除了应经过直观检验证实围护结构密封完好外，还应进行以下检测和评价：/0512第12页AMMS气密性检测气密性检测l方法一：压力衰减试验方法一：压力衰减试验lA.检测方法 关闭送风气密阀门，关闭门窗，开启排风机，使室内外压差到达160Pa，然后关闭排风机和排风密闭阀。lB.评价标准 观察微压差计压力上升速度，每分钟上升不超出16Pa即为合格。/0513第13页AMMS气密性检测气密性检测l诱导泄漏试验诱导泄漏试验lA.检测方法a在室内靠近检测部位,发生0.5m以下粒子NaCl气溶胶，使粒径局部浓度到达1106/m3以上。b.在试验室四面外侧，贴近要评定墙面和门口结构连接处，用光学粒子计数器以大约30cm/min速度在离表面20cm处进行扫描。c.在敞开房间门外，用光学粒子计数器60 cm处进行扫描。lB.评价标准 结构连接无泄漏，门外60 cm处粒子浓度应室内粒子浓度0.1%。/0514第14页AMMSl其它检测项目 除上述检测内容之外，还需要温度、湿度、噪声和照度等检测，这些参数检测均应按洁净室施工及验收规范(JGJ 71)检测方法进行，检测结果符合试验室生物安全通用要求(GB19489)和 生 物 安 全 试 验 室 建 筑 技 术 规 范(GB50346-)或生物安全试验室设计指标即可。/0515第15页AMMSHEPAHEPA滤器对微生物气溶胶滤除率生物学滤器对微生物气溶胶滤除率生物学检测验证检测验证l生物学检测验证结果应表达三方面防护效果：一是HEPA滤器对微生物气溶胶滤除效果；二是能够反应出安装过程中对HEPA滤器有没有损伤；三是反应出HEPA滤器安装是否严密，不漏气。所以，在对生物安全试验室排风口HEPA滤器物理检测完成后，必须用经确认生物学方法进行检测验证。/0516第16页AMMSHEPAHEPA滤器对微生物气溶胶滤除率生物学滤器对微生物气溶胶滤除率生物学检测验证检测验证l生生物物安安全全试试验验室室排排风风口口HEPAHEPA滤滤器器生生物物学学检检测验证主要包含以下几个步骤测验证主要包含以下几个步骤：检验试验室是否处于正常工作状态；本底采样；发生指示微生物气溶胶和指示微生物气溶胶本底采样；一级和二级HEPA滤器后空气样本采集；采集样本培养计数和HEPA滤器滤除率计算。/0517第17页AMMS二、二、生物安全试验室设备检测验证生物安全试验室设备检测验证 l生物安全试验室设备检测验证主要是生物安全柜和安全罩。高压灭菌器检测验证，国家已经有相关技术标准，参考执行即可。/0518第18页AMMS生物安全柜检测和验证生物安全柜检测和验证l级生物安全柜在出厂前就已经完成了物理（包含噪声、照度、向内风速、下送风速、气流流型等）和生物学检测验证，应有检测汇报。生物安全柜在试验室安装后，应进行全方面检测，尤其是生物学检测，包含人员保护、样品保护、交叉污染保护和出风口泄漏检测验证。/0519第19页AMMS生物安全柜检测和验证生物安全柜检测和验证l人员保护检测验证人员保护检测验证 人员保护检测验证详细操作方法能够参考美国国家标准级（层流）生物安全柜（NSF49）。l合合格格判判定定标标准准：从6个AGI-30采样器采集到粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌CFU数量，在每次检测时不得超出10个。采样时间达30 min时，裂隙式空气采样器平板计数不得超出5个菌落。必须重复3次试验。对照平板必须是阳性结果。当平板含有300个以上粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落时，即为阳性。/0520第20页AMMS生物安全柜检测和验证生物安全柜检测和验证l试验样品保护检测验证试验样品保护检测验证 试验样品保护检测验证详细操作方法能够参考美国国家标准NSF49。l合合格格判判定定标标准准：每次试验中，在琼脂平板上粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落数不得超出5个。必须重复3次试验。对照平板必须是阳性结果。当平板含有300个以上粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落时，即为阳性。/0521第21页AMMS生物安全柜检测和验证生物安全柜检测和验证l交叉污染检测验证交叉污染检测验证 交叉污染检测验证详细操作方法能够参考美国国家标准NSF49。l合合格格判判定定标标准准：从攻击侧壁到距离侧壁36 cm之间一些琼脂平板能够得到粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落，它们用作阳性对照。每次测试时，在大于38 cm中心处琼脂平板所得到菌落总数不得超出2个。在安全柜左侧和右侧各做3次重复试验。/0522第22页AMMS生物安全柜检测和验证生物安全柜检测和验证l出风口泄漏检测验证出风口泄漏检测验证 出风口泄漏检测是在美国NSF49标准、欧洲EN12469中没有检测验证项目。造成出风口泄漏主要原因有两个：一是HEPA滤器与固定框之间密封不严，二是HEPA滤器在安装过程中有损伤。对出风口生物检测验证能够及时发觉泄漏。l出风口泄漏检测验证详细操作方法能够参考美国国家标准NSF49人员保护测试验证中气溶胶发生，采样用Andersen 2级采样器在出风口处采样30min。l合合格格判判定定标标准准：每次试验中，在琼脂平板上粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落数不得超出5个。必须重复3次试验。/0523第23页AMMS安全罩检测验证安全罩检测验证 l安全罩检测验证也是生物学检测验证，主要检测HEPA滤器对微生物气溶胶滤除率。l安全罩检测验证原理和方法与试验室HEPA滤器检测原理和方法是一致，在此不作赘述。/0524第24页AMMS/0525第25页